ПАРАМЕТРЫ СЫВОРОТОЧНЫХ АНТИТЕЛ КАК МАРКЕРЫ ИММУНОРЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ

Ездакова И.Ю.¹, Попова Е.В.²

¹ Доктор биологических наук, ²аспирант, Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р.Коваленко

ПАРАМЕТРЫ СЫВОРОТОЧНЫХ АНТИТЕЛ  КАК МАРКЕРЫ ИММУНОРЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ

Аннотация

В данной работе проведены исследования по  влиянию метаболитов C.tropicalis  на преципитирующую активность иммуноглобулинов класса G в сыворотке крови крупного рогатого скота  с помощью реакции  радиальной иммунодиффузии. Установлено, что разные животные не одинаково реагируют на один и тот же белок кандид, следовательно,  и устойчивость иммуноглобулинов к патогенам индивидуальна.

Ключевые слова: иммуноглобулины, реакция иммунодиффузии, метаболиты, кандиды, нагрузочный тест.

Ezdakova I.Yu.¹, Popova E.V.²

¹PhD in Biology, ²Postgraduate student, All-Russian Ya.R.Kovalenko Research Institute of Experimental Veterinary Medicine

PARAMETERS OF SERUM ANTIBODIES AS MARKERS IMMUNOREACTIVITY OF ANIMALS

Abstract

In this paper researches on the influence of metabolites on C.tropicalis precipitating activity of immunoglobulin G in the serum of cattle by the reaction of radial immunodiffusion. It has been established that different animals is not equally responsive to one and the same protein of Candida.

Keywords: immunoglobulins, reaction of immunodiffusion, metabolites, candida, a load test.

Иммунореактивность организма находится под контролем различных генетических факторов. Гены иммунореактивности кодируют белки главного комплекса гистосовместимости (МНС) класса II, которые играют решающую роль в распознавании антигена. Гуморальный иммунный ответ на определенный антиген  передается потомству в качестве генетической программы, по которой могут быть синтезированы специфические белки к данному антигену, т.е. гены иммуноглобулинов возникают de novo во время онтогенеза. Поэтому набор антител  для каждого организма неповторим. Из этого следует, что иммунореактивность организма  индивидуальна,  а ее оценка может показать  различия в способности давать сильный или слабый иммунный ответ, что важно при проведении иммунопрофилактики [1].

Целью данной работы было изучение влияния метаболитов C.tropicalis  на преципитирующую активность иммуноглобулинов класса G  крупного рогатого скота  на основе реакции радиальной иммунодиффузии (РИД).

Материалы и методы. В эксперименте использовали образцы крови крупного рогатого скота (n=10) и метаболиты культур C.tropicalis в фазе логарифмического роста. Культуральную жидкость фильтровали (Millex-GS 0,22µm) и  2-кратно осаждали сульфатом аммония. Затем наносили на колонку с Sephadex-75. Полученные фракции анализировали методом электрофореза в ПААГ-ДСН. Перед проведением РИД образцы  сыворотки крови инкубировали с метаболитами C.tropicalis  в течение 30 мин. при 37⁰С.

Результаты и обсуждение. В результате гель-фильтрации на Sephadex-75 метаболитов кандид было получено 6 фракций с оптической плотностью 0,02-0,03 (OD 280). Фракции концентрировали в «Concentrator plus» (Eppendorf) при  t 30⁰С в течение 3-х часов. Затем проводили электрофорез в ПААГ-ДСН (12,5%).

Электрофоретический спектр белков кандид был представлен компонентами, основная часть которых сосредоточена в области молекулярных масс меньше 10 kDa. Таким образом, нам не удалось получить синтезируемые кандидами аспартат протеазы, молекулярная масса которых по литературным источникам составляет  около 40 kDa.

Сконцентрированные в 5 раз фракции белков кандид (0,02-0,015 мг/мл) были использованы в нагрузочном тесте на основе реакции иммунодиффузии с сыворотками крови коров и телят (возраст 5-6 мес.)

Рис. 1 – Концентрация IgG в нагрузочном тесте с метаболитами кандид

Как видно на графике (рис.1) устойчивость IgG к различным фракциям кандид не одинакова, хотя  содержание белка в них находится в пределах  от 0,02 до 0,015 мг/мл. Показатели РИД фракции №28 у коров и телят коррелируют с  наибольшей концентрацией белка в метаболитах (0,02 мг/мл), но у коров снижение преципитирующей активности IgG более выражено.

При инкубации сыворотки с метаболитами кандид, по-видимому,  происходит адгезия низкомолекулярных пептидов патогенна к эпитопам молекулы IgG и блокировка центров связывания. Поэтому часть антител не может участвовать в образовании преципитата в реакции антиген-антитело. В данной работе приведены средние показатели по группам, но, по нашему мнению, у различных животных сывороточные антитела имеют индивидуальные черты,  которые и определяют резистентность организма к инфекции. Как показал эксперимент,  индивидуальные параметры нагрузочного теста значительно отличаются между собой, так, например,  ряд данных фракции 26: у 1-го теленка содержание IgG составило 6,2 мг/мл; 2 – 3,1; 3 – 18,0; 4 – 9,0; 5- 11,0 соответственно. Следовательно,  разные животные не одинаково реагируют на один и тот же белок кандид, поэтому и устойчивость иммуноглобулинов к патогенам индивидуальна.

Большинство белков, при участии которых происходит распознавание антигенов, принадлежит к суперсемейству иммуноглобулинов, т.е. Ig являются одними из основных компонентов защиты организма от инфекций. Параметры устойчивости  Ig к инфекционным агентам различной этиологии могут служить диагностическим маркером иммунореактивности при определении статуса здоровья животного, что будет иметь большое значение для сохранности поголовья и  своевременному  принятию мер по обеспечению нормального формирования иммунной системы молодняка.

Литература

1. Heriazon A. Phenotypic and genetic parameters of antibody and delayed-type hypersensitivity responses of lactating Holstein cows / Armando Heriazon, Margaret Quinton, Filippo Miglior et al // Veterinary Immunology and Immunopathology- 2013- Vol. 154.-Issues 3–4.-P. 83-92
2. Уровень основных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови коров-первотелок при разных способах содержания и происхождения / М.А.Еремина, И.Ю.Ездакова, Н.А.Попов, В.Л.Лиэпа //Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук.-2013.-№2.-С.46-48.
3. Ездакова И.Ю., Милова Е.Ю., Смирнова В.Г. К вопросу информативности иммунологических показателей // Актуальные проблемы инфекционных болезней молодняка и других возрастных групп сельскохозяйственных животных, рыб и пчел»: Сб. науч. тр. - М:ВИЭВ.-2011.-С.252-253.

References

1. Heriazon A. Phenotypic and genetic parameters of antibody and delayed-type hypersensitivity responses of lactating Holstein cows / Armando Heriazon, Margaret Quinton, Filippo Miglior et al // Veterinary Immunology and Immunopathology- 2013- Vol. 154.-Issues 3–4.-P. 83-92
2. Uroven' osnovnyh klassov immunoglobulinov v syvorotke krovi korov-pervotelok pri raznyh sposobah soderzhanija i proishozhdenija / M.A.Eremina, I.Ju.Ezdakova, N.A.Popov, V.L.Lijepa //Doklady Rossijskoj akademii sel'skohozjajstvennyh nauk.-2013.-№2.-S.46-48.
3. Ezdakova I.Ju., Milova E.Ju., Smirnova V.G. K voprosu informativnosti immunologicheskih pokazatelej // Aktual'nye problemy infekcionnyh boleznej molodnjaka i drugih vozrastnyh grupp sel'skohozjajstvennyh zhivotnyh, ryb i pchel»: Sb. nauch. tr. - M:VIJeV.-2011.-S.252-253.