THE CREATION OF AUTOPROBIOTICS PREPARATION CONTAINING AN ACTIVE COMPLEX OF BIFIDOBACTERIA AND LACTOBACILLI

Кириленко М.А.¹, Кузнецов О.Ю.²

¹ Ассистент, ² доктор биологических наук, профессор, Ивановская медицинская академия

Работа выполнена при поддержке гранта Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере № 500ГУ1/2013

СОЗДАНИЕ АУТОПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА, СОДЕРЖАЩЕГО АКТИВНЫЙ КОМПЛЕКС БИФИДОБАКТЕРИЙ И ЛАКТОБАКТЕРИЙ

Аннотация

Микробная экология каждого человека представляет собой чрезвычайно сложную по составу систему. Следовательно, трудно разработать и подобрать эффективный пробиотик для каждого индивидуума для поддержания его нормальной микрофлоры кишечника. Это служит обоснованием для дальнейшей концепции формирования пробиотиков на основе аутоштаммов. Цель. Разработка аутопробиотического препарата содержащего комплекс живых бифидобактерий и лактобактерий присущий конкретному индивиду. Задачи: 1. Подобрать оптимальные питательные среды для выделения комплекса бифидобактерий и лактобактерий. 2. Отработать технологические приемы получения препарата, содержащего аутопробиотические штаммы вышеуказанных микроорганизмов.

Ключевые слова: аутопробиотик, лактобактерии, бифидобактерии.

Kirilenko M.A.¹, Kuznetsov O.Y.²

¹Assistant, ²PhD in Biology, Professor, Ivanovo Medical Academy

THE CREATION OF AUTOPROBIOTICS PREPARATION CONTAINING AN ACTIVE COMPLEX OF BIFIDOBACTERIA AND LACTOBACILLI

 Abstract

Microbial ecology of each person is an extremely complex system. Therefore, it is difficult to develop and choose an effective probiotic for each individual to maintain its normal microflora. This serves as a further justification for the concept of the formation of probiotics based on autostrains. Goal. Autoprobiotics development of complex preparation containing live bifidobacteria and lactobacilli specific individual. Objectives: 1. To select the optimal nutrient medium for isolation of the complex of bifidobacteria and lactobacilli. 2. To work out technological methods of obtaining the drug, containing autoprobiotics strains of the above microorganisms.

Keywords: autoprobiotics, lactobacteria, bifidobacteria.

 

Введение 

Микробная экология каждого человека представляет собой чрезвычайно сложную по составу систему. Следовательно, трудно разработать и подобрать эффективный пробиотик для каждого индивидуума для поддержания его нормальной микрофлоры кишечника [2]. Кроме того, пробиотические микробы, бывают иммунологически не сочетаемы с конкретным человеком. Поэтому вскоре после завершения их применения быстро выводятся из организма [3, 5]. Клинические и экспериментальные работы по бактериотерапии дисбактериологических нарушений кишечника показали, что наилучший эффект достигается при индивидуальном подборе собственных штаммов, а также при использовании аутофлоры [4, 6]. Все это служит обоснованием для дальнейшей концепции формирования пробиотиков на основе аутоштаммов.

Цель

Разработка аутопробиотического препарата содержащего комплекс живых бифидобактерий и лактобактерий присущий конкретному индивиду.

Задачи:

1. Подобрать оптимальные питательные среды для выделения комплекса бифидобактерий и лактобактерий.
2. Отработать технологические приемы получения препарата, содержащего аутопробиотические штаммы вышеуказанных микроорганизмов.

Материал и методы

В работе использованы классические методики бактериологии по оценке дисбактериоза кишечника (отраслевой стандарт Приказ МЗ РФ №231 от 2003г. «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника»). Разработаны и апробированы оригинальные методы создания иммунологического фильтра для выделения живых бифидобактерий и лактобактерий.

Для получения аутопробиотика следует взять у одного и того же индивидуума фекалии и слюну. Далее делают десятикратное раститрование изучаемого образца жидкой питательной средой, с привнесением селективных агентов. Готовят два ряда разведений с соблюдением правил асептики. Первый, состоит из пробирок до разведения 10^-9, он предназначен для оценки общего количественного состава бифидо и лактобактерии в исходном биоматериале. Второй, из пробирок с материалом до разведения 10^-6, он необходим для получения аутопробиотика. В пробирку с биоматериалом второго ряда 10^-6 вносят стерильный раствор слюны того же человека. После инкубирования при 38^oC на 48 часов, определяют количество бифидо, лактобабактерий, а также наличие патогенных бактерий, делая контрольные высевы [1].

Результаты

После анализа способов выделения бифидо и лактобактерий нами была предложена и впоследствии успешно апробирована методика создания индивидуального «иммунологического фильтра». Суть его заключается в следующем. Для исключения аллохтонных (транзиторных) бактерий неизбежно находящихся в исследуемом материале, добавляют слюну от определенного индивидуума. Здесь микроорганизмы связываются с IgА, происходит активация системы комплемента (СК). Предварительно выполненные нами исследования относительно физиологической устойчивости бактерий к комплементу показывают, что даже в популяциях пробиотических штаммов активно идет процесс элиминации клеток, несоответствующих для использования в лечении индивида, чья слюна была использована в исследование. Это доказывает существование «иммунологического фильтра». Образованный комплекс «микроб-антитело» атакует СК, добавленная в большом количестве, что вызывает повреждение мембраны и гибель клеток. Следует отметить тот факт, что количество таких комплексов изначально мало, поскольку аллохтонные микроорганизмы из-за серийных разведений остаются в очень малом титре.

После проверки при отсутствии посторонней микрофлоры проводят пересев материала (1:10) в жидкую питательную среду для накопления биомассы клеток бифидо и лактобактерий без добавления селективных агентов и культивируют.

Полученная биомасса является аутопробиотиком, содержащим комплекс штаммов бифидо и лактобактерий, характерных для данного индивидуального макроорганизма. Контроль за микробным представительством штаммов полученного аутопробиотика осуществляют согласно общепринятыми методами посева на различные селективные питательные среды.

Выводы

Разработан метод «имунологического фильтра» для получения комплексного аутопробиотика, содержащего живые бифидо и лактобактерии. Полученная после культивирования биомасса представляет собой аутопробиотик, содержащий бифидобактерии и лактобактерии, являющиеся истинными представителями индигенной микрофлоры хозяина и он может быть применен как препарат для восстановления и коррекции микроэкологических нарушений желудочно-кишечного тракта макроорганизма (человека и животных).

Литература

1. Сафонова М.А., Кузнецов О.Ю., Кузнецова Л.А., Кузнецов А.О., Горелова Е.М. Патент «Способ получения аутопробиотика, содержащего живые бифидобактерии и лактобациллы» №2505304, 27.01.2014.
2. Суржик А.В. Влияние пробиотической культуры Lactobacillus rhamnosus GG на иммунный ответ организма // Вопросы современной педиатрии. Научно-практический журнал союза педиатров России. 2009. Т. 8, №2. – С. 54-58.
3. Ушкалова Е.А. Роль пробиотиков в гастроэнтерологии. // Фарматека. 2007. № 6. – С.16-23.
4. Шендеров Б.А. Микрофлора человека и животных и ее функции. // М. 1998. Т. – С. 282.
5. Aleshkin V.A., Amerhanova A.M., Pospelova V.V., Afanasiev S.S., Shenderov B.A. History, present situation, and prospects of probiotic research conducted in the G.N.Gabrichevsky Institute for Epidemiology and Microbiology. // Microbial ecology in Yealth and Disease. 2008. – Р.113-115.
6. Chen C.C., Walker WA. Probiotics and prebiotics: role in clinical disease states. Adv Pediatr. 2005. – Р. 77-113.

References

1. Safonova M.A., Kuznecov O.Ju., Kuznecova L.A., Kuznecov A.O., Gorelova E.M. Patent «Sposob poluchenija autoprobiotika, soderzhashhego zhivye bifidobakterii i laktobacilly» №2505304, 27.01.2014.
2. Surzhik A.V. Vlijanie probioticheskoj kul'tury Lactobacillus rhamnosus GG na immunnyj otvet organizma // Voprosy sovremennoj pediatrii. Nauchno-prakticheskij zhurnal sojuza pediatrov Rossii. 2009. T. 8, №2. – S. 54-58.
3. Ushkalova E.A. Rol' probiotikov v gastrojenterologii. // Farmateka. № 6. – S.16-23.
4. Shenderov B.A. Mikroflora cheloveka i zhivotnyh i ee funkcii. // M. 1998. T. 1. – S. 282.
5. Aleshkin V.A., Amerhanova A.M., Pospelova V.V., Afanasiev S.S., Shenderov B.A. History, present situation, and prospects of probiotic research conducted in the G.N.Gabrichevsky Institute for Epidemiology and Microbiology. // Microbial ecology in Yealth and Disease. 2008. – Р.113-115.
6. Chen C.C., Walker WA. Probiotics and prebiotics: role in clinical disease states. Adv Pediatr. 2005. – Р. 77-113.