IMMUNOMORPHOLOGICAL BLOOD PARAMETERS OF RED FOX PUPS (VULPES VULPES) WITH THE INTRODUCTION OF SUBALIN

ИММУНОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ ЩЕНКОВ КРАСНОЙ ЛИСИЦЫ (VULPES VULPES) ПРИ ВВЕДЕНИИ СУБАЛИНА

Научная статья

Сюткина А.С.^1, *, Домский И.А.²

¹ ORCID: 0000-0003-3234-8602;

^{1, 2} Всероссийский научно-исследовательский институт охотничьего хозяйства и звероводства им. проф. Б.М. Житкова, Киров, Россия

* Корреспондирующий автор (sannetochka[at]mail.ru)

Аннотация

В статье приведены результаты исследования влияния пробиотика субалин на иммуноморфологические показатели крови молодняка красной лисицы в двух и восьми месячном возрасте. Оценку влияния пробиотика проводили по основным гематологическим, биохимическим и иммунологическим показателям крови. В результате исследований установили, что применение субалина в течение 5 дней во всех опытных группах зверей оказывает влияние на иммуноморфологические показатели крови: у щенков в 8 месячном возрасте увеличивается количество эритроцитов на 9,8%, уровня гемоглобина на 7,2%, а уровень лейкоцитов снижается на 20-25%, повышает количество общего белка, β -, γ – глобулинов, бактерицидную и фагоцитарную активность сыворотки крови.

Ключевые слова: субалин, красная лисица, кровь, сыворотка крови, белковые фракции, фагоцитарная реакция нейтрофилов, бактерицидная активность.

IMMUNOMORPHOLOGICAL BLOOD PARAMETERS OF RED FOX PUPS (VULPES VULPES) WITH THE INTRODUCTION OF SUBALIN

Research article

Syutkina A.S.^1, *, Domsky I.A.²

¹ ORCID: 0000-0003-3234-8602;

^{1, 2} All-Russian Scientific Research Institute Of Hunting And Fur Farming Named After Professor B.M. Zhitkov, Kirov, Russia

* Corresponding author (sannetochka[at]mail.ru)

Abstract

The article presents the results of a study of the effect of the probiotic subalin on the immunomorphological blood parameters of red fox pups at two and eight months of age. The effect of the probiotic was evaluated according to the main hematological, biochemical and immunological blood parameters. As a result of the research, the study demonstrates that the use of subalin for 5 days in all experimental groups of animals has an effect on the immunomorphological blood parameters: in pups at the age of 8 months, the number of red blood cells increases by 9.8%, the level of hemoglobin by 7.2%, and the level of white blood cells decreases by 20-25%, increases the amount of total protein, β -, γ – globulins, bactericidal and phagocytic activity of blood serum.

Keywords: subalin, red fox, blood, blood serum, protein fractions, phagocytic reaction of neutrophils, bactericidal activity.

Введение

На разных этапах постнатального онтогенеза в организме молодняка красной лисицы происходят изменения иммуноморфологических показателей крови. В процессе онтогенетического развития на организм животных оказывают влияние внешние стресс- факторы: отсадка от матери, смена кормления, в период перехода на основной рацион, плановые ветеринарные мероприятия (иммунизация, витаминизация) и т.д. [7], [8], [9]. В настоящее время для снижения уровня стресса применяют различные биологически активные вещества разной этиологии: витаминно-минеральные, ферментные препараты и пробиотики.

Материалы и методы исследования

Для проведения исследований использовали пушных зверей семейства Canidae: лисица красная «Огневка Вятская» (Vulpes vulpes), молодняк 2 и 8 месячного возраста. Группы зверей сформированы по методу парных аналогов, в опыт отбирали клинически здоровых животных, зверей выборочно взвешивали.

В работе использован пробиотик субалин, в основе препарата использован штамм В. subtilis 2335 (105) ВКПМ В4759, обезвоженный в защитной среде, содержащей сахарозу и желатин.

Скармливание пробиотика субалин проводили в течение 5 дней в дозе 1-2 *10⁸ КОЕ/кг смешивая препарат с кормом. Взятие крови проводили до введения и через 5 дней применения субалина.

Эксперименты на животных проводили в соответствии с методическими указаниями Балакирева Н.А. и др., [2], [6]. Работа выполнена с соблюдением международных гуманном отношении к животным (WMA Declaration of Helsinki – Ethical Principles for Medical Research Involving Human Subjects, 2013), принципов гуманности, изложенных в Директиве Европейского парламента и Совета Европейского Союза 2010/63/EC «О защите животных, использующихся для научных целей» (Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes, 2010), в соответствии с правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных. [Приложение к Приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.1977]. [10]

Методы исследований

Кровь для исследований у красной лисицы «Огневка Вятская» брали (n=10 каждой группы) из латеральной подкожной вены голени до начала опытов и в конце проведения опытов.

Биохимические методы

Морфологические показатели крови животных определяли с использованием автоматического гематологического анализатора ERMA INC модель PCE-90 (Япония). Белковые фракции в сыворотке крови определяли нефелометрическим методом по В.Я. Антонову с соавт. [1], бактерицидную активность сыворотки крови определяли по методу Т.А. Кузьминой, О.В. Смирновой [5], опсоно-фагоцитарную реакцию по А.С. Лабинской [4].

Статистические данные

Полученные данные обрабатывали с использованием пакетов программ MS Excel и Statgraphics общепринятыми методами вариационной статистики, сравнение различий между группами проводили с применением непараметрического критерия (U) Вилкоксона-Манна-Уитни. Статистически значимыми считали различия с р<0,05.

Результаты исследований

Скармливание пробиотика субалин щенкам красной лисицы проводили в день отсадки от матери, при переводе на основной рацион. За щенками опытной и контрольной групп проводили наблюдения и фиксировали изменения поведения (угнетение, повышенная активность, отказ от корма и т.д.). Изучение влияния субалина на иммуноморфологические показатели крови в организме красной лисицы проводили в два этапа. Первый этап исследования осуществляли на щенках красной лисицы в возрасте 2 месяцев.

Результаты исследований представлены в таблице 1.

 

Таблица 1 – Результаты исследований иммуноморфологических показателей крови у щенков красной лисицы в 2 и 8 месячном возрасте

Показатели	Возраст группы
	2 месяца		8 месяцев
	Опытная группа (n=10)	Контрольная группа (n=10)	Опытная группа (n=10)	Контрольная группа (n=10)
количество эритроцитов, 1012г/л	8,23±1,39	8,88±1,23	9,42±0,55*	8,58±0,29*
количество лейкоцитов, 109 /л	5,47±0,2*	7,33±0,2*	5,2±0,12*	6,5±0,35*
гемоглобин, г%	13,4±0,11	13,4±0,07	14,8±0,6	13,8±0,38
общий белок, г %	7,86±0,6*	6,03±0,6*	7,9±0,6*	6,3±0,6*
Альбумины, %	53,9±8,7*	67,8±1,0*	50,8±3,7*	65,8±1,0*
α- глобулин, %	8,76±1,76	7,88±2,07	8,6±1,0	7,8±0,7
β – глобулины, %	20,88±11,94*	9,42±5,54*	20,8±1,94*	9,42±3,54*
γ – глобулин, %	16,39±3,06	14,88±2,78	16,9±2,06	14,8±1,8
Общие иммуноглобулины, г %	144,67±67,7	139±64,94	155,7±27,7	139±24,94
Бактерицидная активность сыворотки крови	47,7±1,4*	17,1±1,54*	54,5±6,7*	30,2±4,4*
Фагоцитарная активность нейтрофилов	40,6±0,15*	22,8±0,22*	45±0,25*	26,8±0,22*

Примечание: *p<0,05  

Как видим из таблицы 1, скармливание пробиотика субалин щенкам 2 месячного возраста не оказывает значительного влияния на гематологические показатели крови. Количество эритроцитов и уровень гемоглобина в обеих группах остается в пределах физиологической нормы. Достоверное снижение (p<0,05) лейкоцитов в опытной группе зверей на 25 % происходит на 5- й день применения пробиотика.

При изучении влияния субалина на иммуноморфологические показатели крови щенков красной лисицы в 8 месячном возрасте на 5 день применения субалина происходит достоверное увеличение (p<0,05) количества эритроцитов на 9,8%, уровня гемоглобина на 7,2%, а так же снижение количества лейкоцитов у зверей опытной группы (на 20 %).

При изучении сыворотки крови у щенков в 2 месячном установлено, что применение субалина оказывает влияние на уровень и содержание белковых фракций в сыворотке крови: у зверей опытной группы происходит достоверное (p<0,05) снижение количества альбуминов, и составляет 53,89±8,7%, что на 14% меньше, чем у зверей контрольной группы, а уровень α- глобулинов и γ – глобулинов у щенков обеих групп значительно не менялся. При этом уровень β – глобулинов у зверей опытной группы достоверно (p<0,05) выше (в 2,2 раза), чем у зверей контрольной группы. Количество общих иммуноглобулинов у зверей опытной группы выше, чем в контрольной и составлял 144,67±67,7 и 139±64,94 соответственно, однако разница полученных результатов недостоверна. При оценке бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов в опытной группе зверей показатели достоверно выше.

При исследовании сыворотки крови красной лисицы в 8 месячном возрасте, установили, что субалин влияет на соотношение белка и белковых фракций. Таким образом, установлено, что у зверей опытной группы уровень общего белка увеличивается на 20,25%. При определении количества α -, β -, γ – глобулинов отмечено увеличение этих показателей в опытной группе зверей на 9,3; 54,7 и 12,4 % соответственно при этом количество альбуминов снижается на 29,5 %. При определении некоторых иммунологических показателей на 5-й день после применения субалина, установлено, что в опытной группе щенков увеличение бактерицидной активности на 3,7 %, и общих иммуноглобулинов на 10,6 %. по сравнению с контрольной группой. Фагоцитарная активность нейтрофилов достоверно выше в опытной группе зверей (p< 0,05).

Заключение

Таким образом, исходя полученных данных применение пробиотика субалин целесообразно для снижения стресс-факторов, таких как: отсадка от матери, переход на основной рацион, проведение плановых ветеринарных мероприятий, влияющих на организм щенков в целом, а также оказывает влияние на некоторые гематологические иммуноморфологические показатели крови.

Конфликт интересов Не указан.

Conflict of Interest None declared.

Список литературы / References

1. Антонов, Б.И. Лабораторные исследования в ветеринарии - бактериальные инфекции / Б.И. Антонов. М.: Агропромиздат. ─С. 70-72
2. Балакирев, Н.А. Методические указания проведения научно-хозяйственных опытов по кормлению пушных зверей / Н.А. Балакирев, В.К. Юдин – М.: Россельхосиздат. ─ 1994. ─31 с.
3. Дорофейчук, В.Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом / В.Г. Дорофейчук // Лабораторное дело ─1968. -№ 1─С. 12.
4. Лабинская, А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований / А.С. Лабинская. М.: Медицина. ─1981. ─С. 92.
5. Кузьмина, Т.А. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом фотонефелометрии / Т.А. Кузьмина, О.В. Смирнова //Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. ─№4 ─С. 8-11.
6. Овсянников А.И. Основы опытного дела в животноводстве / А.И. Овсянников. М.: Колос, ─1976.─ 304 с.
7. Соловьева А.С. Результаты применения пробиотика субалин на молодняке енотовидной собаки и красной лисицы / А.С. Соловьева, И.А. Домский // В сборнике: Современные научно-практические достижения в ветеринарии. Сборник статей Международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию С. 188-189.
8. Тебенькова Т.В. Белковый обмен у доместицированных лисиц (Vulpes vulpes L.) разных генотипов в постнатальном онтогенезе / Т.В. Тебенькова, О.Н. Сухих, А.Е. Кокорина и др. // Международный вестник ветеринарии. 2018. № 4. С. 115-119.
9. Тюфяков В.С. Оценка поствакцинального иммунитета при иммунизации щенков енотовидной собаки против чумы плотоядных на фоне применения пробиотика субалин / В.С. Тюфяков, А.С. Сюткина, И.И. Окулова // В книге: VII Международная конференция молодых ученых: биофизиков, биотехнологов, молекулярных биологов и вирусологов. В рамках площадки открытых коммуникаций OpenBio-2020. 2020. С. 353-355.
10. Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных. [Приложение к Приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.1977].

Список литературы на английском языке / References in English

1. Antonov, B. I. Laboratornye issledovanija v veterinarii - bakterial'nye infekcii [Laboratory tests in veterinary medicine - bacterial infections] / B. I. Antonov. Moscow: Agropromizdat. - 1986. - pp. 70-72 [in Russian]
2. Balakirev, N. A. Metodicheskie ukazanija provedenija nauchno-khozjajjstvennykh opytov po kormleniju pushnykh zverejj [Methodological guidelines for conducting scientific and economic experiments on feeding fur-bearing animals] / Balakirev N. A., Yudin V. K. //. - M.: Rosselkhosizdat. - 1994. - 31 p. [in Russian]
3. Dorofeychuk, V. G. Opredelenie aktivnosti lizocima nefelometricheskim metodom [Determination of lysozyme activity by the nephelometric method] / V. G. Dorofeychuk // Laboratornoe delo [Laboratory business], 1968. - No. 1,p. 12 [in Russian]
4. Labinskaya, A. S. Mikrobiologija s tekhnikojj mikrobiologicheskikh issledovanijj [Microbiology with the technique of microbiological research] / A. S. Labinskaya. M.: Medicine. -1981. - p. 92 [in Russian]
5. Kuzmina, T. A. Opredelenie baktericidnojj aktivnosti syvorotki krovi metodom fotonefelometrii [Determination of the bactericidal activity of blood serum by photonephelometry] / Kuzmina T. A. Smirnova O. V. // Zhurnal mikrobiologii, ehpidemiologii i immunologii [Journal of Microbiology, Epidemiology and Immunology].-1966. - No. 4, pp. 8-11 [in Russian]
6. Ovsyannikov A. I. Osnovy opytnogo dela v zhivotnovodstve [Fundamentals of experimental business in animal husbandry] / A. I. Ovsyannikov. Moscow: Kolos, -1976. - 304 p. [in Russian]
7. Solovyova A. S. Rezul'taty primenenija probiotika subalin na molodnjake enotovidnojj sobaki i krasnojj lisicy [Results of the use of the probiotic subalin on young raccoon dogs and red foxes] / Solovyova A. S., Domsky I. A. // V sbornike: Sovremennye nauchno-prakticheskie dostizhenija v veterinarii. Sbornik statejj Mezhdunarodnojj nauchno-prakticheskojj konferencii, posvjashhennojj 80-letiju [In the collection: Modern scientific and practical achievements in veterinary medicine. Collection of articles of the International scientific and practical conference dedicated to the 80th anniversary] pp. 188-189 [in Russian]
8. Tebenkova T. V. Belkovyjj obmen u domesticirovannykh lisic (Vulpes vulpes L.) raznykh genotipov v postnatal'nom ontogeneze [Protein metabolism in domesticated foxes (Vulpes vulpes L.) of different genotypes in postnatal ontogenesis] / V. Tebenkova, O. N. Sukhykh, A. E. Kokorina et al. // Mezhdunarodnyjj vestnik veterinarii [International Bulletin of Veterinary Medicine]. 2018. № 4, pp. 115-119 [in Russian]
9. Tyufyakov V. S. Ocenka postvakcinal'nogo immuniteta pri immunizacii shhenkov enotovidnojj sobaki protiv chumy plotojadnykh na fone primenenija probiotika subalin [Evaluation of post-vaccination immunity during immunization of raccoon dog puppies against carnivorous plague against the background of the use of the probiotic subalin] / V. S. Tyufyakov, S. Syutkina, I. I. Okulova // V knige: VII Mezhdunarodnaja konferencija molodykh uchenykh: biofizikov, biotekhnologov, molekuljarnykh biologov i virusologov. V ramkakh ploshhadki otkrytykh kommunikacijj OpenBio [The VII International Conference of Young Scientists: Biophysicists, Biotechnologists, molecular biologists and virologists. Within the framework of the open communications platform OpenBio-2020]. 2020. Pp. 353-355 [in Russian]
10. Pravila provedenija rabot s ispol'zovaniem ehksperimental'nykh zhivotnykh [Rules for carrying out work using experimental animals. [Appendix to the Order of the Ministry of Health of the USSR No. 755 of 12.08.1977] [in Russian]