EPIZOOTOLOGICAL AND EPIDEMIOLOGICAL MONITORING OF TOXOPLASMOSIS IN THE RYAZAN OBLAST

Токсоплазмоз распространен среди животных и людей на всех континентах [14]. Токсоплазмы обнаружены более чем у 250 видов млекопитающих и у многих видов птиц.

Коэффициент заболеваемости токсоплазмозом составляет 1,2 на 100 тыс. населения [4]. В разных странах мира инвазированы токсоплазмами или серопозитивны на токсоплазмоз от 1,5–3% до 40–70% населения, а в различных регионах Российской Федерации - 15–30% [6], [8], [11]. При клиническом, инструментальном исследовании устанавливают преимущественно латентную и субклиническую формы заболевания. В редких случаях токсоплазмоз проявляется пневмонией, лимфаденитами, хориоретинитом и другой патологией органов зрения. Потенциально у 1/5 женщин с положительными результатами серологических исследований отмечаются аборты, мертворождения в разные сроки беременности. По данным неонатальных центров среди новорожденных частыми симптомами токсоплазмоза являются менингоэнцефалит и гидроцефалия [11].

Несмотря на широко известные данные о кошке, как преобладающем источнике возбудителя токсоплазмоза, в большинстве случаев заражение диких и домашних плотоядных, кабанов, свиней и мышевидных грызунов, хищных птиц происходит при хищничестве и каннибализме. Кроме того, почти все виды диких и сельскохозяйственных животных могут инвазироваться токсоплазмами внутриутробно (через плаценту) [1], [3], [5], [12]. Человек заражается при наличии в рационе мясных продуктов без их предварительного надежного обезвреживания. Особую опасность представляет мясо овец (70-80%), свиней (25-42%) и крупного рогатого скота (25%) [6]. В Центральном районе России зараженность крупного рогатого скота токсоплазмами составляет от 1,2 до 18-25% [12], [13]. Диагностика токсоплазмоза животных в условиях хозяйств, крупных МПП, мясокомбинатов и боен на постоянной основе не проводится, что способствует возрастанию уровня эпизоотического и эпидемического процесса [7], [9]. Большое значение в потенциальном неблагополучии по токсоплазмозу животноводческих предприятий имеют многочисленные природные очаги болезни со свойственной для них циркуляцией Toxoplasma gondii в популяциях мышевидных грызунов [3], [10]. При анализе эпизоотической и эпидемической ситуации следует учитывать уровень ветеринарно-санитарных, санитарно-гигиенических и карантинно-ограничительных мероприятий.

Важным этапом в комплексе профилактических и оздоровительных мероприятий при токсоплазмозе является диагностика. Наиболее перспективны для выявления острой формы заболевания такие высокоспецифичные, чувствительные тесты, как иммунохромато-графический метод (ИХМ), его экспресс вариант. Для ретроспективной диагностики и выявления токсоплазменных антител при латентной, субклинической и хронической формах токсоплазмоза, следует применять РСК, РНГА, НРИФ и ИФА [2], [6], [9, С. 482], [10, С. 447].

Научно-производственная работа выполнена на кафедрах эпизоотологии ФГБОУ ВО РГАТУ и микробиологии ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России.

В исследованиях использованы следующие методы: серологические (реакция непрямой гемагглютинации - РНГА, иммунохроматографический - ИХМ), микробиологические и патоморфологические. Методики поведения общепринятые.

В реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) применяли диагностические препараты собственного изготовления (эритроциты барана, сенсибилизированные комплексным антигеном токсоплазм по Вайнбаху). Специфичность и чувствительность разработанных антигенных иммунореагентов устанавливали в РНГА путем скрининга с пулом сывороток крови крупного рогатого скота, зараженного саркоцистами – близкородственными к токсоплазмам, и от кроликов, иммунизированных антигенами пролиферативных стадий Toxoplasma gondii.

Крупный рогатый скот и свиней из разных районов, хозяйств Рязанской области тестировали на токсоплазмоз в РНГА (на антитела) и в ИХМ (на антигены), используя в качестве позитивного контроля иммунные сыворотки кроликов и комплексный токсоплазменный антиген. На территории Окского государственного биосферного заповедника при исследовании мышевидных грызунов с помощью ИХМ антигены токсоплазм обнаруживали в суспензиях из гомогенатов головного мозга, селезенки, печени и лимфатических узлов с предварительной фильтрацией. Мазки-отпечатки из вышеперечисленных органов и тканей приготавливали на обработанных спирт-эфиром предметных стеклах, фиксировали 96% этиловым спиртом, окрашивали азур-эозином по Романовскому и микроскопировали с использованием иммерсионной системы (ок. 10 х об. 90).

Иммунохроматографический метод в экспресс-варианте осуществляли с использованием сывороток крови кроликов, иммунизированных комплексным (мембрано-цитоплазменным) антигеном Toxoplasma gondii.

Основные компоненты ИХМ:

блоттинг - мембрана Bio-Rad с высоким показателем плотности нитроцеллюлозы;

раствор метиленового синего на ФСБ (рН=7,2-7,4) 1:5;

гипериммунная токсоплазменная кроличья сыворотка с титром антител в РНГА 1: 1600;

негативные кроличьи сыворотки;

исследуемые сыворотки крови крупного рогатого скота и свиней;

образцы органов и тканей мышевидных грызунов.

Оценку (визуализацию) ИХМ осуществляли через 2-3 минуты с момента точечного нанесения последнего компонента. В положительных случаях наблюдали появление двух параллельно расположенных темно-синих полос, соответствующих белковому спектру Toxoplasmagondii, а в контрольной зоне и при исследовании отрицательных на токсоплазмоз сывороток крови животных, человека, а также образцов органов и тканей грызунов – равномерный светло-голубой фон. Для определения чувствительности ИХМ экспресс-теста положительные сыворотки крови тестировали в РНГА с токсоплазменными диагностикумами.

Проведены серологические исследования крупного рогатого скота и свиней на спонтанную зараженность Toxoplasma gondii и Sarcocystis при помощи реакции непрямой гемагглютинации. Специфичность РНГА определяли, используя эритроцитарные диагностикумы, полученные на основе токсоплазменных и саркоцистных антигенов.

Результаты исследований на токсоплазмоз с помощью РНГА показали, что титр антител 1:20 - 1:40 не может рассматриваться как диагностический, достоверны показатели 1:80 - 1:160 и выше. В выполненных опытах перекрестные иммунологические реакции между Toxoplasma gondii (S – иммунная сыворотка, титр 1:2560) и Sarcocystis (Ag - антиген) выявлены в титрах 1:40 – 1:80. Исходя из полученных результатов, при проведении сероэпизоотологических исследований в хозяйствах Рязанской области антитела к Toxoplasma gondii установлены в РНГА у 19 % крупного рогатого скота и 37,5 % свиней. Максимальные показатели серопозитивности отмечены у свиноматок 3-4 лет и подсвинков на откорме. Хряки 2-4 лет, поросята в группах доращивания и ремонтные свинки 6-12 мес. положительны в РНГА соответственно на 18, 34 и 37,5 %.

В 12 случаях отсутствие специфической агглютинации в разведениях сывороток крови животных от 1:40 до 1:320 объясняется торможением вследствие блокирования активных антигенных рецепторов на эритроцитах токсоплазменными циркулирующими иммунными комплексами (ЦИК) с последующим прекращением этого эффекта в больших разведениях – 1:640 – 1:1280, 1:2560. Полученные данные подтверждают реактивацию латентной формы токсоплазмоза у свиней и крупного рогатого скота, что обусловлено иммунодефицитным состоянием и наличием в крови трофозоитов Toxoplasma gondii, антител к ним и специфических ЦИК. Рецидивы заболевания возникают при разрушении псевдоцист токсоплазм и циркуляции в крови тахизоитов, для которых свойственна высокая антигенная активность и вирулентность. Латентные формы и хроническое течение токсоплазмоза характеризуется невысоким уровнем антител (1:80-1:160).

Применение иммунохроматографического метода (ИХМ) в варианте экспресс-теста с целью обнаружения циркулирующих антигенов токсоплазм в сыворотках крови животных показали следующие результаты: свиньи – от 9,5 до 43%, крупный рогатый скот – от 13 до 26%. У свиноматок из условно неблагополучных по токсоплазмозу хозяйств часто регистрируются аборты, бесплодие, а у поросят в приплоде от серопозитивных животных отмечены случаи гермафродитизма.

Исследования с помощью ИХМ на антигены токсоплазм образцов органов и тканей мышевидных грызунов (желтогорлая мышь, малая лесная мышь, рыжая полевка), позволили установить положительные результаты в 31,5% случаев. У 23% микромаммалий обнаружены признаки гермафродитизма, что свойственно патологии токсоплазмозной этиологии.

Латентные формы токсоплазмоза в г. Рязани выявлены среди детей и юношей до 17 лет, а также у беременных женщин при скрининге в первом триместре беременности. При исследовании с помощью ИХМ экспресс-теста сывороток крови домохозяек в Рязанской области и студентов из стран северо-западной Африки, циркулирующие антигены токсоплазм обнаружены соответственно в 1,2 и 9 % случаев.

Проведенный в Рязанской области мониторинг по токсоплазмозу позволил установить его широкое распространение. При снижении популяционного иммунитета заболевание протекает преимущественно в латентной форме, но редко наблюдаются случаи острого заболевания у людей и животных.

Иммунохроматографический метод в виде экспресс-теста следует использовать для выявления антигенов токсоплазм в сыворотках крови людей, в тканях и органах убойных животных на мясоперерабатывающих предприятиях, в лабораториях ветеринарно-санитарной экспертизы, а также при проведении мониторинга в автохтонных природных очагах по результатам исследований мышевидных грызунов - резервуаров возбудителя токсоплазмоза.ИХМ экспресс-тест является информативным, эффективным методом диагностики токсоплазмоза.