THE COMPOSITION OF THE PHARYNGEAL MICROBIOTA IN INDIVIDUALS SEROPOSITIVE FOR TOXOCARIASIS ANTIGENS

В настоящее время значительное внимание уделяется подтверждению общепринятого положения о том, что микробиота разных биотопов организма человека находится в состоянии динамического равновесия. Влияние микроорганизмов-симбионтов на развитие физиологических изменений в состоянии макроорганизма является научно доказанным фактом, поэтому любые нарушения динамического равновесия приводят к изменениям микробного пейзажа всех биотопов организма человека. Не является исключением изменение микробного сообщества респираторного тракта при миграционных формах гельминтозов, поэтому микробный пейзаж разных его биотопов может служить маркёром сопутствующих бронхо-лёгочных патологий

Токсокароз – зоонозная инвазия, характеризующаяся хроническим рецидивирующим течением, распространенная повсеместно на земном шаре с преобладанием в регионах с низким уровнем санитарной культуры и теплым климатом. Согласно литературным данным

В норме нижние отделы респираторного тракта колонизированы представителями родов Pseudomonas, Streptococcus, Prevotella, Fusobacterium, Veillonella в количестве 2 × 103 КОЕ на 1 см2. При этом согласно исследованиям E.S. Charlson

Цель исследования – изучение качественного и количественного состава микробиоты слизистой оболочки задней стенки глотки у серопозитивных к токсокарам лиц.

Научная работа проводилась в 2021-2022 гг. на базе научно-исследовательской лаборатории кафедры микробиологии ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России. В работе использованы иммунологические, микробиологические и статистические методы анализа.

Биологические материалы отобраны рандомно при плановом профилактическом осмотре обучающихся из стран Ближнего Востока 1-6 курсов РязГМУ. От 85 клинически здоровых добровольцев обоих полов получены сыворотки крови и орофарингеальные мазки. Все обследуемые информированы о ходе исследования и дали письменное согласие на изучение образцов материала. Цикл научных исследований одобрен ЛЭК ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России (протокол №2 от 07.10.2020 г.). Серопозитивность к токсокарам (наличие аnti-Toxocara IgG) определяли с помощью тест-системы «Токсокара-IgG-ИФА-БЕСТ» (АО «Вектор-Бест», г. Новосибирск, Россия). По результатам серологического исследования сформирована контрольная группа (n=53) с отрицательными результатами ИФА на наличие антител к токсокарам. В основную группу (n=32) включены серопозитивные лица обоих полов. В дальнейшем анализе половую принадлежность и различия в возрасте обследуемых не учитывали. Критериями исключения из исследования служили отказ обучающегося и наличие катаральных явлений. Отбор биологического материала проводили методом мазков стерильным хлопковым тампоном в пробирке с транспортной средой Эймса со слизистой оболочки задней стенки глотки, избегая контакта с поверхностью миндалин, корня языка и мягкого нёба, согласно действующим нормативным документам. Первичный посев клинических изолятов осуществляли на высокоселективные питательные среды: желточно-солевой агар, кровяной агар (с добавлением 5% крови крупного рогатого скота), шоколадный агар, коринебакагар, бордетелагар, Сабуро-агар, агар Эндо (ФБУН ГНЦ ПМБ, г. Оболенск).

Выделение и определение микроорганизмов до рода проводили на основании изучения культуральных, морфологических, тинкториальных и некоторых биохимичеких свойств (согласно методическим рекомендациям «Методы бактериологического исследования условно-патогенных микроорганизмов в клинической микробиологии» от 19.12.1991 г.). Видовая идентификация в большинстве случаев не проводилась. Количество микроорганизмов (lg КОЕ/г) определяли путем подсчета количества колониеобразующих единиц.

Статистическая обработка результатов выполнена с использованием программы StatTech v. 3.1.7 (разработчик – ООО «Статтех», Россия, 23), процессора электронных таблиц «Microsoft Excel 2016». Достоверность различия показателей в совокупностях оценивали согласно бинарному t-критерию Стьюдента при р≤0,05.

В результате выполненных исследований установлен разнообразный таксономический состав микробиоты у серопозитивных и серонегативных к антигенам токсокар лиц с преобладанием родов Staphylococcus, Streptococcus, Bordetella spp. и Corynebacterium spp. Только у серопозивных к антигенам токсокар обследуемых высеяны Candida spp. (18,75±6,90%), Klebsiella spp. (12,50±5,85%), Neisseria spp. (15,63±6,42%). Частота встречаемости и интенсивность колонизации микроорганизмами у серопозитивных и серонегативных к токсокарам обследуемых представлены в таблице. Заметны статистически значимые различия микробной контаминации в сравниваемых группах.

В опытной группе достоверно чаще встречались Candida spp., условнопатогенные Staphylococcus spp (р<0,05). Также высевались другие представители нетипичной и условно-патогенной флоры: E. coli, Klebsiella spp., которые не отмечались в контрольной группе обследуемых (n=53, аnti-Toxocara IgG)–. Бактерии рода Streptococcus составили 53,1%, что достоверно выше чем в контрольной группе (16,98%, р<0,05). При этом отмечалось значительное снижение количества негемолитических стрептококков относительно контрольной группы – 23,5% и 47,5% соответственно.

Степень контаминации слизистой оболочки задней стенки глотки представителями микробиоты позволяет судить о физиологическом состоянии биотопа. В основной группе обследуемых (n=32, аnti-Toxocara IgG+) доминирующая группа микроорганизмов представлена родом Staphylococcus. Интенсивность контаминации ими составила 11,8±3,2 lg КОЕ/г. В контрольной группе этот показатель значительно ниже – 3,89±2,0 lg КОЕ/г. Частота встречаемости стафилококков от общего числа штаммов в основной и контрольной группах – соответственно 87,50±5,85% и 58,42±6,77%. Доля Staphylococcus aureus с выраженной лецитиназной активностью среди выделенных штаммов: в основной группе – 78,13±7,31%, 6,7±0,3 lg КОЕ/г; в контрольной - 9,43±4,02%, 3,6±0,7 lg КОЕ/г Отмечена достаточно высокая интенсивность контаминации β-гемолитическими бактериями рода Streptococcus: в основной группе – 9,2±2,2* lg КОЕ/г, в контрольной – 4,8±2,5* lg КОЕ/г. Частота встречаемости в основной группе отмечена на уровне 53,13±8,82%, что достоверно выше, чем в контрольной – 16,98±5,16% (р<0,05). При этом в контрольной группе преимущественно регистрируются негемолитические стрептококки – 37,74±6,66% против 15,63±6,42% у соропозитивных к токсокарам лиц. Степень контаминации слизистой оболочки задней стенки глотки грибами рода Candida spp. в среднем составила 3,75±0,71 lg КОЕ/г у 18,75±6,90% лиц из основной группы. В группе серонегативных к антигенам токсокар обследуемых дрожжеподобные грибы практически не выявляли.

У серопозивных к токсокарам обследуемых достоверно чаще встречались условно-патогенные Staphylococcus spp., в том числе Staphylococcus aureus (р<0,05), β-гемолитические представители рода Streptococcus. Высевались другие представители нетипичной и условно-патогенной флоры: E. coli, Klebsiella spp., Neisseria spp. при интенсивности контаминации 3,40±1,60; 3,50±1,10 и 4,89±1,70 lg КОЕ/г и встречаемости 37,50±8,56%; 12,50±5,85%; 15,63±6,42% соответственно. Указанные таксоны не зарегистрированы у обследуемых в контрольной группе, с отрицательными результатами ИФА на наличие антител к Toxocara canis. К постоянным обитателям слизистой зева относятся Staphylococcus spp., Streptococcus spp.; к дополнительным – Corynebacterium spp. (соответственно в основной и контрольной группах – 87,50±5,85% и 66,04±6,51%), Bordetella spp. (78,13±7,31% и 56,60 ±6,81%). Колонизация представителями данных родов выявлена в достаточно сходных количествах. Не характерными для серонегативных к токсокарам лиц таксонами оказались виды из родов Neisseria, Klebsiella, Candida, а также представители семейства Enterobacteriaceae. Вариабельность микробного сообщества орофарингеального биотопа в обеих группах ассоциирована с постоянным смешиванием и микроаспирацией индигенной флоры ротовой полости и носоглотки

Таким образом, анализ состава микробного пейзажа изучаемого биотопа выявил различия в частоте встречаемости и степени контаминации отдельными таксонами микроорганизмов слизистой оболочки задней стенки глотки, что позволяет продолжать исследования в данной области. В ходе работы в основной группе обследуемых выявлена избыточная колонизация слизистой оболочки изучаемого биотопа индигенной микрофлорой с преобладанием несвойственных данной экологической нише микроорганизмов, что подтверждается данными различных исследователей

Состав микробного сообщества орофарингеального биотопа (слизистой оболочки задней стенки глотки) у серопозитивных к токсокарам (аnti-Toxocara IgG+) обследуемых характеризуется статистически достоверными отличиями от серонегативных лиц, что позволяет судить о системных изменениях иммунной реактивности и снижении иммунного статуса при миграционных формах гельминтозов. В представленном исследовании впервые изучен микробный пейзаж одного из биотопов респираторного тракта у лиц с положительными результатами в иммуноферментном анализе на антитела к возбудителю токсокароза. Полученные результаты свидетельствуют о необходимости дальнейшего изучения изменений микробного сообщества респираторного тракта у серопозитивного к токсокарозу контингента в качестве маркёров бронхо-лёгочных патологий, обусловленных миграцией личинок Toxocara canis.