ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТЕТРАЦИКЛИНОВОМ ГЕПАТИТЕ

Ажунова Т.А.¹, Лемза С.В.²

¹Доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник,

²кандидат биологических наук, старший научный сотрудник,

Институт общей и экспериментальной биологии Сибирское отделение Российской академии наук

ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТЕТРАЦИКЛИНОВОМ ГЕПАТИТЕ

Аннотация

Установлено гепатозащитное действие растительного средства «Фитодетокс» при экспериментальном гепатите. Растительное средство снижает содержание ТБК-активных продуктов в тканях и крови, повышает активность дезинтоксикационной функции печени, стимулирует регенераторные процессы в печени.

Ключевые слова: «Фитодетокс», экспериментальный тетрациклиновый гепатит, перекисное окисление липидов.

Azhunova T.A.¹ Lemsa S.V.²

¹PhD in biological sciences, leading researcher,

 ²PhD in biological sciences, senior researcher,

department of biologically active substancts, Institute of General and Experimental Biology SB RAS

PHARMACOTHERAPEUTIC EFFICACY OF (THE) COMPLEX PLANT REMEDY IN EXPERIMENTAL TETRACYCLIN HEPATITIS

Abstract

Hepatoprotective activity of a plant remedy in experimental hepatitis has been established. The plant remedy “Phytodetox” was shown to decrease the content of TBK-active products in blood and tissues, increase detoxicating function of the liver and stimulate reparative processes in the liver.

Keywords: “Phytodetox”, experimental tetracyclin hepatitis, lipid peroxidation.

В развитии заболеваний печени имеют значение различные факторы, в том числе вирусы, токсические вещества, гормональные и метаболические нарушения, неправильное питание и др. [10]. В настоящее время только вирусным гепатитом С поражено не менее 1 % населения мира, примерно у 75% пациентов развивается хронический гепатит [1; 13].

В этой связи профилактика и лечение заболеваний печени являются одним из актуальных направлений современной медицины. В комплексной терапии поражений печени важную роль играют гепатопротекторы, среди которых группа лекарственных средств растительного происхождения является самой многочисленной [15]. Популярность растительных гепатопротекторов обусловлена их  широким спектром действия, высокой эффективностью, малой токсичностью, доступностью, взаимозаменяемостью и возможностью длительного применения без побочных проявлений. При применении фитопрепаратов действует целый комплекс биологически активных веществ, в котором биологически активные вещества находятся в оптимальных сочетаниях, что обеспечивает их благотворное влияние на все системы и функции организма. Следует также отметить, что фармакотерапевтическая и профилактическая эффективность растительных средств обусловлена не только их воздействием на патологический процесс, но и их регулирующим влиянием на соответствующие функциональные системы с повышением резистентности организма в целом.

Целью исследования явилось определение фармакотерапевтической эффективности комплексного растительного средства «Фитодетокс» при повреждении печени тетрациклином и выявление возможных механизмов его действия.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В состав «Фитодетокса» входят экстракты сухие из 6 видов растительного сырья: плодов шиповника (Rosa sp.), корней шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi), цветков ромашки аптечной (Matricaria chamomilla L.), листьев мяты перечной (Mentha piperita L.), корней солодки уральской (Glycyrriza uralensis Fisch.), травы горца птичьего (Poligonum aviculare L.) (условное название «Фитодетокс»), взятых в соотношениях 3:2:1:2:1:1 массовых частей соответственно. В составе полученного экстракта было установлено наличие следующих биологически активных веществ: флавоноиды, фенолкарбоновые и органические кислоты, дубильные вещества, тритерпеноиды, антоцианы, каротиноиды и полисахариды, а также идентифицированы индивидуальные соединения: кверцетин, рутин, гиперозид, лютеолин, апигенин; кофейная, хлорогеновая, феруловая, олеаноловая, урсоловая, глицирризиновая кислоты, умбеллиферон, скополетин, эскулетин; алантолактон, изоалантолактон, β-каротин и инулин.

Эксперименты выполнены на 45 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160-180 г. Животные находились в стандартных условиях содержания, на обычном для указанного вида животных рационе при свободном доступе к воде и пище. При проведении экспериментов соблюдали требования Всемирного общества защиты животных (WSPA) и Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986).

Тетрациклиновый гепатит вызывали у крыс путем внутрижелудочного введения тетрациклина гидрохлорида в виде суспензии с Tween-80 (1:10) в дозе 1 г/кг массы один раз в сутки ежедневно в течение 7 дней.  Исследования проводили через 7 суток от начала эксперимента [8].

Водный раствор комплексного растительного средства вводили внутрижелудочно в экспериментально-терапевтической дозе 50мг/кг в форме водного раствора, один раз в сутки в течение 7 дней. Контролем  служили крысы, которые получали воду очищенную по аналогичной схеме и в соответствующих объемах.

Антиоксидантные свойства указанного средства оценивали по его влиянию на интенсивность образования продуктов свободнорадикального окисления биомакромолекул (СРО) и эндогенную антиоксидантную систему организма (АОС). Концентрацию ТБК-активных продуктов определяли спектрофотометрически в сыворотке крови по методу [9], диеновых конъюгатов (ДК) - по методу [3]. Для оценки эффективности антиоксидантной системы организма определялась активность каталазы в сыворотке крови животных [5], супероксиддисмутазы (СОД) - в плазме крови [11], содержание восстановленного глутатиона (ВГ) - в сыворотке крови [12]. Микросомальную фракцию печени выделяли по методу Omura, Sato [14]. Продолжительность гексеналового сна оценивали при однократном внутрибрюшинном введении крысам гексенала в дозе 70 мг/кг [4]. О функциональной состоятельности монооксигеназной системы печени судили по данным антипиринового теста [2]. Экскреторно-поглотительную функцию печени оценивали по скорости выведения бромсульфалеина (БСФ) с желчью [7]. Морфофункциональную состоятельность печени животных определяли с использованием ряда гистологических и гистоэнзимологических методов [6]. При патоморфологических исследованиях срезы печени фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина и фиксаторе Буэна. Депарафинированные срезы ткани печени окрашивали гематоксилином и эозином. При гистохимических и гистоэнзимологических исследованиях определяли (выявляли) содержание гликогена, нейтрального жира и активность сукцинатдегидрогеназы в печени.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью пакета программ «Biostat - 2006» с использованием t-критерия Стьюдента. Различия между сравниваемыми группами считались статистически значимыми при р≤0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Как следует из данных, приведенных в таблице 1, испытуемое средство обладает выраженным антиоксидантным действием. Так, концентрация малонового диальдегида (МДА) в гомогенате печени и сыворотке крови снижается соответственно на 38 и 30 %, тогда как активность СОД и каталазы возрастает на 68 и 35 % соответственно по сравнению с контролем.

Таблица 1 – Влияние «Фитодетокса» на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы крыс при повреждении печени тетрациклином

Показатели	Группы животных
	Интактная	Контрольная (тетрациклин+Н2О)	Опытная  (тетрациклин+ «Фитодетокс»)
14 сутки
МДА в гомогенате печени, нмоль/г	0,56± 0,04	2,70± 0,16	1,70± 0,10*
МДА в сыворотке крови, мкмоль/мл/мин	2,52± 1,16	5,40± 0,38	3,81± 0,22*
ДК. ед. оптической плотности	5,11± 0,15	9,80± 0,40	5,72± 0,56*
СОД, МЕ	8,73± 0,77	5,41± 0,44	9,10± 0,80*
Каталаза, мкат/л	2,30± 0,23	0,90± 0,07	1,22± 0,09*
ВГ, мкмоль/л	3,39± 0,14	1,07± 0,16	1,26± 0,09

Примечание: ^* здесь и далее различия между опытной и контрольной группами животных статистически значимы при Р ≤ 0,05

Исследуемый полифитоэкстракт при повреждении печени крыс повышал содержание цитохрома Р-450 в микросомальной фракции печени к 14 суткам развития тетрациклинового гепатита на 46 %, а скорость инактивации указанного гемопротеида снижал на 44 % по сравнению с данными у крыс контрольной группы (табл. 2).

Фитодетокс» восстанавливал нарушенную при тетрациклиновом гепатите у крыс экскреторную функцию печени. Он уменьшал ретенцию бромсульфалеина на 27 %, антипирина – на 32 % по сравнению с данными в контроле, а также сокращал продолжительность гексеналового сна у животных с тетрациклиновым гепатитом на 24 % по сравнению с контролем (табл. 3).

Таблица 2 – Влияние «Фитодетокса» на содержание цитохрома Р-450 в микросомах печени крыс при тетрациклиновом гепатите (14 сутки)

Группы животных	Цитохром Р-450, нмоль/мг белка		Степень инактивации цитохрома Р-450 к 30 мин, %
	14 сутки	21 сутки	14 сутки	21 сутки
Интактная	0,68± 0,03	0,71± 0,05	23,0± 1,1	26,3± 2,0
Контрольная (тетрациклин + Н2О)	0,30± 0,02	0,50± 0,05	65,2± 3,4	54,2± 3,3
Опытная (тетрациклин + «Фитодетокс»)	0,44± 0,04*	0,66± 0,01*	36,8± 2,0*	30,1± 2,3*

Патоморфологическими исследованиями была подтверждена эффективность испытуемого средства при тетрациклиновом повреждении печени у крыс. В частности, при введении «Фитодетокса» отмечалось значительное увеличение количества клеток Купфера, количеств фигур митозов и двуядерных клеток в гепатоцитах. Гистохимический анализ выявил повышенную по сравнению с контролем активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ), а гранулы диформазана имели овальную форму. Ближе к центру долек находили скопление темно-окрашенных гепатоцитов с гиперхромными ядрами, балочное строение долек печени представлялось более упорядоченным, что свидетельствовало о защите структуры и стимуляции регенераторных процессов в печени под влиянием данного растительного средства.

Таблица 3 – Влияние «Фитодетокса» на экскреторно-поглотительную функцию печени крыс при тетрациклиновом гепатите (14 сутки)

Группы животных	Период полувыведения антипирина, %	Период полувыведения БСФ, %	Продолжительность гексеналового сна, мин
Интактная	100	100	21,4± 1,3
Контрольная (тетрациклин+ Н2О)	169	155	33,3± 2,3
Опытная (тетрациклин+ «Фитодетокс»)	115	113	25,4± 2,0*

Таким образом, курсовое введение крысам растительного средства «Фитодетокс» при тетрациклиновом повреждении печени сопровождалось ингибированием процессов свободнорадикального окисления (СРО), нормализацией и повышением активности дезинтоксикационных возможностей поврежденного органа.

Литература

1. Апросина З.Г. Хронические вирусные заболевания печени // Тер. архив. - 1995. - № 5. - С. 77-80.
2. Аширметов Л.Х., Краковский М.Э. Использование антипирина для оценки активности ферментов монооксигеназной системы печени: Обзор литературы // Лаб. дело. - 1990. - № 1. - С. 23-29.
3. Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови // Лаб. дело. - № 3.- С. 33-35.
4. Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. М., 1974. - 144 с.
5. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лаб. дело. - 1988. - №6.- С.16-19.
6. Микроскопическая техника: Руководство для врачей и лаборантов. - М., 1996. - 544 с.
7. Соловьев В.И., Егоренко Г.Г., Фирсов А.А. Использование математической модели фармакокинетики при изучении функции печени у белых крыс методом бромсульфалеиновой пробы // Лаб. дело. - 1976. - № 9. - С. 538-542.
8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. – М., 2005. – 832 с.
9. Темирбулатов Р.А., Селезнев Е.И. Метод повышения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение //Лаб. дело.- 1981. - № 4. - С. 209-211.
10. Ушкалова Е.А. Место эссенциальных фосфолипидов в современной медицине // Фарматека. - 2003. - № 10. - С. 40-46.
11. Чевари С., Чаба И., Секей Й. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах // Лаб. дело. - 1985. - № 11. - С. 678-681.
12. Anderson M.E. Glutation: chemical Biochemical and medical aspects // Pt. A. - 1989. - P. 333-405.
13. Keeffe E.B. Treatment of chronic hepatitis C with pegylated interferon // Medscape Gastroenterol. - 2001. - Vol. 193. - N 2. - P. 265-275.
14. Omura T.Sato R. The carbon monoxide-binding pigment liver microsomes. Solubilisation, purification and properties // J. Biol. Chem. - 1964. - Vol. 239. - P. 2379-2385
15. Pradhan S.C.ish C. Hepatoprotective herbal drug, silimarin from experimental pharmacology to clinical medicine // Ind. J. Med. Res. - 2006. - Vol. 124. - P. 491-504.

References

1. Апросина З.Г. Хронические вирусные заболевания печени // Тер. архив. - 1995. - № 5. - С. 77-80.
2. Аширметов Л.Х., Краковский М.Э. Использование антипирина для оценки активности ферментов монооксигеназной системы печени: Обзор литературы // Лаб. дело. - 1990. - № 1. - С. 23-29.
3. Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови // Лаб. дело. - № 3.- С. 33-35.
4. Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. М., 1974. - 144 с.
5. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лаб. дело. - 1988. - №6.- С.16-19.
6. Микроскопическая техника: Руководство для врачей и лаборантов. - М., 1996. - 544 с.
7. Соловьев В.И., Егоренко Г.Г., Фирсов А.А. Использование математической модели фармакокинетики при изучении функции печени у белых крыс методом бромсульфалеиновой пробы // Лаб. дело. - 1976. - № 9. - С. 538-542.
8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. – М., 2005. – 832 с.
9. Темирбулатов Р.А., Селезнев Е.И. Метод повышения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение //Лаб. дело.- 1981. - № 4. - С. 209-211.
10. Ушкалова Е.А. Место эссенциальных фосфолипидов в современной медицине // Фарматека. - 2003. - № 10. - С. 40-46.
11. Чевари С., Чаба И., Секей Й. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах // Лаб. дело. - 1985. - № 11. - С. 678-681.
12. Anderson M.E. Glutation: chemical Biochemical and medical aspects // Pt. A. - 1989. - P. 333-405.
13. Keeffe E.B. Treatment of chronic hepatitis C with pegylated interferon // Medscape Gastroenterol. - 2001. - Vol. 193. - N 2. - P. 265-275.
14. Omura T.Sato R. The carbon monoxide-binding pigment liver microsomes. Solubilisation, purification and properties // J. Biol. Chem. - 1964. - Vol. 239. - P. 2379-2385.
15. Pradhan S.C.ish C. Hepatoprotective herbal drug, silimarin from experimental pharmacology to clinical medicine // Ind. J. Med. Res. - 2006. - Vol. 124. - P. 491-504.