Горчакова О.В.

Научный сотрудник, кандидат медицинских наук, ФГБУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной лимфологии» СО РАМН,

ОЗОНАППЛИКАЦИЯ КАК СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ФУНКЦИИ ЛИМФАТИЧЕСКОГО УЗЛА НА ПОЗДНЕМ ЭТАПЕ ОНТОГЕНЕЗА

Аннотация

В работе представлена морфофункциональная характеристика лимфатического узла при проведении озонокоррекции на позднем этапе онтогенеза. С возрастом усиливаются признаки старения лимфоидной ткани – склероз, изменения цитологии и площади структурно-функциональных зон лимфатического узла, ответственных за дренаж и иммунитет. При озонаппликации модулируется структурно-иммунный ответ зон лимфатического узла с оптимизацией его синусной системы. Это обосновывает целесообразность применения озонотерапии для повышения иммунной и дренажной функций лимфатического узла в позднем периоде онтогенеза.

Ключевые слова: лимфатический узел, онтогенез, геронтология, озонотерапия

Gorchakova O.V.

Science officer, сandidate of medical science, Institute clinical and experimental lymphology» of SB RAMS

OZONEAPPLICATION AS THE WAY OF INCREASE OF FUNCTION OF THE LYMPH NODE AT LATE STAGE OF ONTOGENESIS

Abstract

In work is presented a morphofunctional characteristic of a lymph node after ozonecorrection at the late stage of ontogenesis. Ageing signs of lymphoid tissue are amplify a sclerosis, changes of cytology and the area of structurally and functional zones of the lymph node responsible for a drainage and immunity. The structurally-immune answer of zones of a lymph node is modulated after ozoneapplication. Sinus system of a lymph node is optimized after ozoneapplication. It proves expediency of ozoneapplication for increase of immune and drainage functions of a lymph node in the late period of ontogenesis.

Keywords: lymph node, ontogenesis, gerontology, ozonetherapy

Геронтология добилась значительных успехов, благодаря новейшим достижениям биологии и медицины [1-4]. Тем не менее, возрастзависимые заболевания показывают неуклонные тенденции к росту. Патогенетически с этим связана лимфатическая система, изменения которой нарушает процессы детоксикации в лимфатическом регионе из-за развития склеротических процессов в органах и тканях [2, 5-9]. Поэтому выявление возрастных изменений в регионарном лимфатическом узле является важным для понимания патогенеза и саногенеза при поиске эффективных средств, повышающих дренажно-детоксикационную и иммунную функции лимфоузлов [1, 3].

В настоящее время всё более настойчиво проявляется интерес к немедикаментозным методам лечения [10]. Одним из таких методов является лечебное применение озона в различных областях медицины и доказано, что озон оказывает комплексное, интегральное воздействие на организм человека [11-14], оставаясь приоритетным направлением научных исследований [13]. Но за пределами остается лимфатическая составляющая механизма действия озонотерапии, и возникает насущная необходимость в научном обосновании целесообразности озонотерапии для коррекции возрастных изменений лимфоидной и лимфатической систем. Результат имеет практическое значение для оптимизации реабилитации в позднем периоде онтогенеза, что и обусловливает актуальность исследования.

Цель настоящего исследования – оценить возможность озонотерапии в повышении функции лимфатического узла при наличии возрастных изменений в эксперименте.

Материал и методы исследования. Эксперимент проведен на 160 белых крысах-самцах Wistar разного возраста (молодые – 3-5 месяцев и старые – 12-15 месяцев) с соблюдением принципов гуманности, изложенных в директивах Европейского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинской декларации, а также в соответствии «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985), приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г. Животные получали при свободном доступе к воде стандартную диету, которая включала экструдированный комбикорм ПК-120-1.

В эксперименте осуществляли озонаппликацию на область лимфосбора паховых лимфатических узлов посредством озонированного оливкового масла по 15-20 минут через день, на курс 14 процедур. Насыщение оливкового масла озоном производили аппаратом ОП1-М с устройством для озонирования. Лимфотропная терапия путем аппликаций дает положительные результаты при отсутствии побочных явлений [15], что является основанием для ее использования в медицине.

Изучение осуществляли в соответствии с требованиями к гистологическому исследованию лимфоузлов [16-18]. Забранные кусочки регионарного лимфоузла фиксировали в 10 % нейтральном формалине. Далее следовала классическая схема проводки и заливки материала в парафин с последующим приготовлением гистологических срезов. Гистологические срезы лимфоузлов окрашивали гематоксилином и эозином, азуром и эозином, толуидиновым синим. Морфометрический анализ осуществляли с помощью морфометрической сетки [18], которую накладывали на срез лимфоузла. Подсчитывали пересечения сетки, приходящихся на весь срез лимфоузла в целом и раздельно на каждую его структуру – капсулу, корковое плато, лимфоидные узелки, паракортекс, мякотные тяжи и синусы, с перерасчетом в проценты [18, 19]. При цитоанализе лимфатических узлов подсчитывали число клеток на стандартной площади 1600 мкм² с их дифференцировкой на бласты, средние и малые лимфоциты, плазмоциты, макрофаги и другие [16].

Полученные данные подвергали статистической обработке с определением средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (±m) и достоверности различий при Р < 0,05 с использованием программы статистического анализа StatPlus Pro 2009, AnalystSoft Inc.

Результаты и их обсуждение. Лимфатические узлы являются частью лимфатического русла [20], и с возрастом изменение лимфотока связано с прогрессирующим снижением капилляризации тканей [5, 8, 9] и структурной реорганизацией лимфоузла [3, 7], как проявление естественного адаптационно-регуляторного процесса (табл. 1). Невозможно изолированно рассматривать возрастную эволюцию и старение лимфатической системы, которые наглядно проявляются в структуре лимфатического узла. На этапе позднего онтогенеза структура лимфатического узла изменена из-за нарушенного динамического равновесия между регионом лимфосбора и лимфатическим узлом [3, 8]. В лимфатических узлах с возрастом происходит утолщение капсулы, развитие соединительной ткани вокруг сосудов, синусов в лимфоидной паренхиме. Обобщая процессы старения лимфоузлов, нужно отметить, что в старости имеет место инволюция лимфоидной ткани, которая замещается в большей или меньшей степени соединительной или жировой тканью [3, 7, 21]. Наряду с этим отмечена локализация субкапсулярного склероза параллельно краевому синусу в периферической коре (рис. 1). Это является отягощающим моментом возрастных изменений, когда нарушаются структура лимфоидной дольки и пассаж лимфы через лимфоузел. Степень склероза в лимфоузле и его проявления очень важны для прогноза [5, 7].

Одновременно наблюдается компактизация лимфатического узла геронтов с изменением площади структурно-функциональных зон лимфатического узла, ответственных за клеточный и гуморальный иммунитет (табл. 1). Увеличивается в 1,6 раза площадь, занимаемая корковым плато, в лимфатическом узле геронтов в сравнении с молодыми животными. Происходит уменьшение площади лимфоидных узелков, особенно содержащих герминативные центры, что указывает на снижение пролиферативных процессов в лимфатическом узле с возрастом. Паракортекс может сохранять свои размеры при компактном расположении лимфоидных клеток по периферии или в виде отдельных полос, но его структура местами обеднена клетками. Аналогичная реакция так называемого «клеточного опустошения» без признаков распада лимфоцитов имеет место в лимфоидных органах при разных патогенных воздействиях [22, 23]. При этом формируется недостаточность клеточного звена иммунитета лимфатического узла геронтов. Мозговые синусы лимфатических узлов геронтов выглядели широкими образованиями, пронизывающими всю ткань узла (рис. 1). Отмечено увеличение в 2,3 раза размера мозгового синуса лимфатического узла (табл. 1). Эти изменения указывают на развитие диспропорции притока в лимфатический узел и оттоком лимфы из него. При этом скорость заполнения афферентного лимфатического русла и лимфоузла зависит от его морфотипа [6, 20], определяемого соотношением коркового и мозгового вещества, и структурной целостности лимфоидной дольки [3]. Именно сохранность лимфоидной дольки определяет функциональную стабильность лимфоузла, значимую в позднем онтогенезе и необходимую для выполнения дренажно-детоксикационной функции. Лимфатический узел испытывает состояния функциональной напряженности при наличии морфологических эквивалентов компенсации при старении.

Профилактика возрастных изменений лимфоидной и лимфатической систем с повышением ее функциональной активности может быть достигнута применением озонотерапии. Трансдермальный эффект озонапликации вносит свой вклад в изменение структурно-функциональных зон лимфатического узла на этапе позднего онтогенеза. В сравнении без коррекции у старых животных на стороне озонаппликации в лимфатическом узле отмечено статистически достоверное уменьшение площадей коркового плато (в 1,7 раза), паракортекса (в 1,5 раза), мозгового синуса (в 1,8 раза) на фоне усиления пролиферативной активности клеток структурно-функциональных зон (табл. 1, 2). Характер изменения площади коркового плато у старых животных предполагает модулирующее действие озонаппликации, то есть наблюдается уменьшение высоких показателей и увеличение низких показателей площади структурно-функциональных зон лимфатического узла (табл. 1). В результате озонаппликация происходит оптимизация синусной системы лимфатического узла. Она уменьшается в 1,8 раза от избыточно расширенной синусной системы старых животных. Это важно для выполнения дренажно-детоксикационной функции лимфатического узла.

В корковом веществе лимфоидные клетки распределяются равномерно после озонотерапии и усиливается гетерогенность их популяции (рис. 2). Сравнительный анализ клеточного состава у старых животных после озонаппликации и без нее показал следующее (табл. 2): в лимфоидных узелках статистически значимое увеличение в 2,5 раза лимфобластов, в 1,3-1,4 раза малых и средних лимфоцитов, макрофагов; в паракортексе статистически значимое увеличение в 2 раза средних лимфоцитов, в 1,5 раза малых лимфоцитов, в 1,43 раза макрофагов; в мякотных тяжах статистически значимо увеличение в 2 раза зрелых плазмоцитов, в 1,58 раза малых лимфоцитов, в 1,35 раза малых лимфоцитов; в мозговом синусе статистически значимо увеличивается в 1,26 раза число малых лимфоцитов, в 1,44 раза плазмоцитов, уменьшается в 2,37 раза макрофагов, в 2 раза эозинофильных гранулоцитов на единицу площади. Остальные клетки не показали статистически значимой разницы с показателями их числа на единицу площади, имеющих место у старых животных после озонаппликации и без нее. Возможно, что изменение плотности расположения клеток на единицу площади отражает как изменение площади структурно-функциональных зон, так и направленный процесс миграции лимфоидных клеток внутрь лимфатического узла и увеличение данного показателя для паракортикальной зоны, мозговых тяжей в результате озонотерапии (табл. 2). Увеличение плотности клеточных элементов в структурно-функциональных зонах после озонотерапиии свидетельствует о формировании иммунного ответа по смешанному типу. Полученные данные указывают на влияние озона (озонидов) на клеточный и гуморальный иммунитет, подтверждая иммуностимулирующее действие [11-14, 22, 24, 25]. Наиболее демонстративно это проявляется у старых животных. Применение регионарной озонаппликации обеспечивает активное лимфообразование и лимфоток по направлению к регионарному лимфатическому узлу [3, 11, 24].

Применением озонаппликации достигается двухуровневое воздействие на лимфатическую систему (тканевое звено лимфатического русла и лимфатический узел), что позволяет ее рассматривать как лимфотропную технологию коррекции изменений, вызванных старением. Региональная лимфотропная озонаппликация позволяет обеспечить направленный транспорт озона (озонидов) в ткани органа-мишени [24, 25], тем самым вызывая структурно-клеточную реорганизацию лимфатического узла с повышением его дренажно-детоксикационной и иммунной функций на этапе позднего онтогенеза.

Заключение. Структурно-клеточная характеристика лимфатического узла отражают общий процесс старения, касаясь в основном соединительнотканного компонента органа на фоне сниженного лимфопоэза. Для прогноза функции лимфатического узла важна локализация склеротического процесса. Озоноаппликация на территории лимфосбора пахового лимфатического узла вызывает изменения со стороны структурно-функциональных зон, предполагая модулирующее действие на позднем этапе онтогенеза. При этом достигается оптимизация синусной системы и увеличение клеточной плотности в структурно-функциональных зонах лимфатического узла старых животных. Озоноаппликация усиливает иммунный потенциал и дренажную функцию лимфатического узла. Это определяет целесообразность применения озонотерапии в программах эндоэкологической реабилитации и антистарения.

Таблица 1. Площади структурно-функциональной зон лимфатического узла в разные возрастные периоды и после озонаппликации, %

Структуры лимфатического узла	Молодые животные (3-4 мес.)	Старые животные (12-15 мес.)
	Без коррекции	Без коррекции	Озон-аппликация
	1	2	3
Капсула	1,16±0,09	1,62±0,07°	1,79±0,10°
Субкапсулярный синус	0,57±0,07	0,41±0,04	0,49±0,03
Корковое плато	1,20±0,09	1,90±0,08°	1,12±0,08*°
Лимфоидные узелки без герминативного центра	1,16±0,06	1,24±0,08	1,35±0,06
Лимфоидные узелки с герминативным центром	1,61±0,17	1,37±0,12°	1,21±0,08
Паракортекс	7,14±0,67	8,94±0,49	5,77±0,38*
Мозговые тяжи	5,20±0,32	5,02±0,34	4,88±0,25
Мозговой синус	1,30±0,12	2,94±0,20°	1,59±0,17*
Общая площадь	19,35±1,03	23,44±1,35	18,2±0,68*
°P_1-2< 0,05 *P_2-3< 0,05

Таблица 2. Количественная характеристика клеток на единицу площади структурно-функциональных зон лимфатического узла в условиях озонаппликации

Клетки	Молодые животные (3-5 мес.)		Старые животные (12-15 мес.)
	Без коррекции	Озон- аппликация	Без коррекции	Озон- аппликация
	1	2	3	4
Лимфоидные узелки с герминативным центром
Лимфобласты	3,70±0,24	4,0±0,12	2,97±0,13	5,17±0,47*
Средние лимфоциты	3,0±0,12	4,0±0,12*	5,0±0,24°	7,0±0,48*°
Малые лимфоциты	11,82±0,24	11,75±0,28	8,13±0,35°	15,67±0,88*°
Макрофаги	2,60±0,24	3,50±0,30	2,83±0,30	4,0±0,23*
Мозговые тяжи
Плазмобласты	3,60±0,12	5,25±0,11*	3,67±0,11	3,33±0,29°
Зрелые плазмоциты	3,81±0,12	6,71±0,24*	2,40±0,41°	4,83±0,38*°
Малые лимфоциты	4,60±0,24	4,00±0,12	5,50±0,35	8,67±0,83*°
Средние лимфоциты	3,0±0,12	2,0±0,11*	2,83±0,30	3,83±0,30°
Макрофаги	5,0±0,13	3,0±0,12*	3,67±0,30°	2,83±0,29*
Ретикулярные клетки	1,23±0,11	1,75±0,12	1,50±0,13	1,67±0,24
Эозинофильные гранулоциты	0,67±0,09	0,75±0,06	1,40±0,11°	0,50±0,07*
Паракортекс
Бласты	5,20±0,18	4,0±0,24*	5,17±0,30	5,67±0,24°
Средние лимфоциты	4,80±0,29	3,50±0,18*	3,12±0,30°	6,33±0,24*°
Малые лимфоциты	12,0±0,47	11,0±0,43	8,01±0,30°	7,50±0,45*°
Ретикулярные клетки	1,80±0,24	2,50±0,48	1,67±0,08	1,33±0,13
Плазмоциты	1,40±0,12	1,21±0,13	2,67±0,13°	3,83±0,12*°
Макрофаги	5,0±0,83	4,75±0,36	1,01±0,30°	1,17±0,12°
Эозинофильные гранулоциты	0,49±0,06	0,50±0,12	0,50±0,12	0,50±0,08

Примечание: *P_1-2,₃_-₄< 0,05 °P_{1-3, 2-4}< 0,05

Рис. 1. Элементы субкапсулярного склероза в корковом плато, расширенные синусы лимфатического узла. Старые животные. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение ок. 7, об. 10.

Рис. 2. Усиление гетерогенности популяции лимфоидных клеток в корковом веществе лимфатического узла. Озонотерапия. Старые животные. Окраска толуидиновым синим. Увеличение ок. 7, об. 20.

OZONEAPPLICATION AS THE WAY OF INCREASE OF FUNCTION OF THE LYMPH NODE AT LATE STAGE OF ONTOGENESIS

References