DYNAMICS OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES IN THE SMALL-LEAVED LINDEN BARK DEPENDENT ON THE DEGREE OF TECHNOGENIC CONTAMINATION

DOI: https://doi.org/10.23670/IRJ.2022.120.6.062

ДИНАМИКА СОДЕРЖАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В КОРЕ ЛИПЫ МЕЛКОЛИСТНОЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ ТЕХНОГЕННОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ

Научная статья

Гюльбякова Х.Н.*

ORCID:0000-0001-6334-7632,

Пятигорский медико-фармацевтический институт, Пятигорск, Россия

* Корреспондирующий автор (xristnik[at]yandex.ru)

Аннотация

Липа мелколистная (Tiliacordata) – широко распространенное растение на территории Северного Кавказа. Известно, что место произрастания значительно влияет на качественное и количественное содержание биологически активных соединений в растениях. Поэтому целью данной работы явилось проведение фитохимического исследования коры липы мелколистной и изучение содержания биологически активных веществ в зависимости от места произрастания. Для реализации поставленной цели были поставлены следующие задачи: изучить химический состав сырья; провести количественное определение дубильных веществ, флавоноидов и аскорбиновой кислоты в сырье из местообитаний, отличающихся уровнем техногенной нагрузки; изучить макро- и микроэлементный состав коры липы с целью установления экологической чистоты сырья.

Объектом для настоящего исследования послужило сырье (кора) липы мелколистной, собранное в мае 2020 года в разных районах г. Пятигорска, отличающихся уровнем загрязнения окружающей среды. Числовые показатели сырья были изучены согласно методикам ГФ XIV издания. Для идентификации и определения количественного содержания биологически активных веществ были использованы химические и физико-химические методы анализа. Практическая значимость работы заключается в обосновании перспективности дальнейшего изучения коры липы мелколистной для создания лекарственных средств на ее основе. Результаты исследования могут быть использованы для проведения экологического мониторинга окружающей среды.

Ключевые слова: липа мелколистная, биологически активные вещества, флавоноиды, дубильные вещества, кислота аскорбиновая, техногенное загрязнение.

DYNAMICS OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES IN THE SMALL-LEAVED LINDEN BARK DEPENDENT ON THE DEGREE OF TECHNOGENIC CONTAMINATION

Research article

* Gyulbyakova K.N.

ORCID: 0000-0001-6334-7632,

Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute, Pyatigorsk, Russia

*Corresponding author (xristnik[at]yandex.ru)

Abstract

Small-leaved linden (Tilia cordata) is a plant widespread in the North Caucasus.  It is known that the vegetation area significantly affects the qualitative and quantitative content of biologically active compounds in plants. Therefore, the purpose of this work was to conduct a phytochemical study of the bark of small-leaved linden and research the content of biologically active substances depending on the vegetation area. To achieve this goal, the following tasks were set: to study the chemical composition of raw materials; to quantify tanning materials, flavonoids and ascorbic acid in raw materials from habitats differing in the level of anthropogenic load; to study the macro- and microelement composition of linden bark in order to establish the ecological purity of raw materials.

The object of this study was the raw material (bark) of small-leaved linden, collected in May 2020 in different areas of Pyatigorsk with different level of environmental pollution. Numerical indicators of raw materials were researched in accordance with the methods of the 14th edition of NP. Chemical and physico-chemical methods of analysis were used to identify and establish the quantitative content of biologically active substances. The practical significance of the work could justify the prospects for further study of the bark of small-leaved linden to create medicines on its basis. The results of the study can be used to conduct environmental monitoring.

Keywords: small-leaved linden, biologically active substances, flavonoids, tanning materials, ascorbic acid, technogenic pollution.

Введение

Липа мелколистная – (Т. cordataMill.) – древесное растение высотой до 32 м со стройным цилиндрическим стволом. Крона у липы плотная, овальной или шатровидной формы. Стволы старых деревьев покрыты темной коричневато-серой бороздчатой корой. У молодых растений кора гладкая желто-зеленого цвета. Листовые почки голые, яйцевидной формы, покрыты 2-3 чешуйками. Листья простые, очередные, длинночерешковые, с пильчатым краем и с сердцевидным основанием, верхняя поверхность листовой пластины темно-зеленого цвета, нижняя – светлее. Длина и ширина листьев примерно одинаковая (около 7 см). Листья появляются в мае. Цветки липы желтоватого цвета, собраны в соцветия полузонтики по 5-8 шт. с характерным прицветником, обладают душистым запахом. Период цветения – июнь-июль. Продолжительность цветения составляет примерно 15-17 дней. Плоды у липы орешки шаровидной формы, созревают в октябре и сохраняются на дереве вплоть до весны. Липа мелколистная умеренно требовательна к почве, не растет на заболоченных или засоленных почвах. Растение обладает морозостойкостью и весьма теневыносливо [1], [3].

Биологическая ценность коры липы мелколистной обусловлена содержанием ряда биологически активных веществ. В коре найдены дубильные вещества, полисахариды, витамин С [1], [2], [3]. Отвар из коры липы мелколистной обладает противовоспалительным, анальгезирующим, ранозаживляющим, спазмолитическим, желчегонным действием. Луб в старину использовали для лечения туберкулеза. Настой цветков и коры липы используется при заболеваниях гортани и верхних дыхательных путей, особенно при затяжном бронхите или тяжелой ангине [1], [2], [3].

Известно, что место произрастания значительно влияет на состав и накопление в растениях биологически активных веществ. Атмосфера, водоемы и почвы урбанизированных территорий, как правило, засорены вредными веществами. Загрязненность урбанизированных территорий, как правило, отрицательно влияет на рост и развитие растений [1], [4], [5], [6]. Однако следует отметить, что в биомассе растений, произрастающих в зоне действия атмосферных выбросов, наблюдается повышение количества некоторых биологически активных веществ, обеспечивающих защитные функции растений в стрессовых ситуациях и устойчивость вида в неблагоприятных экологических условиях [1].

Целью настоящей работы явилось изучение качественного и количественного состава биологически активных веществ коры липы мелколистной в зависимости от степени загрязнения окружающей среды.

Методы и принципы исследования

Исследования проводили на территории г. Пятигорска. Объектом исследования явилась кора липы мелколистной, заготовленная весной 2020 г. (май) в период сокодвижения. Нами были исследованы растения, произрастающие в следующих районах города, которые значительно отличались интенсивностью антропогенной нагрузки: Машукский лесопарк (экологически чистая территория), центр города (среднезагрязненная территория) и промышленная зона вблизи городской автотрассы с интенсивным движением (сильнозагрязненная территория). В каждом районе исследования брали образцы коры с трех близко растущих деревьев. Собранное сырье сушили в сушильном шкафу при температуре 40⁰С.

 Установление числовых показателей и показателей доброкачественности сырья (влажность, общая зола, зола не растворимая в 10% хлористоводородной кислоте, экстрактивные вещества) проводили по известным фармакопейным методикам [1], [7]. Для предварительной идентификации БАВ сырья были получены водные и спиртоводные извлечения (40%, 70%, 95% растворы этанола). Для получения извлечений 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья заливали 50 мл экстрагента и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа. Полученные извлечения охлаждали и фильтровали. Водные вытяжки использовали для определения дубильных веществ и кислоты аскорбиновой, водно-спиртовые – для определения флавоноидов [1], [2].

Для идентификации дубильных веществ использовали реакции с 1% раствором железа (III) аммония сульфата и с 1% раствором желатина в 10% растворе хлорида натрия [1], [7]. Качественное определение флавоноидов проводили с помощью цианидиновой пробы и реакцией с раствором алюминия хлорида [7], [8]. Идентификацию аскорбиновой кислоты проводили реакцией сраствором 2,6-дихлорфенолиндофенола [1]. Количественное определение суммы дубильных веществ в пересчете на танин проводили методом перманганатометрического титрования [1], [7]. Определение содержания суммы флавоноидов проводили методом дифференциальной спектрофотометрии по реакции комплексообразования с алюминия хлоридом (в пересчете на рутин) [7], [8]. Количественное определение аскорбиновой кислоты проводили методом титрования с помощью раствора 2,6 – дихлорфенолиндофенолята натрия по фармакопейной статье ГФ XIV «Плоды шиповника» [1], [7].

Элементный состав коры липы мелколистной определяли полуколичественным спектральным методом анализа на кварцевом спектрографе ДФС-8-1 (Россия). Для проведения данного испытания образцы коры были направлены в г. Ессентуки в Центральную испытательную лаборатории при ФГУП Кавказгеолсъемка. Пробоподготовку сырья проводили деструкцией органической части пробы методом «сухой» (термической) минерализации путем сжигания анализируемой пробы в муфельной печи при температуре 500⁰С [2], [9].

Основные результаты

К числовым показателям сырья относятся влажность, общая зола и зола, нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной, экстрактивные вещества [1],[7]. Результаты исследования числовых показателей коры липы представлены в таблице 1.

Таблица 1 – Товароведческие показатели коры липы мелколистной

Наименование показателя	Значение показателя, %
	Объект 1	Объект 2	Объект 3
влажность	13,05±0,21	10,87±0,16	8,25±0,19
зола общая	7,21±0,42	7,69±0,20	7,46±0,32
зола, нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной	0,65±0,022	0,61±0,018	0,68±0,029
экстрактивные вещества (вода очищенная)	15,23±0,25	15,05±0,27	15,88±0,53
экстрактивные вещества (40% этанол)	13,64±0,17	13,98±0,32	12,87±0,44
экстрактивные вещества (70% этанол)	12,01±0,30	13,1±0,25	13,1±0,27
экстрактивные вещества (95% этанол)	7,05±0,28	7,23±0,31	7,15±0,49

Данные таблицы 1 показывают, что наибольшее содержание влаги наблюдается в коре липы мелколистной, произрастающей на территории Машукского лесопарка (объект 1), т.е. в благоприятных экологических условиях, а наименьшее – у сырья, собранного вдоль автотрассы в промышленной зоне г. Пятигорска (объект 3) [1]. Это, очевидно, связано с тем, что в городе, особенно на территориях, расположенных вблизи промышленных предприятий и автотрассы, в отличие от лесопарковых зон наблюдается повышение температуры и понижение относительной влажности воздуха и почв, что влечет за собой недостаток влаги и у растений, произрастающих на данных территориях. Экстрактивные вещества максимально извлекаются при использовании в качестве экстрагента воды очищенной. В содержании золы и экстрактивных веществ не прослеживается существенных изменений в зависимости от экологических условий места произрастания липы.

Результаты качественного анализа показали, что все образцы коры липы мелколистной содержатдубильные вещества, флавоноиды и аскорбиновую кислоту (табл. 2).

Таблица 2 – Результаты качественного анализа извлечений из коры липы мелколистной

БАВ	Метод	Аналитический эффект
Аскорбиновая кислота	Реакция с раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола	Исчезновение синей окраски
Дубильные вещества (гидролизуемые)	Реакция с раствором железо-аммониевых квасцов	Сине-черное окрашивание
	Реакция с раствором желатина	Хлопьевидный осадок
Флавоноиды	Реакция Цинке	Красное окрашивание
	Реакция с раствором алюминия хлорида	Желтое окрашивание

Присутствие данных биологически активных веществ указывает на биологическую ценность исследуемого сырья.

Результаты исследования количественного содержания суммы дубильных веществ, флавоноидов и кислоты аскорбиновой в образцах коры липы мелколистной отражены в таблицах 3–5.

Таблица 3 – Содержание дубильных веществ

№ образца	Объект 1, %	Объект 2, %	Объект 3, %
1	7,81±0,410	8,30±0,217	9,21±0,445
2	7,93±0,328	8,48±0,271	9,16±0,295
3	7,73±0,517	8,53±0,293	9,22±0,195
Среднее значение	7,82	8,44	9,20

Таблица 4 – Содержание флавоноидов

№ образца	Объект 1, %	Объект 2, %	Объект 3, %
1	0,190±0,0042	0,241±0,0045	0,493±0,0071
2	0,178±0,0051	0,236±0,0067	0,501±0,0048
3	0,182±0,0063	0,250±0,0054	0,479±0,0056
Среднее значение	0,183	0,242	0,491

Таблица 5 – Содержание аскорбиновой кислоты

№ образца	Объект 1, %	Объект 2, %	Объект 3, %
1	0,204±0,0081	0,187±0,0070	0,173±0,0061
2	0,210±0,0076	0,192±0,0083	0,175±0,0072
3	0,208±0,0085	0,185±0,0079	0,169±0,0078
Среднее значение	0,207	0,188	0,172

Как показали результаты наших исследований, в коре липы мелколистной содержалось от 7,73 до 9,22 % дубильных веществ (табл. 3). Нами была отмечена тенденция увеличения содержания дубильных веществ в коре липы мелколистной в зоне промышленных предприятий и магистральных посадок. Наименьшее содержание данных веществ было в коре растений, произрастающих в благоприятной экологической обстановке – Машукском лесопарке (7,82%). Локализация дубильных веществ в коре и подземных органах указывает на то, что они являются одной из форм запасающих веществ. Дубильные вещества проявляют бактерицидные и фунгицидные свойства. Также они принимают участие в окислительно-восстановительных реакциях, в переносе электронов и кислорода при дыхании и фотосинтезе в растениях. Дубильные вещества снижают действие экологического стресса, и играют важную роль в приспособлении растений к стрессовым факторам. Полученные результаты исследования подтверждают предположение, что накопление дубильных веществ является одним из защитных механизмов у растений [1].

Из данных, представленных в таблице 4, следует, что с повышением техногенной нагрузки наблюдается увеличение содержания флавоноидов в коре липы мелколистной. Максимальное количество данных веществ выявлено в сырье, собранном на территории с высоким уровнем загрязнения (0,491%). Полученные результаты согласуются с литературными данными, согласно которым, флавоноиды обеспечивают устойчивость растений к различным стрессовым факторам. Флавоноиды участвуют во многих окислительно-восстановительных реакциях в растениях, включая процессы дыхания, роста, развития и репродукции. Активный синтез и накопление флавоноидов являются фактором адаптации растений к неблагоприятным условиям среды [1].

Результаты, представленные в таблице 5, свидетельствуют о том, что содержание аскорбиновой кислоты в коре липы мелколистной тесно связано с условиями произрастания. Содержание витамина С снижается в образцах объекта 3, заготовленного на территории с высокой техногенной нагрузкой по сравнению с образцами, заготовленными в зоне лесопарка (на 17%) и в центре города (на 8,5%). Это можно объяснить тем, что в урбаноэкосистемах наблюдается снижение интенсивности фотосинтеза растений, что отражается и на содержании витамина С. Кроме того, витамин С является антиоксидантом, он предотвращает процесс свободного радикального окисления. В условиях воздействия токсичных веществ, многие из которых являются активными радикалами-окислители, повышается расход витамина С на их инактивацию [1], [4].

Изучение элементного состава лекарственных растений и лекарственного растительного сырья необходимо для установления экологической чистоты. Настои и отвары коры липы мелколистной применяются внутрь для лечения различных заболеваний, но в данные лекарственные формы могут извлекаться из сырья токсичные элементы. Поэтому при употреблении сырья существует риск получения некоторого количества нежелательных элементов. Экологическая чистота обусловливает выбор места сбора растительного сырья. Накопление различных элементов в растении зависит от экологического состояния почвы и от способности каждого растения поглощать из почвы и накапливать химические элементы. Поэтому представляло интерес изучить макро- и микроэлементный состав коры липы мелколистной, заготовленной в экологически неблагоприятной зоне (Промзона) (таблица 6). Параллельно определяли микроэлементный состав образца почвы, взятый из места произрастания растения. По результатам исследования в коре липы мелколистной было обнаружено 35 элементов. При этом основными по содержанию являются фосфор (750 мкг/кг), медь (40 мкг/кг), цинк (50 мкг/кг) и марганец (300 мкг/кг). Расчет коэффициентов биологического поглощения (КБП) показал, что накопление липой из почвы стронция и свинца достаточно низкое (КБП <0,2). Наиболее активно поглощаются из почвы, но не концентрируются медь (КБП 0,4), марганец (КБП 0,3) и цинк (КБП 0,5), концентрируются – серебро (КБП 5), фосфор (КБП 0,75) и молибден (КБП 1). Преобладающим макроэлементом в коре липы мелколистной является фосфор.На основании данных, полученных при расчете КБП можно сделать заключение, что сырье липы мелколистной является экологически чистым, так как не накапливает содержащиеся в почве токсические элементы.

Таблица 6 – Изучение элементного состава коры липы мелколистной

№ п/п	Наименование элементов	Содержание элементов, мкг/кг		КБП
		Сырье	Почва
Основные элементы коры липы мелколистной
1	Фосфор	750	1000	0,75
2	Марганец	300	1000	0,3
3	Цинк	50	100	0,5
4	Медь	40	100	0,4
5	Серебро	1	0,2	5
6	Молибден	1	1	1
Токсичные элементы
7	Свинец	10	200	0,05
8	Барий	50	300	0,17
9	Стронций	7	100	0,07

Заключение

В результате проведенного исследования нами установлено, что наибольшее содержание влаги наблюдается в коре липы мелколистной, произрастающей в благоприятных экологических условиях, а наименьшее – у сырья, собранного в промышленном районе вдоль автотрассы. Изменений в содержании золы и экстрактивных веществ в зависимости от экологических условий местообитания липы не прослеживается. Установлены причинно-следственные связи между местом произрастания исследуемого растения и содержанием БАВ в коре. Отмечена тенденция уменьшения содержания аскорбиновой кислоты и увеличения содержания дубильных веществ и флавоноидов в образцах сырья, заготовленных с территорий с повышенной техногенной нагрузкой. На основании данных, полученных при определении элементного состава, доказано, что сырье липы мелколистной является экологически чистым, так как не накапливает содержащиеся в почве токсичные элементы. Повышение концентрации дубильных веществ в растениях может служить экологическим тестом, так как накопление данных соединений – это защитная реакция растений, произрастающих в экологически неблагоприятных зонах. Представленные в работе результаты могут быть использованы в современных химических, фармацевтических и экологических исследованиях.

 

Конфликт интересов Не указан.

Conflict of Interest None declared.

 

Список литературы / References

1. Гюльбяков Н.Р. Изменение числовых показателей и содержания дубильных веществ в коре липы мелколистной в зависимости от места произрастания / Н.Р. Гюльбяков, С.А. Давыдова, Х.Н. Гюльбякова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сборник научных трудов. – Пятигорск: Рекламно-информационное агентство на Кавминводах, 2021. – С. 24–29.
2. Орловская Т.В.Изучение коры липы сердцелистной с целью создания новых лекарственных средств / Т.В. Орловская, Х.Н. Гюльбякова, Н.Н. Гужваи др. // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 2.[Электронный ресурс]. URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=8561 (дата обращения: 21.06.2021).
3. Сейдафаров Р.А. Липа мелколистная (TiliacordataMill.) в техногенных условиях поселкаПриютово/ Р.А. Сейдафаров // Вестник КрасГАУ. – 2013. – №4.[Электронный ресурс].URL: https://cyberleninka.ru/article/n/lipa-melkolistnaya-tilia-cordata-mill-v-tehnogennyh-usloviyah-poselka-priyutovo (дата обращения: 25.02.2021).
4. Глухов А.З. Динамика содержания биологически активных веществ в цветках L.Sambucusnigra в зависимости от степени техногенного загрязнения / А.З. Глухов, Н.А. Виноградова // Промышленная ботаника. – 2018. – Т. 18. – № 3. – С. 29–34.
5. Неверова О.А.Особенности изменений некоторых физиолого-биохимических и биофизических показателей у древесных растений в условиях промышленного города / О.А. Неверова // Современные проблемы аграрной науки и пути их решения: мат. Всерос. науч.-практ. конф. –Ижевск: ФГОУ ВПО Ижевская ГСХА, 2005. – С. 220–222.
6. Бухорина И.Л.Эколого- биологические особенности древесных растений в урбанизованной среде: монография / И.Л. Бухарина, Т.М. Поварницина, К.Е. Ведерников. –Ижевск: ФГОУ ВПО Ижевская ГСХА, 2007. – 216 с.
7. Государственная фармакопея РФ. – XIV изд. – Москва : Научн. центр экспертизы средств медицинского применения, 2018. – Том IV.[Электронный ресурс]URL: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/14_4/HTML/1/index.html (дата обращения: 26.02.2021).
8. Гюльбякова Х.Н.Изучение травы белокудренника черного с целью создания новых лекарственных средств / Х.Н. Гюльбякова, С.Г. Тираспольская, Г.В. Алфимова и др// Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2012. – Т. 14. – №5(3). – С.727–730.
9. Kompantseva, E.V. Methods for the analysis of components of a bisoph-plus solution / E.V. Kompantseva, K.N. Gyul'byakova // Pharmaceutical Chemistry Journal. – 2001. – Vol. 35. – № 11. – P. 639–641. DOI 10.1023/A:1015110330573.

Список литературы на английском языке /ReferencesinEnglish

1. Gulbyakov N.R. Izmenenie chislovyh pokazatelej i soderzhaniya dubil'nyh veshchestv v kore lipy melkolistnoj v zavisimosti ot mesta proizrastaniya [Changes in numerical indicators and the content of tanninng materials in the bark of small-leaved linden depending on the vegetation area] / N.R. Gulbyakov, S.A. Davydova, H.N. Gulbyakova // Razrabotka, issledovanie i marketing novoj farmacevticheskoj produkcii [Development, research and marketing of new pharmaceutical products]: Collection of scientific papers. – Pyatigorsk: Advertising and Information Agency on Kavminvody, 2021. – 24–29. [in Russian]
2. Orlovskaya T.V., Izuchenie kory lipy serdcelistnoj s cel'yu sozdaniya novyh lekarstvennyh sredstv [The study of the bark of the linden cordial in order to create new medicines] / T.V. Orlovskaya, H.N. Gulbyakova, N.N. Guzhva et al. // Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya [Modern problems of science and education]. – 2013. – № 2. [Electronic resource]. URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=8561 (accessed: 21.06.2021). [in Russian]
3. Seidafarov R.A. Lipa melkolistnaya (Tilia cordata Mill.) v tekhnogennyh usloviyah poselka Priyutovo [Small-leaved linden (Tilia cordata Mill.) in the technogenic conditions of Priyutovo] / R.A. Seidafarov // Vestnik KrasGAU [Bulletin of KrasGAU]. 2013. №4. [Electronic resource]. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/lipa-melkolistnaya-tilia-cordata-mill-v-tehnogennyh-usloviyah-poselka-priyutovo (accessed: 25.02.2021). [in Russian]
4. Glukhov A.Z. Dinamika soderzhaniya biologicheski aktivnyh veshchestv v cvetkah L.Sambucus nigra v zavisimosti ot stepeni tekhnogennogo zagryazneniya [Dynamics of the content of biologically active substances in the flowers of L. Sambucus nigra depending on the degree of technogenic pollution] / A.Z. Glukhov, N.A. Vinogradova // Industrial Botany [Promyshlennaya botanika]. – 2018. – Vol. 18. – No. 3. – P. 29–34. [in Russian]
5. Neverova O.A. Osobennosti izmenenij nekotoryh fiziologo-biohimicheskih i biofizicheskih pokazatelej u drevesnyh rastenij v usloviyah promyshlennogo goroda [Specifics of changes in some physiological, biochemical and biophysical parameters of woody plants in the conditions of an industrial city] / O.A. Neverova // Sovremennye problemy agrarnoj nauki i puti ih resheniya [Modern problems of agricultural science and their solving]: materials of All-Russian scientific and practical conference –Izhevsk State Agricultural Academy, 2005. – P. 220–222. [in Russian]
6. Bukhorina I.L. Ekologo-biologicheskie osobennosti drevesnyh rastenij v urbanizovannoj srede [Ecological and biological features of woody plants in urban environment]: monograph / I.L. Bukharina, T.M. Povarnitsina, K.E. Vedernikov. Izhevsk: Izhevsk State Agricultural Academy, 2007. – 216 p. [in Russian]
7. The State Pharmacopoeia of the Russian Federation. – 14 edition. – Moscow : Scientific. Center for the Examination of Medical Products, 2018. – Volume IV.[Electronic resource]. URL: http://resource.rucml.ru/feml/pharmacopia/ 14_4/HTML/1/index.html (accessed: 04/26/2019) [in Russian]
8. Gulbyakova H.N. Izuchenie travy belokudrennika chernogo s cel'yu sozdaniya novyh lekarstvennyh sredstv [The study of the herb of the black whitecoat in order to create new medicines] / H.N. Gulbyakova, S.G. Tiraspolskaya, G.V. Alfimova et al. // Izvestiya Samarskogo nauchnogo centra Rossijskoj akademii nauk [News of Samara Scientific Center of the Russian Academy of Sciences]. – – Vol. 14. – №5 (3). – P.727–730. [in Russian]
9. Kompantseva, E.V. Methods for the analysis of components of a bisoph-plus solution / E.V. Kompantseva, K.N. Gyul'byakova // Pharmaceutical Chemistry Journal. – 2001. – Vol. 35. – № 11. – P. 639–641. DOI 10.1023/A:1015110330573.