EPIZOOTOLOGICAL AND EPIDEMIOLOGICAL MONITORING OF TOXOPLASMOSIS IN THE RYAZAN OBLAST

Research article
DOI:
https://doi.org/10.23670/IRJ.2022.123.17
Issue: № 9 (123), 2022
Suggested:
19.08.2022
Accepted:
08.09.2022
Published:
16.09.2022
27
0
XML PDF

Abstract

Complex serological, microbiological and pathomorphological studies for toxoplasmosis in the Ryazan Oblast were carried out. Blood serum of cattle and pigs were examined using HAI (indirect hemagglutination reaction) and LFT (immunochromatographic method). The first method was used to test for antibodies and the second for Toxoplasma gondii antigens. LFT was also used as part of seroepidemiological monitoring for toxoplasmosis.

Microscopic and immunopathomorphological studies of touch smear from the brain, parenchymatous organs and lymph nodes of mouse rodents were conducted to determine the circulation of the toxoplasmosis pathogen in the natural center (territory of the Oka State Biosphere Reserve).

Immune toxoplasmic serum for different variants of LFT and HAI were obtained by hyperimmunization of rabbits according to the developed scheme using incomplete Freund's adjuvant.

Main work objectives: obtaining blood serum from animals from potentially toxoplasmosis-prone farms; developing toxoplasmic immunoreagents for LFT; seroepizootological and seroepidemiological monitoring for toxoplasmosis; determining the significance of rodents in the circulation of toxoplasmosis and the natural occurrence of toxoplasmosis in the epizootic and epidemic process in the territory of the Oka State Biosphere Reserve.

The obtained diagnostic drugs, LFT rapid test can be used in veterinary and sanitary examination of carcasses and organs of animals at meat processing plants of the Russian Federation in the order of selective research for toxoplasmosis, as well as for testing for human Toxoplasma gondii antigens.

1. Введение

Токсоплазмоз распространен среди животных и людей на всех континентах [14]. Токсоплазмы обнаружены более чем у 250 видов млекопитающих и у многих видов птиц.

Коэффициент заболеваемости токсоплазмозом составляет 1,2 на 100 тыс. населения [4]. В разных странах мира инвазированы токсоплазмами или серопозитивны на токсоплазмоз от 1,5–3% до 40–70% населения, а в различных регионах Российской Федерации - 15–30% [6], [8], [11]. При клиническом, инструментальном исследовании устанавливают преимущественно латентную и субклиническую формы заболевания. В редких случаях токсоплазмоз проявляется пневмонией, лимфаденитами, хориоретинитом и другой патологией органов зрения. Потенциально у 1/5 женщин с положительными результатами серологических исследований отмечаются аборты, мертворождения в разные сроки беременности. По данным неонатальных центров среди новорожденных частыми симптомами токсоплазмоза являются менингоэнцефалит и гидроцефалия [11].

Несмотря на широко известные данные о кошке, как преобладающем источнике возбудителя токсоплазмоза, в большинстве случаев заражение диких и домашних плотоядных, кабанов, свиней и мышевидных грызунов, хищных птиц происходит при хищничестве и каннибализме. Кроме того, почти все виды диких и сельскохозяйственных животных могут инвазироваться токсоплазмами внутриутробно (через плаценту) [1], [3], [5], [12]. Человек заражается при наличии в рационе мясных продуктов без их предварительного надежного обезвреживания. Особую опасность представляет мясо овец (70-80%), свиней (25-42%) и крупного рогатого скота (25%) [6]. В Центральном районе России зараженность крупного рогатого скота токсоплазмами составляет от 1,2 до 18-25% [12], [13]. Диагностика токсоплазмоза животных в условиях хозяйств, крупных МПП, мясокомбинатов и боен на постоянной основе не проводится, что способствует возрастанию уровня эпизоотического и эпидемического процесса [7], [9]. Большое значение в потенциальном неблагополучии по токсоплазмозу животноводческих предприятий имеют многочисленные природные очаги болезни со свойственной для них циркуляцией Toxoplasma gondii в популяциях мышевидных грызунов [3], [10]. При анализе эпизоотической и эпидемической ситуации следует учитывать уровень ветеринарно-санитарных, санитарно-гигиенических и карантинно-ограничительных мероприятий.

Важным этапом в комплексе профилактических и оздоровительных мероприятий при токсоплазмозе является диагностика. Наиболее перспективны для выявления острой формы заболевания такие высокоспецифичные, чувствительные тесты, как иммунохромато-графический метод (ИХМ), его экспресс вариант. Для ретроспективной диагностики и выявления токсоплазменных антител при латентной, субклинической и хронической формах токсоплазмоза, следует применять РСК, РНГА, НРИФ и ИФА [2], [6], [9, С. 482], [10, С. 447].

2. Методы и принципы исследования

Научно-производственная работа выполнена на кафедрах эпизоотологии ФГБОУ ВО РГАТУ и микробиологии ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России.

В исследованиях использованы следующие методы: серологические (реакция непрямой гемагглютинации - РНГА, иммунохроматографический - ИХМ), микробиологические и патоморфологические. Методики поведения общепринятые.

В реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) применяли диагностические препараты собственного изготовления (эритроциты барана, сенсибилизированные комплексным антигеном токсоплазм по Вайнбаху). Специфичность и чувствительность разработанных антигенных иммунореагентов устанавливали в РНГА путем скрининга с пулом сывороток крови крупного рогатого скота, зараженного саркоцистами – близкородственными к токсоплазмам, и от кроликов, иммунизированных антигенами пролиферативных стадий Toxoplasma gondii.

Крупный рогатый скот и свиней из разных районов, хозяйств Рязанской области тестировали на токсоплазмоз в РНГА (на антитела) и в ИХМ (на антигены), используя в качестве позитивного контроля иммунные сыворотки кроликов и комплексный токсоплазменный антиген. На территории Окского государственного биосферного заповедника при исследовании мышевидных грызунов с помощью ИХМ антигены токсоплазм обнаруживали в суспензиях из гомогенатов головного мозга, селезенки, печени и лимфатических узлов с предварительной фильтрацией. Мазки-отпечатки из вышеперечисленных органов и тканей приготавливали на обработанных спирт-эфиром предметных стеклах, фиксировали 96% этиловым спиртом, окрашивали азур-эозином по Романовскому и микроскопировали с использованием иммерсионной системы (ок. 10 х об. 90).

Иммунохроматографический метод в экспресс-варианте осуществляли с использованием сывороток крови кроликов, иммунизированных комплексным (мембрано-цитоплазменным) антигеном Toxoplasma gondii.

Основные компоненты ИХМ:

блоттинг - мембрана Bio-Rad с высоким показателем плотности нитроцеллюлозы;

раствор метиленового синего на ФСБ (рН=7,2-7,4) 1:5;

гипериммунная токсоплазменная кроличья сыворотка с титром антител в РНГА 1: 1600;

негативные кроличьи сыворотки;

исследуемые сыворотки крови крупного рогатого скота и свиней;

образцы органов и тканей мышевидных грызунов.

Оценку (визуализацию) ИХМ осуществляли через 2-3 минуты с момента точечного нанесения последнего компонента. В положительных случаях наблюдали появление двух параллельно расположенных темно-синих полос, соответствующих белковому спектру Toxoplasmagondii, а в контрольной зоне и при исследовании отрицательных на токсоплазмоз сывороток крови животных, человека, а также образцов органов и тканей грызунов – равномерный светло-голубой фон. Для определения чувствительности ИХМ экспресс-теста положительные сыворотки крови тестировали в РНГА с токсоплазменными диагностикумами.

3. Основные результаты

Проведены серологические исследования крупного рогатого скота и свиней на спонтанную зараженность Toxoplasma gondii и Sarcocystis при помощи реакции непрямой гемагглютинации. Специфичность РНГА определяли, используя эритроцитарные диагностикумы, полученные на основе токсоплазменных и саркоцистных антигенов.

Результаты исследований на токсоплазмоз с помощью РНГА показали, что титр антител 1:20 - 1:40 не может рассматриваться как диагностический, достоверны показатели 1:80 - 1:160 и выше. В выполненных опытах перекрестные иммунологические реакции между Toxoplasma gondii (S – иммунная сыворотка, титр 1:2560) и Sarcocystis (Ag - антиген) выявлены в титрах 1:40 – 1:80. Исходя из полученных результатов, при проведении сероэпизоотологических исследований в хозяйствах Рязанской области антитела к Toxoplasma gondii установлены в РНГА у 19 % крупного рогатого скота и 37,5 % свиней. Максимальные показатели серопозитивности отмечены у свиноматок 3-4 лет и подсвинков на откорме. Хряки 2-4 лет, поросята в группах доращивания и ремонтные свинки 6-12 мес. положительны в РНГА соответственно на 18, 34 и 37,5 %.

В 12 случаях отсутствие специфической агглютинации в разведениях сывороток крови животных от 1:40 до 1:320 объясняется торможением вследствие блокирования активных антигенных рецепторов на эритроцитах токсоплазменными циркулирующими иммунными комплексами (ЦИК) с последующим прекращением этого эффекта в больших разведениях – 1:640 – 1:1280, 1:2560. Полученные данные подтверждают реактивацию латентной формы токсоплазмоза у свиней и крупного рогатого скота, что обусловлено иммунодефицитным состоянием и наличием в крови трофозоитов Toxoplasma gondii, антител к ним и специфических ЦИК. Рецидивы заболевания возникают при разрушении псевдоцист токсоплазм и циркуляции в крови тахизоитов, для которых свойственна высокая антигенная активность и вирулентность. Латентные формы и хроническое течение токсоплазмоза характеризуется невысоким уровнем антител (1:80-1:160).

Применение иммунохроматографического метода (ИХМ) в варианте экспресс-теста с целью обнаружения циркулирующих антигенов токсоплазм в сыворотках крови животных показали следующие результаты: свиньи – от 9,5 до 43%, крупный рогатый скот – от 13 до 26%. У свиноматок из условно неблагополучных по токсоплазмозу хозяйств часто регистрируются аборты, бесплодие, а у поросят в приплоде от серопозитивных животных отмечены случаи гермафродитизма.

Исследования с помощью ИХМ на антигены токсоплазм образцов органов и тканей мышевидных грызунов (желтогорлая мышь, малая лесная мышь, рыжая полевка), позволили установить положительные результаты в 31,5% случаев. У 23% микромаммалий обнаружены признаки гермафродитизма, что свойственно патологии токсоплазмозной этиологии.

Латентные формы токсоплазмоза в г. Рязани выявлены среди детей и юношей до 17 лет, а также у беременных женщин при скрининге в первом триместре беременности. При исследовании с помощью ИХМ экспресс-теста сывороток крови домохозяек в Рязанской области и студентов из стран северо-западной Африки, циркулирующие антигены токсоплазм обнаружены соответственно в 1,2 и 9 % случаев.

4. Заключение

Проведенный в Рязанской области мониторинг по токсоплазмозу позволил установить его широкое распространение. При снижении популяционного иммунитета заболевание протекает преимущественно в латентной форме, но редко наблюдаются случаи острого заболевания у людей и животных.

Иммунохроматографический метод в виде экспресс-теста следует использовать для выявления антигенов токсоплазм в сыворотках крови людей, в тканях и органах убойных животных на мясоперерабатывающих предприятиях, в лабораториях ветеринарно-санитарной экспертизы, а также при проведении мониторинга в автохтонных природных очагах по результатам исследований мышевидных грызунов - резервуаров возбудителя токсоплазмоза.ИХМ экспресс-тест является информативным, эффективным методом диагностики токсоплазмоза.

Article metrics

Views:27
Downloads:0
Views
Total:
Views:27