Принцип. Разведениями вируса с контрольной (контроль) и иммунной (опыт) сыворотками инфицируют чувствительные тест-объекты. Определяют и сравнивают значения инфекционных титров вируса, установленных в контроле (T₀) и в опыте (Т₁). Оценочным показателем реакции является величина индекса нейтрализации вида NI = T₀/Т₁, или lgNI = lgT₀ - lgТ₁.

Обозначения

Формулы и пояснения

h

кратность (шаг) последовательных разведений вирусного материала (h=10)

х

логарифм величины разведения: х=lg d, где d - положительная величина разведения («во сколько раз разведено»)

v

объем инъекции вирусного материала в тест-объект (v=0,2 см³)

- ; +; θ

оценка реакции тест-объекта: «-» - отрицательная; «+» - положительная; «θ» - неспецифическая (тест-объект исключен)

С

доля положительных реакций в группе: C=e/n, где: e - количество положительно реагирующих тест-объектов; n - общее число тест-объектов в группе, на которых испытано данное разведение

Х

логарифм наибольшего разведения вирусного материала, при котором С = 1

lgТ/v

логарифмическая оценка титра 50%-х эмбриональных инфицирующих доз (ЭИД₅₀) вируса в тестируемом объеме:

lgТ/v = Х + lgh×(Σс+0,5),

 где Σс - сумма всех С<1

q²*

дисперсия величины С: q² = [С(1-С)]/(n-1)

s

стандартное отклонение оценки титра: s = √(Σ q²)

Пример. Результаты реакции вируса ИБК штамма «Чапаевский» с контрольной и иммунной сывороткой "ИБК"

Реакция с контрольной сывороткой (контроль)

Оценки

х

Σ

1

2

3

4

Х=5

6

7

- ; +; θ

+ + +

+ + +

+ + +

+ + +

+ + +

+ + +

+ + +

 + + +

Ө + +

 + + +

Ө + +

 + - -

- - -

- - -

C

6/6=1

6/6=1

6/6=1

6/6=1

5/5=1

3/5=0,6

0/6=0

0,600

q²

-

-

-

-

-

0,060

-

0,060

Обработка данных: lgТ₀ = 5+1×(0,6+0,5)=6,100; s₀ = √(0,060) = 0,245

Реакция с иммунной сывороткой (опыт)

Оценки

Логарифмы разведений вирусного материала (lgd = x)

Σ

1

х=2*

3

4

5

6

7

- ; +; θ

Ө + +

+ + +

Ө + +

+ + +

+ + -

- - -

- - -

 - - -

+ - -

 - - -

- - -

 - - -

- - -

- - -

C = e/n

5/5=1

5/5=1

2/6=0,333

0/6=0

1/6=0,167

0/6=0

0/6=0

0,500

q²

-

-

0,044

-

0,028

-

-

0,072

Обработка данных: lgТ₁ = 2+1×(0,5+0,5)=3,000; s₁ = √(0,072) = 0,268

Расчет логарифмической величины индекса нейтрализации

lgNI = lgT₀ - lgT₁ = 6,100 - 3,000=3,100

Расчет стандартного отклонения индекса:

±S=√(s₀² - s₁²) = √(0,245² + 0,268²) = 0,363

Оценка значимости установленной величины индекса на уровне р ≤ 0,05.

Проверка выполнимости неравенства |lgNI|/S) ≥ 2.

|lgIN|/S = 3,100/0,363 = 8,540 > 2

Заключение

Неравенство |lgNI|/S = 8,540 > 2 выполняется, на этом основании величину

 lgNI=(3,1±0,364) считают значимой (р<<0,05).

*Дополнение к алгоритму: значения q² соответственно величинам n и е (для n от 2 до 10)

n

e

1

2

3

4

5

6

7

8

9

2

0,250

3

0,111

0,111

4

0,063

0,083

0,063

5

0,040

0,060

0,060

0,040

6

0,028

0,044

0,050

0,044

0,028

7

0,020

0,034

0,041

0,041

0,034

0,020

8

0,016

0,027

0,033

0,036

0,033

0,027

0,016

9

0,012

0,022

0,028

0,031

0,031

0,028

0,022

0,012

10

0,010

0,018

0,023

0,027

0,028

0,027

0,023

0,018

0,010