CELL AND MOLECULAR MECHANISMS OF PROINFLAMMATORY ACTIVITY OF MONOCYTES AND THROMBOGENESIS IN PATIENTS WITH DEPRESSIVE SYNDROME

В конце прошлого века в исследованиях роли моноцитов и макрофагов в патогенезе психических заболеваний было установлено важное значение этих клеток и продуцируемых ими цитокинов в развитии шизофрении [1]. В дальнейшем роль моноцитов/макрофгов в патогенезе шизофрении и БАР была подтверждена результатами многочисленных генетических исследований [2]. Кроме того, было накоплено большое количество данных, свидетельствовавших о высоком уровне в крови больных шизофренией, БАР и депрессией секретируемых активированными моноцитами провоспалительных цитокинов: ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, TNF-α; хемокинов, например, MCP-1, а также рецепторов к ним [3], [4], [5].

В настоящее время в многочисленных исследованиях ряда системных заболеваний, таких как атеросклероз, онкология, диабет, ревматоидный артрит, а также нейроиммунное воспаление доказано, что повышение ПАМ связано с развитием системного иммунного воспаления в патогенезе этих заболеваний [6], [7]. В условиях нарушения целостности гематоэнцефалического барьера активированные моноциты с помощью секретируемых ими провоспалительных медиаторов мигрируют в воспаленный или поврежденный мозг [8], взаимодействуют с клетками микроглии, астроцитами и нейронами и стимулируют секрецию этими клетками провоспалительных цитокинов и хемокинов [9], которые, в свою очередь, рекрутируют клетки микроглии в места повреждения или воспаления [10]. Все это может вызывать нейровоспаление и приводить к когнитивным дисфункциям [9] и к утяжелению психических симптомов у больных с психическими расстройствами [5]. На основании этих исследований такие психические заболевания, как шизофрения, БАР и депрессия, ассоциированные с высокими уровнями провоспалительных медиаторов, можно отнести к заболеваниям, в патогенезе которых лежит системное иммунное воспаление [4], [5].

Результаты исследований последних 20 лет свидетельствуют, что одним из представлений, лежащих в основе развития иммунного воспаления, является регуляция активации и направленной миграции моноцитов помимо цитокинов и хемокинов продуктами деградации фибрина и коллагена с последующим взаимодействием активированных моноцитов с тромбоцитами с формированием моноцит-тромбоцитарных агрегатов (МТА) [11], [12], [13]. Показано, что МТА, в свою очередь, индуцируют активацию моноцитов с провоспалительным фенотипом [14] и секрецию ими провоспалительных цитокинов, хемокинов, а также экспрессию молекул клеточной адгезии [15], [16], что приводит к рекрутированию МТА в места повреждения сосудов, что помогает поддерживать и модулировать воспаление.

Известно, что активированные моноциты/макрофаги синтезируют тканевой фактор (ТФ) и запускают сложный каскад реакций, приводящих к активации тромбина и превращению фибриногена в фибрин, что обеспечивает процесс свертывания крови [17], [18]. В исследованиях, направленных на изучение процесса тромбообразования у больных с психическими расстройствами, в частности, у пациентов с рецидивирующими депрессивными расстройствами, рядом авторов было отмечено значительное повышение прокоагулянтной активности, ассоциированной с тромбоцитарным ТФ, а у больных с ранним диагнозом депрессии выявлено повышенное образование фибрина [19]. При этом депрессивные расстройства у больных часто сопровождались  ишемической болезнью сердца и увеличением риска сердечного приступа [20].

Установлено, что активированные тромбоциты и моноциты отщепляют от своей мембраны микровезикулы (МВ), которые экспрессируют TФ и катализируют на своей поверхности каскад коагуляции [21], что приводит к образованию фибрина и к усилению процесса микротромбообразования за счет образования МВ спонтанных сгустков.

Все это вместе свидетельствует о важной роли активированных моноцитов в клеточно-молекулярных механизмах тромбообразования в развитии системного иммунного воспаления. Вместе с тем у больных с психическими расстройствами этот вопрос до настоящего времени остается до конца не изученным. В связи с этим целью и задачей настоящего исследования было изучение клеточно-молекулярных механизмов ПАМ и тромбообразования в процессе развития системного иммунного воспаления у больных с депрессивным синдромом до и после психотропной терапии.

С помощью  иммунологических и биохимических методов обследовано до и после лечения 66 больных с депрессивным синдромом женского пола в возрасте от 15 до 56 лет (средний возраст  29,0± 1,4 года). В качестве контрольной группы  обследовано 23 психически и соматически здоровые женщины соответствующего возраста. Все больные находились на стационарном лечении в клиническом Отделе по изучению эндогенных психических расстройств и аффективных состояний ФГБНУ «Научного центра психического здоровья» и  обследовались дважды: при поступлении в клинику и после проведенного психотропного  лечения при выписке на этапе редукции психопатологических расстройств.

Настоящую работу  проводили  в соответствии с этическими стандартами Локального этического комитета ФГБНУ «Научного центра психического здоровья».

Иммунологические исследования  включали  оценку уровня провоспалительной активности моноцитов (ПАМ)  у больных и здоровых с помощью разработанного нами метода подсчета  количества больших моноцитов  с диаметром от 12,5 до 15 мкм и общего количества моноцитов с диаметром от 9 до 15 мкм на многофункциональном счетчике и анализаторе клеток Multisizer MS-4 (Beckman Сoulter, USA). Результат рассчитывали как отношение в процентах количества больших моноцитов к общему количеству моноцитов и представляли в виде индекса провоспалительной активности моноцитов (ИПАМ) [22].

Биохимические исследования у больных и здоровых включали в себя постановку теста тромбодинамики (ТД), который лежит  в основе нового метода диагностики нарушений системы плазменного гемостаза, позволяющего выявить риски тромбообразования. Для этого использовали анализатор тромбодинамики  Т-2 (ООО «Гемакор», Москва), который дает возможность наблюдать процессы коагуляции в каналах кюветы, заполненных плазмой крови. В отличие от стандартных тестов, в которых активация свертывания плазмы происходит во всем объеме исследуемого образца,  в применяемом нами тесте используется плоская поверхность активатора, на которую наносится  тромбопластин, (содержащий ТФ и липиды), который инициирует на этой поверхности процесс свертывания и образования сгустка. При этом на экране монитора наблюдается непрерывный рост яркости, который объясняется ростом и уплотнением фибринового сгустка. Все преаналитические процедуры для исследования свертывания крови проводили согласно инструкции производителя (OOO Гемакор, Москва, Россия). Процессы, происходящие в каналах кюветы, фиксировались анализатором ТД и записывались в виде видеофайлов на персональный компьютер, связанный с анализатором. Среди параметров ТД исследовались такие, как Tlag – время задержки начала образования сгустка; Vi (мкм/мин) – начальная скорость роста сгустка; Vst (мкм/мин) – стационарная скорость роста сгустка, характеризует состояние внутреннего пути коагуляции, зависит от концентрации факторов V, VIII, IX, X, XI и тромбина, а также от концентрации спонтанных сгустков, образуемых МВ; CS (мкм) – размер фибринового сгустка через 30 мин после начала теста, который является интегральной характеристикой работы плазменного звена свертывания. Также определяли следующие параметры теста: CoMaxVal_1 (coagulation maximum value, усл. ед.) – максимальная яркость сгустка, растущего от активатора, в домене 1 (Рис.1., а); CoMaxVal_2 - максимальная яркость сгустков, характеризующих появление спонтанных сгустков в нижней части кюветы, в домене 2 (Рис.1., б).

Рисунок 1 - Домены (обозначены красным) в каналах кюветы:

а - домен 1; б - домен 2

DOI:10.23670/IRJ.2022.126.49.1

Статистический анализ проводили с помощью программы STATISTICA, версия 10 (Statsoft Inc., США). Для оценки исследуемых параметров использовали t-критерий Стьюдента для зависимых и независимых переменных. Для выявления связей между рассматриваемыми показателями проводили оценку линейной регрессии с помощью критерия Фишера (F-ratio). Статистически значимые различия отмечали при р< 0,05; различия на уровне тенденции отмечали при 0,1> р≥ 0,05.

Результаты оценки значений изученных показателей у больных с депрессивным синдромом и здоровых представлены в таблице 1.

Можно видеть, что в группе больных до лечения значения показателей ИПАМ, Vst и CS были существенно выше (р < 0,001, р < 0,05 и р < 0,05, соответственно), а величина Tlag была значительно ниже (р < 0,001) по сравнению с их значениями в контроле. Значения показателей CoMaxVa_1 и CoMaxVal_2 превышали значение в контроле на уровне тенденции. Другими словами у обследованных больных с высокой степенью достоверности выявлялось повышенное количество больших моноцитов, которое на основании наших предыдущих исследований [22], [23] может свидетельствовать о высоком по сравнению с контролем уровне провоспалительной активности моноцитов у больных с депрессивным синдромом. Изменение показателей тромбодинамики: укорочение времени задержки начала образования фибринового сгустка параллельно с повышением стационарной скорости роста сгустка и его максимальной яркости, зависящих от концентрации МВ и

Образования прокоагулянтных спонтанных сгустков, а также увеличение его размера может свидетельствовать, по данным литературы, об активации процесса тромбообразования у больных с этой патологией [19], [24]. Выявленные нами закономерности, указывающие на повышение провоспалительной активности моноцитов и прокоагулянтной активности плазмы с образованием с помощью МВ прокоагулянтных спонтанных сгустков, могут быть связаны с развитием системного иммунного воспаления у больных с депрессивным синдромом, что подтверждается данными литературы [4], [5], [21].

Результаты, полученные в группе больных после применения комбинированной терапии антидепрессантами и антипсихотиками, выявили существенное снижение значений показателей ИПАМ, Vst и CS по сравнению с их величинами до лечения (р < 0,001, р < 0,05 и p<0,01, соответственно). При этом значения этих показателей практически не отличались от контроля. Что касается Tlag, то после лечения, напротив, отмечалась тенденция к повышению величины этого показателя. Тем не менее он оставался значительно сниженным по сравнению с контролем (р < 0,05). На основании полученных данных можно предположить, что уменьшение уровня ПАМ и ингибирование активности процесса тромбообразования у больных с депрессивным синдромом после терапии антидепрессантами и нейролептиками свидетельствует о снижении остроты системного иммунного воспаления у больных с этой патологией, что подтверждается данными литературы [24]. Результаты анализа, проведенного с помощью линейной регрессии, выявили после лечения в группе больных положительную связь между значением ИПАМ и величиной показателя тромбодинамики CoMaxVal_2, характеризующего уровень образования спонтанных сгустков, формируемых МВ (r=0,7; р<0,01). С нашей точки зрения это наблюдение может опосредованно свидетельствовать о существовании возможной сигнальной связи, осуществляемой с помощью TФ, экспрессируемого микровезикулами, между активированными моноцитами и активностью тромбообразования у больных с депрессивным синдромом.

Таким образом, полученные результаты выявили у больных с депрессивным синдромом одновременное повышение провоспалительной активности моноцитов и прокоагулянтной активности плазмы с образованием прокоагулянтных спонтанных сгустков, которое может быть связано с развитием системного иммунного воспаления в патогенезе этого заболевания. После комбинированной терапии антидепрессантами и антипсихотиками выявлялось снижение как провоспалительной активности моноцитов, так и активности тромбообразования, что указывало на возможность снижения выраженности системного иммунного воспаления у больных с этой патологией.