Submit manuscript Sign in / Sign up
Advanced search
Article sections

PHAGOCYTIC ACTIVITY OF NEUTROPHILS AND THE AMOUNT OF REGULATORY T-LYMPHOCYTES IN THE PERIPHERAL BLOOD OF WOMEN WITH INFERTILITY AND OVARY FOLLICULAR CYSTS

Research article
Antropova N.V.
Sotnikova N.Yu.
DOI:
https://doi.org/10.18454/IRJ.2016.44.052
Issue: № 2 (44), 2016
Published:
2016/15/02
PDF

Антропова Н.В.1, Сотникова Н.Ю.2

1 ORCID: 0000-0003-4538-8507 Аспирант, ГБОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия» Минздрава России, 2 Профессор, доктор медицинских наук, ФГБУ «Ивановский НИИ материнства и детства имени В. Н. Городкова» Минздрава России, Иваново, Россия

ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ И СОДЕРЖАНИЕ РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЖЕНЩИН С БЕСПЛОДИЕМ И ФОЛЛИКУЛЯРНЫМИ КИСТАМИ ЯИЧНИКОВ

Аннотация

В статье рассмотрены особенности нейтрофльного звена иммунитета и содержания в периферической крови регуляторных Т-лимфоцитов с фенотипами CD4+CD25+ и CD4+CD152+ у женщин с беслодием и фолликулярными кистами яичников в зависимости от тактики их лечения и вида протокола ЭКО. Показано, что персистенция фолликулярных кист яичников снижала, а регресс способствовал восстановлению бактерицидной активности нейтрофилов в протоколе ЭКО. Фолликулярные кисты яичников способны вызывать стойкое  повышение уровня Treg c фенотипом CD4+CD152+.

Ключевые слова: нейтрофилы, фагоцитоз, регуляторные Т-лимфоциты, фолликулярные кисты яичников, бесплодие, ЭКО.

 Antropova N.V.1, Sotnikova N.Yu. 2

1 Postgraduate student, Ivanovo State Medical Academy of Ministry of Health of Russia, 2 Professor, MD, Ivanovo Research Institute of Maternity and Childhood named by V.N. Gorodkov of Ministry of Health of Russia

PHAGOCYTIC ACTIVITY OF NEUTROPHILS AND THE AMOUNT OF REGULATORY T-LYMPHOCYTES IN THE PERIPHERAL BLOOD OF WOMEN WITH INFERTILITY AND OVARY FOLLICULAR CYSTS

Abstract

The article deals with specifics of neutrophil immunity factors and of the amount of regulatory T lymphocytes (phenotype CD4+CD25+ and CD4+CD152+) in the peripheral blood of women with infertility and follicular cysts depending on therapy tactics and IVF protocol type. It is shown that persistence of ovary follicular cysts tends to inhibit, while their regress tends to promote the restoration of neutrophils’ bactericidal activity during IVF protocol. Ovary follicular cysts can produce lasting increase in phenotype CD4+CD152+ Treg levels.

Keywords: neutrophils, phagocytosis, regulatory T-lymphocytes, follicular ovarian cysts, infertility, IVF

Появление в клинической практике метода ЭКО стало новым этапом в лечении бесплодия в супружеских парах [1]. Одним из условий начала стимуляции суперовуляции является отсутствие в яичниках пациентки фолликулярных кист или кист желтого тела размером 20мм и более [4]. Частота подобных яичниковых образований у пациенток с бесплодием составляет 15-20%. Из них 80% являются опухолевидными образованиями, преимущественно фолликулярными кистами [2]. Фолликулярная киста представляет собой доброкачественное опухолевидное образование, происходящее из доминантного фолликула, если не произошла овуляция [2, 7, 10]. В последнее время многие исследователи подтверждают роль врожденного иммунитета в развитии фолликулярных икст яичников [5]. По данным литературы фолликулярные кисты развиваются на фоне сниженной фагоцитарной активности нейтрофилов, однако нет исследований, посвященных исследованию изменениям нейтрофильного звена иммунитета у женщин с бесплодием и фолликулярными кистами, проходящих программу ЭКО. Доказано, что фолликулярные кисты яичников – гормонпродуцирующие образования. Они способсствуют повышению уровня эстрадиола в крови [3, 6]. Отмечено, что эстрогены могут увеличивать содержание регуляторных Т-лимфоцов или Treg [8]. Но уровень Treg у женщин с бесплодием и фолликулярными кистами, проходящих программу ЭКО, до настоящего момента не изучался. Также отсутствуют данные о влиянии различных тактик ведения кист в протоколе ЭКО на содержания этого пула лимфоцитов.

Целью нашей работы было установить особенности фагоцитарной активности нейтрофилов и содержания регуляторных Т-лимфоцитов в периферической крови женщин с бесплодием и фолликулярными кистами яичников в зависимости от тактики их ведения в программе ЭКО.

Материалы и методы. Исследование проведено на базе отделения вспомогательных репродуктивных технологий ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В. Н. Городкова» Минздрава России. Были обследованы 79 женщин с бесплодием и фолликулярными кистами яичников. Первую группу составили 6 женщин с бесплодием и фолликулярными кистами яичников, которым успешно проведено консервативное лечение кист эстроген-гестагенными препаратами перед ЭКО и десенситизация функции яичников выполнена агонистами гонадотропин релизинг гормона. Во вторую группу вошли 11 женщин с бесплодием и фолликулярными кистами яичников, которым успешно проведено консервативное лечение кист эстроген-гестагенными препаратами перед ЭКО и стимуляция суперовуляции яичников выполнена с применением антагонистов гонадотропин релизинг гормона. Третью группу составили 8 женщин, с бесплодием и фолликулярными кистами яичников, которым выполнена трансвагинальная пункция кисты перед программой ЭКО и начата десенситизация функции яичников агонистами гонадотропин релизинг гормона на 21-22 день цикла, предшествующего стимуляции суперовуляции. В четвуртую вошли 15 пациенток с бесплодием и фолликулярными кистами яичников, которым выполнена трансвагинальная пункция кисты перед программой ЭКО и начата  стимуляция суперовуляции яичников с 2-3 цикла с применением антагонистов гонадотропин релизинг гормона. Пятую группу составили  39 женщин с бесплодием и фолликулярными кистами яичников, которым десенситизация гипофиза была начата на фоне фолликулярных кист яичников. Эти пациентки разделились на две подгруппы: 5а - 23 женщины, у которых к началу стимуляции суперовуляции кист не диагностировано и 5б   - 16 женщин, не имевших к началу стимуляции суперовуляции регресса кист, им выполнялась трансвагинальная пункция образования. В группу контроля вошли 20 практически здоровых фертильных женщин.

Материалом для исследования служили периферическая венозная кровь, полученная на 15-16 день менструального цикла в день трансвагинальной пункции яичников с целью получения ооцитов. Функциональную активность нейтрофилов изучали с помощью спонтанного (НСТ) и индуцированного (НСТЗ) НСТ-тестов, индекса фагоцитарного резерва нетрофилов (НСТЗ-НСТ)/НСТ). Уровень CD4+CD25+, CD4+CD152+ лимфоцитов определяли с помощью моноклональных антител (CALTAG Laboratories, USA) методом двухцветной проточной цитофлюориметрии на приборе «BD FACSCantoTMII» («Becton Dickinson», USA).

Результаты. Спонтанный и стимулированный НСТ тесты, а также ИФР в группе женщин, у которых на момент начала протокола с агонистами гонадотропин релизинг гормона кисты были пролечены с использованием КОК, были сопоставимы с показателями здоровых фертильных женщин. В то же время у пациенток, которым выполнялась трансвагинальная пункция кисты перед программой ЭКО, и стимуляция суперовуляции яичников проводилась с 2-3 цикла с применением антагонистов гонадотропин релизинг гормона, был достоверно снижен ответ нейтрофилов на нагрузку. У женщин с бесплодием и фолликулярными кистами яичников, которым десенситизация гипофиза была начата на фоне фолликулярных кист яичников, были выше средние уровни спонтанного и стимулированного НСТ теста, а ИФР ниже, чем у здоровых женщин (таблица 1).

Таблица № 1. - Функциональная активность периферических нейтрофилов у женщин, которым десенситизация функции яичников была проведена агонистами гонадотропин релизинг гормона

08-02-2016 10-10-36

P1 - коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и первой группой; P2- коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и второй группой; P3- коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и пятой группой

Cодержание Treg с фенотипом CD4+CD25+ в контрольной и опытных группах было сопоставимо, а количество Treg, с молекулами CD4+CD152+ было достоверно выше, чем в контрольной группе, у женщин всех опытных групп (таблица 2).

Таблица № 2. - Содержание Treg в периферической крови женщин, которым десенситизация функции яичников была проведена агонистами гонадотропин релизинг гормона

08-02-2016 10-11-03

P1 - коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и первой группой; P2- коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и третьей группой; P3- коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и пятой группой

В обеих группах показатели спонтанного НСТ теста были достоверно выше, чем в группе контроля. Показатель стимулированного зимозаном НСТ теста достоверно не отличался в обеих опытных группах от такового в группе контроля, однако в группе 5а прослеживалась тенденция к увеличению показателя (59,73±5,57 и 45,80±4,54, р=0,062). В обеих опытных группах показатель ИФР был достоверно ниже, чем в группе контроля,  в группе 5а ИФР был достоверно выше, чем в группе 5б (таблица 3).

Таблица 3. - Функциональная активность периферических нейтрофилов у женщин, которым была проведена стимуляция суперовуляции яичников с агонистами гонадотропин релизинг гормона на фоне фолликулярных кист яичников

08-02-2016 10-11-16

P1 - коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и группой 5а; P2- коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и группой 5б; P3- коэффициент достоверности разности результатов между группами 5а и 5б

В обеих опытных группах содержание Treg с фенотипом CD4+CD25+ в было сопоставимо с группой контроля, а количество Treg, с фенотипом CD4+CD152+ было достоверно выше, чем в контрольной группе, у женщин всех опытных групп. Между опытными группами достоверных отличий по содержанию клеток с маркерами CD4+CD25+ и CD4+CD152+ выявлено не было (таблица 4).

Таблица № 4. - Содержание Treg в периферической крови женщин, которым была проведена стимуляция суперовуляции яичников с  агонистами гонадотропин релизинг гормона на фоне фолликулярных кист яичников

08-02-2016 10-11-29

P1 - коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и второй группой; P2- коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и четвертой группой; P3- коэффициент достоверности разности результатов между второй и четвертой группами

В обеих опытных группах пациенток с бесплодием и фолликулярными кистами яичников, которым была проведена программа ЭКО с применением антагонистов ГнРГ, уровень стимулированного зимозаном НСТ достоверно не отличался от такового в группе контроля, а ответ нейтрофилов на нагрузку был достоверно ниже. Уровень НСТ активности нейтрофилов был выше, чем у здоровых женщин только в группе пациенток, с бесплодием и фолликулярными кистами яичников, которым была выполнена трансвагинальная пункция кисты перед программой ЭКО и была начата стимуляция суперовуляции яичников с 2-3 цикла с применением антагонистов гонадотропин релизинг гормона (таблица 5).

Таблица № 5. - Функциональная активность периферических нейтрофилов у женщин, которым была проведена стимуляция суперовуляции яичников с  антагонистами гонадотропин релизинг гормона

08-02-2016 10-11-42

P1 - коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и второй группой; P2- коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и четвертой группой; P3- коэффициент достоверности разности результатов между второй и четвертой группами

У пациенток с бесплодием и фолликулярными кистами яичников, которым был проведена программа ЭКО с применением антагонистов ГнРГ, количество Тreg с фенотипом CD4+CD25+ по группам не имело отличий. Количество Тreg с фенотипом CD4+CD152+ было выше в обеих опытных группах по сравнению с контрольной группой здоровых фертильных женщин (таблица 6).

Таблица № 6. - Содержание Treg в периферической крови женщин, которым была проведена стимуляция суперовуляции яичников с антагонистами гонадотропин релизинг гормона

08-02-2016 10-11-56

P1 - коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и второй группой; P2- коэффициент достоверности разности результатов между группой контроля и четвертой группой; P3- коэффициент достоверности разности результатов между второй и четвертой группами

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о взаимосвязи между бактерицидной активностью нейтрофилов и фолликулярными кистами яичников. Самостоятельный регресс образований  яичника способствует восстановлению функциональной активности нейтрофильного звена иммунитета, длительная персистенция и последующая их аспирация снижают фагоцитарный резерв нетрофилов.

Мы считаем, что персистенция фолликулярных кист и связанное с ними увеличение уровня женских половых гормонов вызвало повышение Treg c обоими фенотипами, но уровень Treg с фенотипом CD4+CD25+ успел снизиться за время, прошедшее с момента разрешения кисты тем или иным способом до трансвагинальной пункции яичников, а уровень Treg с фенотипом CD4+CD152+ не снизился. По данным литературы повышение уровня Treg является благоприятным прогностическим фактором наступления беременности, поэтому мы полагаем, что повышенный уровень регуляторных T клеток на фоне фолликулярных кист яичника не оказывает негативного влияния на прогноз наступления беременности в протоколе ЭКО.

Литература

  1. Лечение женского и мужского бесплодия. Вспомогательные репродуктивные технологии / под ред. В.И. Кулакова, Б.В. Леонова, Л.Н. Кузьмичева. – М.: МИА, 2005. – 592 с.
  2. Матевосян А. А. Современные аспекты реализации программы эко и пэ у женщин с доброкачественными опухолями яичников // Вестник Хирургии Армении им. Г. С. Тамазяна. – 2010. -№2. С. 38-42.
  3. Меджидова К.К. Изменения гормонального статуса у женщин с опухолевидными процессами яичников // Мать и Дитя: Материалы VI Российского форума. - М., 2004. - С.417.
  4. Назаренко Т. А. Смирнова А.А. Индукция моно — и суперовуляции: оценка овариального резерва, ультразвуковой и гормональный мониторинг // Проблемы репродукции. — 2004. — Т. 10, № 1. — С. 36–42.
  5. Окороков, А.О. Роль воспалительных процессов малого таза в формировании кистозных образований яичников / А.О. Окороков, И.А. Петров, Ю.А. Кадесникова и др. // Сб. научных тр. межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии». - Красноярск, 2008. - С. 88-92.
  6. Селезнева Н.Д. Доброкачественные опухоли и опухолевидные образования внутренних половых органов // Оперативная гинекология; под ред. В.И. Кулакова, Н.Д. Селезневой, В.И. Краснопольского. - М.: «Медицинская книга», НГМА. - 1998. - С. 199-229.
  7. Adamson G. D. Fertil Steril. – 2005. – Vol. 84 (6). – P. 1582-1586.
  8. Chernyshov V. P., Radysh T. V., Gura I. V., Tatarchuk T. P., Khominskaya Z. B., Am J. Reprod Immunol. – 2001. – Vol. 46 (3).- P. 220-225.
  9. Gallimore A., Sakaguchi S. Immunology. – 2002. -Vol. 107, - P. 5–9.
  10. Katz VL. Comprehensive Gynecology. 5th ed. Philadelphia: Mosby Elsevier. – 2007. – 1098-1103.

Refernces

  1. Lechenie zhenskogo i muzhskogo besplodija. Vspomogatel'nye reproduktivnye tehnologii / pod red. V.I. Kulakova, B.V. Leonova, L.N. Kuz'micheva. – M.: MIA, 2005. – 592 s.
  2. Matevosjan A. A. Sovremennye aspekty realizacii programmy jeko i pje u zhenshhin s dobrokachestvennymi opuholjami jaichnikov // Vestnik Hirurgii Armenii im. G. S. Tamazjana. – 2010. -№2. S. 38-42.
  3. Medzhidova K.K. Izmenenija gormonal'nogo statusa u zhenshhin s opuholevidnymi processami jaichnikov // Mat' i Ditja: Materialy VI Rossijskogo foruma. - M., 2004. - S.417.
  4. Nazarenko T. A. Smirnova A.A. Indukcija mono — i superovuljacii: ocenka ovarial'nogo rezerva, ul'trazvukovoj i gormonal'nyj monitoring // Problemy reprodukcii. — 2004. — T. 10, № 1. — S. 36–42.
  5. Okorokov, A.O. Rol' vospalitel'nyh processov malogo taza v formirovanii kistoznyh obrazovanij jaichnikov / A.O. Okorokov, I.A. Petrov, Ju.A. Kadesnikova i dr. // Sb. nauchnyh tr. mezhregional'noj nauchno-prakticheskoj konferencii «Aktual'nye voprosy akusherstva i ginekologii». - Krasnojarsk, 2008. - S. 88-92.
  6. Selezneva N.D. Dobrokachestvennye opuholi i opuholevidnye obrazovanija vnutrennih polovyh organov // Operativnaja ginekologija; pod red. V.I. Kulakova, N.D. Seleznevoj, V.I. Krasnopol'skogo. - M.: «Medicinskaja kniga», NGMA. - 1998. - S. 199-229.
  7. Adamson G. D. Fertil Steril. – 2005. – Vol. 84 (6). – P. 1582-1586.
  8. Chernyshov V. P., Radysh T. V., Gura I. V., Tatarchuk T. P., Khominskaya Z. B., Am J. Reprod Immunol. – 2001. – Vol. 46 (3).- P. 220-225.
  9. Gallimore A., Sakaguchi S. Immunology. – 2002. -Vol. 107, - P. 5–9.
  10. Katz VL. Comprehensive Gynecology. 5th ed. Philadelphia: Mosby Elsevier. – 2007. –P. 1098-1103.