A MEDICAL COMPOSITION BASED ON SHELF FUNGUS

Широкое распространение воспалительных заболеваний пародонта требует поиска и разработки  оптимальных лекарственных средств для их лечения и профилактики. Одной из удобных для применения в клинической стоматологии лекарственной формой является стоматологический гель. Актуальным продолжает оставаться поиск эффективных лекарственных средств для клинической стоматологии на основе природного сырья. Объектом исследования была избрана чага. В клинической медицине используют бефунгин (водный экстракт чаги жидкий), настойку чаги, а также мягкие лекарственные формы (мази, кремы) при лечении заболеваний суставов, варикозного расширения вен [1], [2]. Лекарственные средства чаги обладают болеутоляющим действием, улучшают кровоснабжение, а при длительном применении нормализуют обменные процессы [3], [4], [5]. По характеру биологического действия чагу можно отнести к биостимуляторам, восстанавливающим ферментные системы, подавляемые различными ингибиторами. Это действие, возможно, обусловлено наличием в чаге хромогенного комплекса [4]. Химический состав чаги представлен флавоноидами, полифенолоксикарбоновым (хромогенным) комплексом (ПФК), полисахаридами, птериновыми соединениями, свободными фенолами, микро- и макроэлементами. Липидная фракция содержит фосфолипиды. Из аминокислот преобладают глицин и аспарагиновая кислота [6].  

В организации фармацевтического производства актуальна разработка технологических процессов, обеспечивающих эффективную переработку лекарственного растительного сырья (ЛРС) [7], [8]. В связи с этим перспективным является способ экстрагирования под действием электрических разрядов, основанный на возбуждении электрического разряда в экстракционной камере. Данный способ позволяет значительно упростить операции по получению суммарных экстрактов. В сравнении с классическими методами экстрагирования, данный метод имеет преимущество в  сокращенном времени экстрагирования (суммарный экстракт до полного истощения сырья получается за 2 часа) и сохранении биологически активных веществ в нативном виде, так как температура в камере для экстрагирования не превышает 250С [9], [10]. Целью исследования явилась разработка технологии геля стоматологического на основе БАВ чаги нетрадиционным способом – экстрагированием чаги под воздействием электрических разрядов и разработка методов анализа полученного геля.  

Получение жидкого экстракта чаги для последующего создания геля осуществляли в специальном устройстве, разработанном и запатентованном сотрудниками кафедры физики и математики ПМФИ, которое позволяет под воздействием импульсных электрических разрядов при определенной длительности импульса, частоте разрядов, амплитуде напряжения проводить экстракцию растительного сырья [11]. В качестве экстрагента использовали полиэтиленоксид 400 (ПЭО-400). Определение рН геля и размера частиц проводили по методикам ГФ ХIV [12], [13]. Подлинность полученного геля подтверждали с помощью качественных реакций на биологически активные вещества чаги: хромогенный комплекс, свободные фенолы и свободные углеводы.  Идентификацию в геле ПФК проводили реакцией осаждения кислотой хлористоводородной разведенной. Для идентификации свободных фенолов использовали реакции нитрования, нитрозирования и образования азокрасителя. Для идентификации свободных фенолов в геле использовали метод УФ-спектрофотометрии, а также метод тонкослойной хроматографии, применяя в качестве подвижной фазы смесь бутанол-бензол (2:1), а в качестве стандартного образца 0,1%-ный раствор резорцина. Детектирование зон адсорбции осуществляли в УФ-свете при длине волны 365 нм до и после обработки хроматограмм 1%-ным раствором диазотированной сульфаниловой кислоты [10]. Идентификацию  свободных углеводов проводили с помощью качественных реакций с 0,2%-ными растворами  резорцина и антрона и методом ТСХ после предварительного осаждения хромогенного комплекса раствором хлористоводородной кислоты. Для ТСХ-анализа свободных углеводов использовали смесь  бутанол: ледяная уксусная кислота: вода (4:1:2). В качестве стандартных образцов применяли 1%-ные растворы глюкозы и ксилозы. Зоны адсорбции проявляли анилинфталатным реактивом [10]. Количественное определение ПФК проводили гравиметрически путем осаждения 25%-ным раствором кислоты хлористоводородной [10], [13]. Для количественного определения свободных фенолов применяли метод непосредственной УФ-спектрофотометрии при длине волны 275 нм, используя в качестве стандартного образца резорцин [9], [10]. Количественный анализ свободных углеводов проводили спектрофотометрически при длине волны 490 нм, которая соответствует максимуму поглощения  продукта взаимодействия углеводов, содержащихся в геле, с резорцином в сернокислой среде. Параллельно проводили аналогичное определение с раствором стандартного образца глюкозы [10], [14].  Определение кинетики высвобождения БАВ из геля проводили методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану [12]. Этот метод позволяет количественно оценить высвобождение биологически активных веществ из стоматологического геля и достаточно прост в исполнении.

С целью установления оптимального соотношения сырья чаги и экстрагента измельченное сырье помещали в экстракционную камеру электроразрядной установки и заливали экстрагентом ПЭО 400  в соотношении 1:5, 1:10, 1:15 и 1:20. Смесь сырья и экстрагента подвергали обработке импульсами напряжения в течение 25 минут, используя разработанные ранее параметры электроразрядной технологии [9], [10]. В полученных экстрактах гравиметрическим методом определяли содержание ПФК (таблица 1). Максимальный выход ПФК наблюдался при соотношении сырья и экстрагента 1:15.

Изучение наиболее эффективного числа электрических разрядов (табл. 2) показало, что  оптимальным числом разрядов является 600, так как именно в этом случае наблюдается максимальное извлечение из сырья ПФК (4,61%).

При числе разрядов от 300 до 600 наблюдается резкое увеличение выхода  комплекса в экстракт. При количестве разрядов более 600 мы видим плавное уменьшение выхода ПФК, что, по-видимому, можно объяснить процессом обратного переноса суммы биологически активных веществ из среды в клетку.

Далее нами был произведен выбор основы для предлагаемой лекарственной формы. При выборе основы мы учитывали следующие требования: основа должна обладать хорошей мажущей способностью, иметь оптимальные консистентные свойства, должна обладать устойчивостью в микробиологическом отношении, хорошо воспринимать действующие вещества (в данном случае ПФК, свободные фенолы и углеводы) и должна быть химически устойчива [10]. Мы остановили свой выбор на гидрофильных основах, состоящих из полиэтиленоксидов с различной молекулярной массой 1500 и 400 в определенных соотношениях и основе, состоящей из ПЭО 400 и аэросила. На данных основах нами были приготовлены модельные смеси стоматологического геля (таблица 3), которые в течение 14 дней хранились при температуре 20-250С и влажности 60%.

Из данных таблицы 3 можно сделать вывод, что образец модельной смеси геля на основе ПЭО 400 и ПЭО 1500 в соотношении 3:1 показал наилучшую стабильность при хранении, поэтому именно эта основа была выбрана нами для приготовления стоматологического геля.

Для прогнозирования биологической доступности важное значение имеет степень и скорость высвобождения биологически активных веществ из стоматологического геля. Для этого мы определяли кинетику высвобождения ПФК, свободных фенолов и свободных углеводов из стоматологического геля методом равновесного диализа (таблица 4).

В результате проведенного эксперимента установлено, что за 120 минут диализа высвобождается примерно 67% ПФК,  77% свободных фенолов и 81% свободных углеводов, что свидетельствует о достаточно высокой биологической доступности разработанного стоматологического геля.

Разработку методов анализа и стандартизацию предлагаемого стоматологического геля проводили на 6 образцах.  Все образцы геля представляли собой однородную массу коричневого цвета. Потенциометрическое определение рН водного извлечения геля показало, что во всех образцах рН находится в пределах 6,6-7,2. Известно, что фармакологическая активность чаги обусловлена наличием в ее составе ПФК, свободных фенолов и углеводов. Поэтому стандартизацию геля мы проводили именно по этим группам биологически активных веществ. Результаты определения подлинности и количественного содержания представлены в таблицах 5-6.

Предложенные методики просты в выполнении, чувствительны и не требуют использования дорогостоящих реактивов. С их помощью можно достоверно качественно и количественно определять биологически активные вещества в предложенном лекарственном средстве.

Установление норм содержания БАВ в геле  проводили на основании исследований 6 образцов геля. Результаты анализа стоматологического геля по показателю «Количественное определение» представлены в таблице 7.

Таким образом, в результате проведенных исследований нами предложена оригинальная технология получения геля на основе чаги и методы анализа, достоверно оценивающие качество геля.