Results of a Comparative Preclinical Safety Study of Eltrombopag Drugs
Results of a Comparative Preclinical Safety Study of Eltrombopag Drugs
Abstract
This article presents materials, methods, results and their discussion of the experimental study of acute toxicity of the reproduced drug Eltrombopag-29, film-coated tablets, 50 mg produced by the company (LLC "February 29", Russia), series 011019, valid until 10. 2021, (INN Eltrombopag) in comparison with Revolade® film-coated tablets, 50 mg ("Glaxo Velcom S.A.", Spain), series 855N, valid until 11.2021 (INN Eltrombopag). As a result of this acute toxicity study, the drugs proposed for comparison are equivalent. In the future, the work is aimed at proving the bioequivalence of these drugs and may contribute to the development of safe and effective agonists of thrombopoietin receptors.
1. Введение
Элтромбопаг является пероральным агонистом низкомолекулярных рецепторов тромбопоэтина, одобренным для лечения взрослой , и педиатрической , иммунной тромбоцитопенической пурпуры, апластической анемии и тромбоцитопении, ассоциированной с вирусом гепатита С , . Он также был изучен у пациентов с миелодиспластическим синдромом и острым миелолейкозом . Начальный режим дозирования обычно начинается с 25–50 мг в день, при этом более высокие дозы (≥75 мг) используются для лечения апластической анемии, миелодиспластического синдрома и острого миелоидного лейкоза , .
При приеме препарата гепатобилиарные побочные эффекты встречаются у ~ 15% пациентов, принимавших элтромбопаг . Поскольку для поддержания ответа на лечение обычно требуется непрерывная терапия элтромбопагом, точная биохимическая оценка функции печени важна для информирования о корректировке дозы и прекращении приема .
2. Материалы и методы
Опыты были проведены на 66 самцах и 66 самках белых лабораторных мышей массой 20±2 г. Животным однократно был введен внутрижелудочно препарат «Элтромбопаг-29» таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг (ООО «29 февраля», Россия) и Револейд® таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг («Глаксо Вэлком С.А.», Испания) с помощью металлического зонда с гладкой оливой на конце в дозах 1500, 2000, 2500, 3000, 3500 мг/кг в пересчёте на элтромбопаг.
Наблюдение за животными осуществлялось непрерывно в первые 8 часов, и далее каждые 8 часов в течение 2 недель.
Токсическое действие препарата обнаруживали исходя из общего состояния животных и их способности к выживанию, а также расчётным показателям токсичности. Подсчет животных, которые умерли и выжили, проводили на 3 сутки после затравки заявленными препаратами, с дальнейшим наблюдением за выжившими животными в течение 2-х недель и итоговым подсчётом выживших животных. В результате полученной информации рассчитывались показатели LD16, LD50 и LD84.
3. Результаты и обсуждение
3.1. Исследование острой токсичности
Для изучения острой токсичности в исследовании участвовал воспроизведённый препарат «Элтромбопаг-29» таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг (ООО «29 февраля», Россия).
В качестве препарата сравнения использовали препарат Револейд® таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг («Глаксо Вэлком С.А.», Испания). В качестве контроля использовали данные, полученные на интактных животных при внутрижелудочном введении 1% крахмального клейстера.
Проведенные исследования показали, что после однократного внутрижелудочного введения мышам препаратов «Элтромбопаг-29» таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг (ООО «29 февраля», Россия) и Револейд® таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг («Глаксо Вэлком С.А.», Испания) в дозах 1500, 2000, 2500, 3000, 3500 мг/кг у мышей наблюдалось уменьшение двигательной активности, потребления корма и воды, животные были вялые, малоподвижные, гибель животных наступала в течение первых 3-х суток.
На основании проведенных экспериментальных данных рассчитаны LD50, LD16 и LD84 для препаратов «Элтромбопаг-29» и Револейд® при внутрижелудочном введении мышам, таблица 1.
Таблица 1 - Исследование острой токсичности препарата «Элтромбопаг-29» в сравнении с препаратом «Револейд®» при внутрижелудочном введении
Препарат | Доза, мг/кг | Число животных | Леталь-ность, % | LD16, мг/кг | LD50, мг/кг | LD84, мг/кг | ||
Общее | Погибшие | Выжившие | ||||||
Элтромбопаг-29 | 1500 | 12 | 0 | 12 | 0 | 2856,05 | 4241,57 | 5618,08 |
2000 | 12 | 0 | 12 | 0 | ||||
2500 | 12 | 1 | 11 | 8,3 | ||||
3000 | 12 | 2 | 10 | 16,7 | ||||
3500 | 12 | 4 | 8 | 33,3 | ||||
Револейд® | 1500 | 12 | 0 | 12 | 0 | 2310,10 | 3340,40 | 4370,71 |
2000 | 12 | 1 | 11 | 8,3 | ||||
2500 | 12 | 3 | 9 | 25 | ||||
3000 | 12 | 4 | 8 | 33,3 | ||||
3500 | 12 | 7 | 5 | 58,3 | ||||
Как можно убедиться из данных, представленных в таблице, летальность животных при внутрижелудочном введении исследуемого практически не отличается от препарата сравнения.
Оставшиеся в живых мыши после 3 суток после введения препаратов не отличались по внешнему виду, поведению и реакции на раздражители от животных одинакового с ними возраста, не получавших препараты. Падежа животных и каких-либо других проявлений токсичности на протяжении 2 недель наблюдения выявлено не было.
Состояние переживших острую интоксикацию животных свидетельствует о хорошей переносимости и безвредности препарата в дозах, превышающих терапевтические в десятки раз.
На основании проведенных экспериментальных данных при однократном внутрижелудочном введении препарата «Элтромбопаг-29» таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг (ООО «29 февраля», Россия) по своим токсикологическим характеристикам практически не отличаются от препарата сравнения Револейд® таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг («Глаксо Вэлком С.А.», Испания). Следовательно, результаты наблюдений за экспериментальными животными в постинтоксикационном периоде острого отравления позволяют отнести сравниваемые препарат «Элтромбопаг-29» таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг (ООО «29 февраля», Россия) и Револейд® таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг («Глаксо Вэлком С.А.», Испания) к III классу умеренно опасных лекарственных веществ по ГОСТ 12.1.007-76.
3.2. Клинические признаки и изменения массы тела
Таблица 2 - Массы тела в ходе исследования
Время наблюдения | Контрольная группа | «Элтромбопаг» Револейд® | ||
M | F | M | F | |
Фон | 209,25±1,26 | 209,8±1,25 | 209,75±1,27 | 209,85±1,29 |
7 дней | 212,5±1,3 | 212,8±1,26 | 212,8±1,27 | 211,2±1,38 |
14 дней | 215,7±1,34 | 215,25±1,36 | 215,95±1,28 | 213±1,39 |
Через 7 суток после отмены препаратов | 221±1,7 | 219,2±1,81 | 221 | 216,9±1,68 |
Через 14 суток после отмены препаратов | 224,2±1,76 | 223,5±1,83 | 225,8±1,15 | 220,3±1,88 |
Примечание: M – самцы, F – самки. Единицы измерения: граммы; здесь и везде далее M – среднее арифметическое, m – стандартная ошибка среднегой, *- при р<0,05 по сравнению с плацебо
Таблица 3 - Степени токсичности
Степени токсичности | Терми | ЛД50, однократно, per os, крысы, мг/кг | ЛД50, однократно i/v*(в/б), крысы, мг/кг |
1 | вещества чрезвычайно опасные | ˂ 15 | ˂ 0,1 |
2 | вещества высокоопасные | 15-150 | 0,1-1 |
3 | вещества умеренно опасные | 150-5000 | 1,1-10 |
4 | вещества малоопасные | ˃ 5000 | ˃ 10 |
Примечание: по ист. [5]
3.3. Смертность животных во время исследования подострой токсичности
За время наблюдения в течение 14 суток в группах животных, получавших исследуемые препараты в однократной (12,857 мг/кг/сут) и десятикратной (128,57 мг/кг/сут) дозе смертности животных зафиксировано не было. В течение 14 суток после прекращения приема препаратов гибели крыс также не наблюдалось ни в одной из групп экспериментальных животных.
4. Заключение
При изучении острой токсичности самцам и самкам белым лабораторным мышам однократно внутрижелудочно вводили препараты «Элтромбопаг-29» таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг (ООО «29 февраля», Россия) и Револейд® таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг («Глаксо Вэлком С.А.», Испания) в дозах 1500, 2000, 2500, 3000, 3500 мг/кг. О токсическом действии препарата судили по общему состоянию животных и их выживаемости, LD50. Выявлено, что изучаемые препараты при однократном введении оказывают дозозависимое токсическое действие, вызывая гибель животных в течение первых 3-х суток наблюдения. Согласно ГОСТ 12.1.007-76 препарат «Элтромбопаг-29» таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг (ООО «29 февраля», Россия) и Револейд® таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг («Глаксо Вэлком С.А.», Испания) можно отнести к III классу умеренно опасных лекарственных веществ.
Проведенные исследования свидетельствуют об отсутствии различий по показателям острой токсичности, следовательно, по показателям острой токсичности воспроизведенный препарат «Элтромбопаг-29» и референт «Револейд®» являются эквивалентными.
На основании результатов проведенных экспериментальных исследований препарат «Элтромбопаг-29» таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 50 мг (ООО «29 февраля», Россия) и «Элтромбопаг-29» таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 25 мг (ООО «29 февраля», Россия), может быть рекомендован для представления в Министерство здравоохранения РФ для получения разрешения на проведение клинических испытаний.