EVALUATION OF THE EFFECTIVENESS OF THE RNA-CONTAINING BIOLOGICALLY ACTIVE ADDITIVE MONADASIL ON THE "FORCED SWIMMING" MODEL

В век научно-технического прогресса, когда объём требований к человеку как к социальному элементу общества меняется практически ежедневно в связи с расширением количества компетенций, значительно возрастает уровень стресса, который в первую очередь характеризуется чувством утомления, пассивностью, неумением сосредоточиться на поиске решения задач, развитием депрессии и снижением выносливости. В связи с этим особую актуальность приобретает медикаментозная коррекция состояния стресса. К группе препаратов, обладающих соответствующим спектром фармакологического действия, относят адаптогены. На этапе начальной коррекции состояния стресса достаточно ограничиться биологически активными добавками, которые мягко корректируют состояние человека. К таким средствам можно отнести Монадасил (подъязычная таблетка 750 мг). Уникальность данного средства состоит в том, что в его состав, кроме классического набора компонентов природного происхождения, входят рибонуклеиновые кислоты (РНК), для которых выявлены следующие биологические эффекты: мембраностабилизирующий, нормализирующий влияние на активность фермента NO-синтазы, который в избытке образуется при активном воспалительном процессе и отрицательно сказывается на функции эндотелия; антитоксический, антианемический,  неспецифический иммуномодулирующий, противовоспалительный и регенерирующий.

Спектр патологических состояний, при которых рекомендуют использование препаратов на основе РНК, весьма разнообразен: это инфекционные заболевания, протекающие на фоне иммунодефицитных состояний, применение в составе комплексной терапии (хронические неспецифические заболевания легких, хронические рецидивирующие вирусные и бактериальные процессы, плохо поддающиеся стандартной терапии), при лейкопении, агранулоцитозе, для ускорения регенерации тканей при дистрофиях и язвенных дефектах, для предупреждения или уменьшения интенсивности аллергических реакций. Имеются данные об эффективности препарата в комплексной терапии герпетических кератитов, вирусного гепатита и некоторых других заболеваний. Препараты РНК рекомендуют применять с целью профилактики острых респираторных вирусных инфекций, в том числе гриппа, предотвращения снижения иммунного статуса при стрессах, умственном и физическом переутомлении, а также для поддержания физического состояния лиц старшего возраста

Цель работы: оценить влияние биологически активной добавки Монадасил на выносливость крыс в условиях поведенческого теста «вынужденное плавание».

Условия работы с экспериментальными животными соответствовали приказу Минздрава РФ от 23.08.2010 №708н «Об утверждении правил лабораторной практики» и директиве ЕП и СЕС от 22 сентября 2010 г. «По охране животных, используемых в научных целях». Проведение исследования одобрено Комитетом по этике ФГБОУ ВО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России  (протокол №111 от 29.11.2018).

Эксперимент выполнен на 20 белых нелинейных  крысах самцах массой 32-59 г в возрасте 1-2 месяца. Животных содержали по пять особей в клетках 1500 U Eurostandart Type IVS («Tecniplast», Италия) при температуре воздуха 20-22°С и относительной влажности 40-60%, при естественном освещении на стандартной лабораторной диете со свободным доступом к воде и пище. Депривацию корма осуществляли за 2 ч до начала теста.

Порошок таблеток БАД 100 мг (экспериментальная группа) и 100 мг крахмала (контрольная группа) вводили перорально за 30 минут до эксперимента.

По окончании эксперимента для исследования были взяты показатели время заплыва (с).

Поведенческий тест «вынужденное плавание» впервые был предложен Р. Полсолтом в 1977 г. Суть метода заключается в том, что крысы, вынужденные плавать в замкнутом пространстве без возможности выхода из стрессовой ситуации, отказываются от активных действий, принимают позу «зависания», достаточную только для удержания головы на поверхности воды – стадия иммобилизации. Продолжительный отказ от активного плавания (иммобилизация, поведение отчаяния) является показателем депрессивного состояния, развивающегося в ситуации невозможности избежать опасности.

Методом исследования выносливости лабораторных животных является тест «Вынужденное плавание с грузом». Главным условием при выполнении теста является интенсивность нагрузки. Из литературных источников известно, что при плавании с грузом 5% от массы крысы устанавливается «устойчивое состояние». На основании этого, вынужденное плавание мелких лабораторных животных предпочтительно моделировать с грузом утяжеления 10–13%

На результаты теста «Вынужденное плавание с грузом» также оказывают индивидуальные особенности животного и влияние внешних факторов

Физическую выносливость животных в тесте «Вынужденное плавание с грузом» оценивали по длительности плавания с грузом 12% от массы животного, прикреплением к корню его хвоста грузика. Массу животного определяли с точностью до 1 г. Длительность плавания замеряли секундомером с точностью до 1 с. Моментом окончания эксперимента считали утопление животного в виде неспособности всплыть на поверхность воды в течение 8 с или отказ животного от плавания (погружение на дно более чем на 10 с). Усталость животного часто сопровождалось вращением и заваливанием на бок в толще воды.

Животных помещали в цилиндрический сосуд (высота 70 см, диаметр 35 см), заполненный водой на высоту 25 см, сверху дополнительно устанавливался цилиндрический бортик высотой 20 см. В данных условиях крыса не может выбраться, найти опору в нем. Температуру воды поддерживали на уровне около 30-31°С. Поведение регистрировали. Отмечали основные тестируемые параметры: длительность первого эпизода активного плавания (с) (энергичные движения всеми конечностями), общее время плавания (с). Полученные данные заносили в дневник наблюдений. Тестирование животных проводили три дня.

Исследовали выносливость животных, подвергшихся введению. В пределах одной серии тестировали 10 животных. Для каждого животного индивидуально рассчитывали массу груза как 10%, 12% от массы животного. Животные исследовались по одному. Тестирование проводили в два этапа. Первый этап – 1 день. Животных помещали с грузиком в цилиндрический сосуд с водой и секундомером регистрировали время заплыва (от момента опускания животного до погружения на дно). Второй этап – 10 день. Эксперимент повторяли аналогично. Выборку экспериментальных значений получали в соответствии с ОФС.1.1.0012 «Валидация аналитических методик», массив данных обрабатывали согласно ОФС.1.1.0014 «Статистическая обработка результатов определения специфической фармакологической активности лекарственных средств биологическими методами»

Выборки результатов для каждого способа введения порошка таблеток БАД 100 мг, крахмала 100 мг формировали по данным всех серий  (табл. 1, табл. 2).

По результатам теста «Вынужденное плавание с грузом» динамика работоспособности животных при пероральном введении характеризуется увеличением показателя длительность плавания при введении испытуемого образца Монадасила по сравнению с контрольной группой, при одинаковом весе груза 12% от массы животного. Анализируя таблицы 1 и 2, можно сделать вывод, что среднее время заплыва крыс, которым вводили Монадасил, увеличилось до 271,5 сек, что практически в 2 раза больше (1,97 раза) относительно тех животных, которым вводили крахмал, где среднее время составило 137,3 секунд. Из чего следует, что Монадасил повышает выносливость и физическую активность лабораторных животных в условиях эксперимента и может в дальнейшем использоваться для этих целей.

Для статистической оценки достоверности полученных результатов для Монадасила по характеристике линейности использовали зависимость времени удержания на воде (с) от расчётной величины дозы крахмала в мг/кг массы животного. Полученные результаты представлены в таблицах 3 и 4.

Затем полученные результаты оценили согласно характеристике повторяемости  (табл. 5, табл. 6). За основу расчётов взяли условное соотношение времени удерживания крысы в воде (с) к дозе испытуемого образца (г/кг массы животного). Результаты расчётов показали, что выборка однородна, хотя и отягощена систематической ошибкой. Что ещё раз свидетельствует о том, что эффект Монадасила не относится к дозозависимым.

Исходя из того, что эффект Монадасила в отношении крыс не является дозозависимым, выполнили статистическую обработку выборок, соответствующих времени удерживания крыс на воде для испытуемого образца Монадасила по отношению к контролю (табл. 1, табл. 2), результаты представлены в таблице 7. При этом было установлено, что выборки характеризуются разбросом значений, не выходящих за пределы предупреждения (±2S). Рассчитанное значение критерия Фишера составило 2,01. Отношение среднего времени удерживания на воде после применения Монадасила к контролю составило 1,98. Таким образом, можно прийти к заключению, что Монадасил в два раза повышает выносливость и устойчивость крыс к факторам стресса.

1. Эффект Монадасила не является дозозависимым.

2. Монадасил является перспективным средством в плане его дальнейшего изучения в качестве адаптогена.