AGE-RELATED INVOLUTION OF THE VASCULAR SUPPLY OF THE ORAL MUCOUS COAT

Количество людей, страдающих адентией, как врожденной, так и приобретенной, локальной или генерализованной, на фоне возрастных и патологических изменений слизистой оболочки рта (СОР) является серьёзной проблемой для всех возрастных групп населения как в мировом масштабе, так и для России в частности

Цель исследования: выполнить сравнительный анализ распределения VEGF и CD34 позитивных клеток в структурах СОПР человека в возрастном аспекте.

Предметом исследования являлись пациенты, нуждающиеся в протезировании зубов после травм и адентии неинфекционной этиологии, с различной локализацией. С помощью иммуногистохимии изучены фенотипы и гистофизиологические характеристики системы клеточных взаимодействий VEGF165a и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны.

Объектом изучения были 184 человека, из которых 19 человек вошли в группу контроля (ГК), а 165 (73 мужчин и 92 женщины), в возрасте от 20 до 85 лет, у которых имели место дефекты зубных рядов, составили группу наблюдения. Предмет исследования – биоптаты слизистой оболочки десны в зоне протезного ложа пациентов с адентией, нуждающихся в протезировании зубов; метод: иммуногистохимическое фенотипирование на основе выявления экспрессии VEGFa и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны.

Иммуноокрашивание кератиноцитов из СОПР оценивалось количественно путем оценки процента окрашенных клеток. Микрофотографии были сделаны цифровой камерой в световом микроскопе (Olympus BX41, Япония) с программным обеспечением Micrometrics SE Premium 4.4. Все изображения были сохранены в формате JPGE. Клетки подсчитывались с использованием пакета программного обеспечения ImageJ. Иммуномаркировка VEGF и CD34 оценивалась для цитоплазматического окрашивания. Положительно окрашенные клетки подсчитывались в пяти случайно выбранных полях при увеличении ×400. Было рассчитано общее количество положительных клеток на 100 полях зрения. Иммуногистохимическая экспрессия микрососудистой плотности (MVD) была оценена через экспрессию VEGF и CD34. MDV была количественно определена путем подсчета внутрислизистых микрососудов, положительных на CD34, по пяти HPF к общей площади, эквивалентной увеличению 200× (0,7386 мм2).

Данное исследование было проведено в соответствии с основополагающими этическими принципами Хельсинкской Декларации, Правилами GCP (Good Clinical Practice, Надлежащая Клиническая Практика) и одобрено Междисциплинарным комитетом по этике ФГАОУ ВО ДВФУ Министерства образования и науки Российской Федерации (протокол №7).

Анализ возрастных изменений структур СОПР показал, что в старших возрастных группах ярко выражена кератинизация эпителиальных пластов, наблюдаются неравномерные процессы ороговения клеток, нарастает количество апоптозирующих кератиноцитов (рисунок 1).

Рисунок 1 - Слизистая оболочка пациентов в старших возрастных группах: 

а - 56 лет; б - 67 лет; в - 75 лет; г - эпителий СОПР пациента 79 лет, неравномерная кератинизация

Примечание: окраска гематоксилином и эозином; микрофото; увеличение а, б - х100; в, г - х400

DOI:10.60797/IRJ.2025.153.48.1

Анализ динамики изменения сосудистого бассейна собственной пластинки слизистой оболочки, прилежащей к базальной мембране эпителия и факторы, влияющие на ангиогенез и его перестройку в различных возрастных группах показал снижение количества сосудов в собственной пластинке слизистой оболочки. Метод иммуногистохимии на выявление локализации VEGF позитивных клеток позволил установить, что маркер ангиогенеза в структурах СОПР идентифицируется преимущественно в эпителиальной пластинке. Наиболее высокая активность выявлена в базальных слоях эпителиальных пластов (рисунок 2).

Рисунок 2 - Иммуногистохимия на выявление локализации VEGF позитивных клеток

Примечание: микрофото; увеличение х200

DOI:10.60797/IRJ.2025.153.48.2

VEGF позитивные клетки выявляются не только в базальном и шиповатом слоях эпителия слизистой оболочки рта, но и в поверхностных слоях, практически достигая покровного верхнего слоя. Активность маркера VEGF идентифицируется в цитоплазме кератиноцитов преимущественно вокруг ядер, снижается в вышележащих слоях эпителиальных пластов, покрывающих слизистую оболочку.

Полученные результаты по выявлению VEGF позитивных клеток, выявленных в базальном и шиповатом слоях эпителия слизистой оболочки рта дополняют новые данные об открытии ранее неизвестных свойств VEGF как важного индуктора морфогенеза в зонах, ранее известных, как не оказывающих ангиогенных эффектов. Среднее значение экспрессии VEGF составило 15,5 в нормальной слизистой оболочке, без существенных различий между старшими возрастными группами.

В наших исследованиях CD34 был положительным во всех образцах нормальной слизистой оболочки, но имел особенно высокие показатели в собственной пластинке слизистой оболочки полости рта во всех старших возрастных группах, что согласуется с данными Kargahi N, Torabinia N, Razavi SM, Tahririan D, Kamani H, Nazari M. (2018)

[4]

. Анализ результатов выявления локализации CD34 позитивной реакции показал, что активность в высшей степени проявляется в люминальной части эндотелия крупных артерий собственной пластинки СОПР, имеет сниженные показатели в эндотелии вен, а также более низкую активность проявляет в цитоплазме эндотелия капилляров. CD34 позитивность проявляется и в отростках и цитоплазме клеток в окружающей сосуды соединительной ткани. Субэндотелиальный слой крупных сосудов является CD34 негативным в отличие от средней гладкомышечной оболочки и адвентиции, проявляющих высокую позитивную реакцию (рисунок 3).

Рисунок 3 - СОПР человека: 

а - 45; б - 51; в - 60; г - 61 года

Примечание: CD34 в СОПР; иммуногистохимия на выявление локализации белка гена CD34; микрофото; ув. х200

DOI:10.60797/IRJ.2025.153.48.3

Идентификация CD34 позитивности в стенках капилляров и вен в цитоплазме эндотелия отмечается в люминальной зоне и вокруг ядер. Базальная часть эндотелия не проявляет высокой позитивности. В стенке артериолы CD34 позитивность отмечается в эндотелии, мышечной оболочке, а также в адвентициальной.

В субэндотелиальном слое выявляются крупные хромофобные клетки с неокрашенной цитоплазмой и ядрами овальной формы. Форма клеток вытянутая, близкая к веретеновидной, и соответствует спиральному расположению гладкомышечных клеток. Встречаются исключительно в средней оболочке не во всех сосудах, а только в артериях (а, б, в) и венах (г) у пациентов с адентией.

Полученные нами данные согласуются с данными Irsaliev KhI. (1993) изучавшего морфофункциональные особенности кровоснабжения слизистой оболочки щеки и показавшего с помощью методов реографии, полярографии, световой и электронной трансмиссионной микроскопии и стереоморфометрии у пациентов с частичной адентией и после протезирования изменение функциональных параметров кровообращения в СОПР. Морфологически это проявлялось стазом микрососудов, сладжированием эритроцитов, отеком стромы и полиморфно-ядерной инфильтрацией. Ультраструктура эндотелия и других компонентов микрососудов указывала на нарушение проницаемости сосудов на фоне адентии в СОПР пациентов старших возрастных групп

Определение уровня активности и расположения ангиогенных факторов путем применения маркеров для выявления локализации CD34 и VEGF может быть полезным ключевым критерием для дифференциации нормальной слизистой оболочки рта от патологически изменяющейся, включая раковые и предраковые поражения. Экспрессирующие VEGFa и CD34, клетки могут быть использованы в диагностике нарушений в системе клеточных взаимодействий в структуре СОР в возрастном аспекте. Параметры VEGFa и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны СОР имеют возрастные особенности в сравнении с группой контроля. VEGFa и CD34 позитивные клетки в зоне протезного ложа десны являются информативными показателями состояния слизистой оболочки рта, прогнозирующими реакцию на лечение. Пациенты различных возрастных групп нуждаются в подготовительный к протезированию этап в оценке VEGFa и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны. Увеличение количества VEGFa и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны является информативным морфологическим критерием прогнозирования риска патологических процессов в старших возрастных группах.