РЕЗУЛЬТАТЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ НОВОГО РАЗРАБАТЫВАЕМОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНЫХ ЭКСТРАКТОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ РАССТРОЙСТВ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА ПОРОСЯТ

РЕЗУЛЬТАТЫ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ НОВОГО РАЗРАБАТЫВАЕМОГО ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНЫХ ЭКСТРАКТОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ РАССТРОЙСТВ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА ПОРОСЯТ

Научная статья

Савельева Л.Н.^1, *, Бондарчук М.Л.²., Куделко А.А.³

¹ ORCID: 0000-0002-9196-4731;

² ORCID: 0000-0002-4542-3344;

³ ORCID: 0000-0002-1980-3554;

^{1, 2, 3} Научно-исследовательский институт Ветеринарии Восточной Сибири - филиал Сибирского Федерального Научного Центра Агробиотехнологий, Чита, Россия

¹Забайкальский аграрный институт-филиал ФГБОУ ВО «Иркутский государственный аграрный университет им. А.А. Ежевского, Чита, Россия

* Корреспондирующий автор (luba.saveleva[at]mail.ru)

Аннотация

С целью изучения некоторых иммуномодулирующих свойств нового растительного препарата были проведены доклинические исследования. Проведен анализ гематологических (лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов, гематокрита и др.) и биохимических (процентное соотношение альбуминов, α, β, γ – глобулинов) показателей крови кроликов. По результатам исследований установлено, что новый препарат достоверно увеличивает количество общего белка в сыворотке крови на 15,5 % и гамма глобулинов на 21, 6 %.

Ключевые слова: экстракты, препарат, желудочно-кишечные расстройства, биохимия, гематология.

RESULTS OF PRE-CLINICAL STUDIES OF NEW MEDICAL PREPARATION UNDER DEVELOPMENT ON THE BASIS OF PLANT EXTRACTS FOR PREVENTION AND TREATMENT OF ACUTE DISEASES OF GASTROINTESTINAL TRACT OF PIGLETS

Research article

Savelieva L.N.^1, *, Bondarchuk M.L.², Kudelko A.A.³

¹ ORCID: 0000-0002-9196-4731;

² ORCID: 0000-0002-4542-3344;

³ ORCID: 0000-0002-1980-3554;

^{1, 2, 3} Scientific Research Institute of Veterinary Medicine of Eastern Siberia - Branch of the Siberian Federal Scientific Center for Agrobiotechnologies, Chita, Russia;

¹ Transbaikal Agrarian Institute - Branch of the Irkutsk State Agrarian University named after A.A. Ezhevsky, Chita, Russia

* Corresponding author (luba.saveleva[at]mail.ru)

Abstract

Pre-clinical studies were conducted to consider some immune-modulating properties of a new herbal preparation. The analysis of hematological (leukocytes, erythrocytes, hemoglobin, platelets, hematocrit, etc.) and biochemical (percentage ratio of albumin, α, β, γ - globulins) indicators of blood of rabbits was carried out. According to the results of the research, it was established that new preparation significantly increases the amount of total protein in the blood serum by 15.5% and gamma globulins by 21.6%.

Keywords: extracts, medical preparation, gastrointestinal disorders, biochemistry, hematology.

Актуальность

Несмотря на успехи ветеринарной и фармацевтической науки в лечении массовых гастроэнтеритов новорожденного молодняка с использованием биопрепаратов, комплексных вакцин, гипериммунных сывороток, пробиотиков, бактериальные гастроэнтериты новорожденных животных остаются проблемой требующей безотлагательного решения [7, С.11].

За последние годы отмечается увеличение числа желудочно-кишечных болезней молодняка свиней, обусловленных различными факторами [5, С. 143-144].

Учитывая, что этиологией являются микробы, вирусы, условно-патогенная микрофлора, применяется достаточное количество антибиотиков которые снижают резистентность растущего организма, поэтому актуальным и безопасным является применение фитопрепаратов [6, С. 58].

Цель исследований: провести доклинические исследования нового лечебно-профилактического препарата на основе сухих экстрактов растительного происхождения с иммуномодулирующими свойствами при острых расстройствах желудочно-кишечного тракта поросят. Были определены следующие задачи:

- провести гематологические исследования крови;

- изучить биохимические показатели в сыворотки крови (исследование общего белка и белковых фракций).

Материал и методы

Исследования проводились в НИИВ Восточной Сибири - филиале СФНЦА РАН.

Для изготовления препарата использовали сухие экстракты растительного происхождения: плоды лимонника - schisandra berry, плоды шиповника - surrexit coxis, плоды черемухи - cerasis fructus, цветы ромашки - pyrethri flores (отвар), корневище элеутерококка - rhizome de Siberian ginseng, пребиотик.

Краткая характеристика компонентов препарата:

Плоды лимонника – schisandra berry – с лечебной целью используют плоды и семена лимонника. В них содержатся флавоноиды, катехины, эфирное масло, схизандрин. Также в плодах содержатся витамины и минеральные соли. Экстракт лимонника оказывает тонизирующее действие на организм, повышает иммунитет.

Плоды шиповника – surrexit coxis – известно, что шиповник содержит большое количество аскорбиновой кислоты (или витамина С), витамины В, К, Р, каротин, железо, кальций, соли калия, фосфор, магний, марганец, и т. п.

Содержащийся в шиповнике каротин положительно сказывается на иммунитете организма. Кроме того, ягоды шиповника являются отличным бактерицидным средством.

Плоды черемухи – cerasis fructus – плоды отличаются содержанием аскорбиновой, яблочной и лимонной кислот, рутина, антоциана, флавоноидов, сахаров и эфирного масла. В растении присутствуют дубильные вещества, действие которых помогает снимать воспаление. Зрелые плоды черемухи оказывают закрепляющее действие при диареи, имеют бактерицидные свойства, насыщают организм витаминами, укрепляют иммунную систему [9. С. 2].

Цветы ромашки – pyrethri flores – в идеальных пропорциях в цветах сочетаются бисаболл оксид и эфирное масло, кадинен, фарнезен, кумарин, холин, полисахариды, фитостерин, а также глицерид жирных кислот, ноиловую и изовалериановую кислоту. Этот цветок также имеет антибактериальные свойства благодаря наличию флавонидов в её составе.

Корневище элеутерококка – rhizome de Siberian ginseng – элеутерококк по праву считается одним из самых сильных адаптогенов. Экстракт и другие препараты из данного растения помогают намного быстрее и легче адаптироваться к различным неблагоприятным факторам внешней среды. Элеутерококк показан после хронических заболеваний, а также он прекрасно восстанавливает иммунитет.

Пребиотик – способствуют нормализации кишечной микрофлоры, являются эффективной заменой антибиотикам. Пребиотики назначают для восстановления микрофлоры кишечника, при заболеваниях желудочно-кишечного тракта: запоры, диарея, ферментативная недостаточность; рецидивирующих инфекциях для нормализации иммунного статуса [10, С.7].

В перечне ветеринарных иммуностимулирующих препаратов пребиотики занимают важное место, которые способствуют защитных функций организма животных за счет конкурентного взаимодействия с секундарной микрофлорой кишечника, повышающие продуктивные качества свиней, профилактирующие дисбактериозы [3, С. 60].

Из вышеперечисленного растительного сырья нами были приготовлены экстракты. В качестве экстрагента применяли спирт различной концентрации - от 40 % до 70 процентов [3, С. 165].

Процесс экстрагирования включал следующие этапы:

1. Подготовка растительного сырья; 2. Подготовка экстрагента (водно-спиртовые смеси); 3. Получение первичной вытяжки; 4. Очистка вытяжки от балластных веществ; 5. Выпаривание; 6. Высушивание 7. Фасовка и упаковка. [3, С. 226].

Из полученных растительных экстрактов приготовлен новый экспериментальный лечебно-профилактический препарат. Определена его форма-раствор, действие, которого направлено на повышение иммунологических свойств при острых расстройствах желудочно-кишечного тракта животных.

Для апробации комплексного препарата были сформированы 3 группы по 10 животных в каждой группе в возрасте 2 месяца. Группа №1 – контроль (животным не задавали препараты, выпаивали кипяченую воду), группа № 2 – опытная I животным задавали препарат №1 – ранее разработанный нами аналог, с интервалом 12 ч/сут), группа №3 опытная II (животным выпаивали разработанный препарат № 2 – 2 раза в сутки с интервалом 12 ч по 3,5 мл).

Клинический статус животных находился в пределах физиологической нормы.

Перед началом опыта, и в ходе испытания препарата с интервалом 10 и 21 день, до кормления, был произведен отбор проб крови из краевой ушной вены в вакуумные системы забора крови Vacuette на морфологические исследования с консервантом К₂ЭДТА и биохимические исследования (на показатели: общий белок и процентное содержание белковых фракций) в пробирки с активатором свертывания. Лабораторные исследования проводились на гематологическом анализаторе PCE 90 Vet и биохимическом анализаторе Stat Fax 1904+ в лаборатории лабораторно-аналитических исследований и ГУ Забайкальская краевая ветеринарная лаборатория.

Характеристика определяемых показателей крови:

Иммуноглобулины – это антитела, которые вырабатываются клетками иммунной системы для уничтожения болезнетворных бактерий. Увеличение количества иммуноглобулинов наблюдается при активации иммунитета, то есть при вирусной и бактериальной инфекциях, а также при воспалении и разрушении тканей.

Альбумины и глобулины – это белки, которые имеются во всех клетках. На долю альбуминов приходится более половины белков плазмы крови.

Альбумины – белки относительно небольшой молекулярной массы (15-70 тыс. Это неспецифические переносчики. Они транспортируют гормоны, билирубин, лекарственные вещества, ионы кальция [7. С. 41-42].

Глобулины – белки с большей, чем альбумины молекулярной массой. Некоторые из глобулинов обладают способностью к специфическому связыванию веществ (специфические переносчики).

Содержание глобулинов увеличивается при хронических инфекционных процессах.

Результаты исследований: Морфологические и биохимические исследования крови дают возможность объективно оценить физиологическое состояние организма животных. Результат общего анализа крови показал, что применение комплексных препаратов №1 и №2 оказывает благоприятное влияние на содержание основных показателей крови (лимфоциты, гематокрит, гемоглобин).

Известно, что гемоглобин состоит из белка-глобина (на 98%) и гемма-небелковой части (2%) По нашим данным содержание гемоглобина в крови кроликов, во все дни опыта, в разных группах находился в пределах нормативного диапазона, средний показатель наблюдался при применении препарата №2 и составил 103 г/л.

Так же нами был определен цветовой показатель крови – это соотношение между количеством гемоглобина крови и числом эритроцитов , который позволяет определить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. В наших исследованиях средний показатель ЦП составил 18,4%. Что свидетельствует о нормальном физиологическом значении.

Средний показатель гематокритной величины во всех группах была приближена к нижнему порогу нормального значения от 32, 24% до 35,48% (см. табл.1).

 

Таблица 1 – Гематологические показатели крови кроликов (n=30)

Гематологические показатели	Нормативный диапазон	Группа
		№1	№2	№3
Лейкоциты (WBC,109 г/л)	3-11,5	4,91	3,82	4,76
Лимфоциты (LYM, 109 г/л)	2-9,1	4,30	3,05	3,10
Моноциты, эозинофилы (MID, 109 г/л)	-0,5	0,68	0,07	0,43
Гранулоциты (GRA, 109 г/л)	0-2,8	0,07	0,71	1,43
% Лимфоцитов (LY,%)	55-98	87,7	79,8	65,2
% моноцитов, эозинофилов (MI, %)	0-6	13,8	1,7	4,8
Гранулоцитов (GR, %)	0-40	1,0	18,5	30,0
Эритроциты(RBC, 1012 г/л)	5-9	5,22	5,20	5,54
Гемоглобин (HGB, г/л)	127-163	95	96	103
Гематокрит (HCT, %)	36-50	32,24	33,73	35,48
Средний объем эритроцитов (MCV,fl)	57-70	62	65	64
Среднее содержание гемоглобина в эритроците (MCН,pg)	17,5-23,5	18,2	18,5	18,6
Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах (MCНС г/л)	300-380	295	285	290
Тромбоциты (PLT, 109 г/л)	218-641	320	264	313

 

Белки в организме животного выполняют множество функций: поддерживают постоянство крови, принимают участие в процессах свертывания крови, входят в состав гормонов, ферментов, принимают участие в иммунных процессах. Нами было определено содержание в сыворотке крови общего белка, среднее значение которого составило при применении препарата №1 – 65,6±10,96 и препарата №2 – 75,8±0,01 г/л, а так же процентное отношение белковых фракций: альбумины, альфа, бета и гамма – глобулины. Процент γ –глобулинов - показатель белковых фракций сыворотки крови, особенно определяющий иммунологический статус организма животных (иммуноглобулины), при применении нового препарата показал результаты выше, чем у контрольной группы на 21, 6 %.

Данные отражены на рис.1.

Рис. 1 – Показатели белковых фракций крови кроликов

 

Из диаграммы видно, что среднее содержание γ–глобулинов сыворотки крови кроликов в 1 опытной группе было выше чем, № 2 и № 3 и находятся в пределах физиологических норм.

Таким образом, результаты доклинических исследований нового комплексного фитопрепарата дают сделать вывод, что наибольшим иммуномодулирующим эффектом (на 21,6%) обладает препарат № 2.

Конфликт интересов Не указан.

Conflict of Interest None declared.

Список литературы / References

1. Банный И. П. Фармакологический анализ лекарственного растительного сырья/ И. П. Банный, М.М. Литвиненк и др.// Учебное пособие.- Х.: Золотые страницы, 2003. – 86 с.
2. Буяров В. С. Пробиотики и пребиотики в промышленном свиноводстве и птицеводстве / В. С. Буяров, И. В. Червонова, Н. И. Ярован и др. — Орёл: Изд-во ОрёлГАУ, 2014. — 164 с. — ISBN 978-5-93382-214-1.
3. Милованова Л. Н. Технология изготовления лекарственных форм / Л. Н Милованова – Ростов на Дону: Медицина, 2002 - 448 с.
4. Лыснянский М. В. Лекарственные растения тысячелетия / М. В. Лыснянский // Провизор №19, октябрь 2004, С. 27-37.
5. Савельева Л. Н. Этиологические факторы острых расстройств желудочно-кишечного тракта у свиней на территории Забайкальского/ Л. Н. Савельева, М. Л., Бондарчук, А. А. Куделко // Дальневосточный аграрный вестник - Благовещенск: 2017 - №3(43) С. 142-146.
6. Зирук И. В. Влияние комплекса микроэлементов на основе L- аспарагиновой кислоты на гемато­логические показатели и микрофлору кишечни­ка подсвинков / И. В. Зирук // Ветеринарный врач, №1. 2013 С. 57-59.
7. Утянов A. M. Динамика гематологических показателей и белкового состава сыворотки крови кроликов под влиянием оварио-цитотоксической сыворотки / А. М. Утянов, М. М. Шахматов, Н. А. Заманбеков // Эффектив. методы диагностики и орг. леч.–профилакт. мероприятий при незараз. болезнях. – Алма-Ата, 1990. – С. 45–50.
8. Черёмина Н. А. Лейкоцитарная формула и ее значение для клиник: методические рекомендации / Н. А. Черёмина, К. А. Сидорова, О. А. Драгич. – Тюмень. – 2009. 39 с.
9. Соколова Н. В. Полезные свойства и применение плодов черемухи [Электронный ресурс] /Н. В. Соколова// Травник.-2008. С.1-2.-URL. https://www.ayzdorov.ru/tvtravnik_ceremyha.php (дата обращения: 03.09.2018).
10. Лэйн Д. Краткий словарь ветеринарных терминов [Электронный ресурс] / Д. Лэйн, С .Гудри//.-2007.-С.37.-URL. https://www.labirint.ru/books/588282/ (дата обращения: 22.09.2018).

Список литературы на английском языке / References in English

1. Bannyi I. P. Farmakologicheskii analiz lekarstvennogo rastitelnogo syrya [Pharmacological Analysis of Medicinal Plant Materials] / I. P. Bannyi, M. M. Litvinenk // Study Guide. – X.: Golden Pages, 2003. – 86 p. [in Russian]
2. Buyarov V. S. Probiotiki i prebiotiki v promyshlennom svinovodstve i ptitsevodstve [Probiotics and Prebiotics in Industrial Pig and Poultry Farming] / S. Buyarov, I. V. Chervonova, N. I. Yarovan and others - Orel: Publishing House of OrelSAU, 2014. – 164 p. – ISBN 978-5-93382-214-1. [in Russian]
3. Milovanova L. N. Tehnologiya izgotovleniya lekarstvennykh form [Manufacturing Technology Dosage Forms] / L. N. Milovanova - Rostov-on-Don: Medicine, 2002 - 448 p. [in Russian]
4. Lysnyanskii M. V. Lekarstvennye rasteniya tysyacheletiya [Medicinal Plants of the Millennium] / M. V. Lysnyansky // Provizor [Pharmacist] – No.19, October 2004, pp. 27-37. [in Russian]
5. Savelieva L. N. Etiologicheskie faktory ostrykh rasstroistv zheludochno-kishechnogo trakta u svinei na territorii Zabaikalskogo kraya [Etiological Factors of Acute Gastrointestinal Disorders in Pigs in the Territory of Transbaikal] / L. N. Savelyeva, M. L. Bondarchuk, A. A. Kudelko // Far Eastern Agrarian Bulletin – Blagoveshchensk: 2017 – No.3 (43) pp. 142-146. [in Russian]
6. Ziruk I. V. Vliyanie kompleksa mikroelementov na osnove L-asparaginovoi kisloty na gematologicheskie pokazateli i mikrofloru kishechnika podsvinkov [Effect of Complex Microelements based on L-aspartic Acid on Hematological Indicators and Gut Microflora] / I. V. Ziruk // Vetirenarniy vrach [Veterinarian], No.1. 2013. P. 57-59. [in Russian]
7. Utyanov A. M. Dinamika gematologicheskikh pokazatelei i belkovogo sostava syvorotki krovi krolikov pod vliyaniem ovario-tsitotoksicheskoi syvorotki [Dynamics of Hematological Parameters and Protein Composition of Blood Serum of Rabbits under Influence of Ovario-Cytotoxic Serum] / A. M. Utyanov, M. M. Shakhmatov, N. A. Zamanbekov // metody diagnostiki i org. lech.–profilakt. meropriyatiy pri nezaraz. boleznyakh [Effective Diagnostic Methods and Org. of Treat. and Prev. Measures for Non-infectious Diseases]. – Al \ma-Ata, 1990. – P. 45–50. [in Russian]
8. Cheryomina N. A. Leikotsitarnaya formula i ee znachenie dlia klinik: metodicheskie rekomendatsii [Leukocyte Formula and its Value for Clinics: Guidelines] / N. A. Cheryomina, K. A. Sidorova, O. A. Dragich and others – Tyumen. – 2009. – 39 p. [in Russian]
9. Sokolova N. V. Poleznye svoistva i primenenie plodov cheremukhi [Useful Properties and Use of Bird Cherry] [Electronic resource] / N. V. Sokolova // Travnik. – 2008. P.1-2.-URL. https://www.ayzdorov.ru/tvtravnik_ceremyha.php (accessed: 03.09.2018). [in Russian]
10. Lane D. Kratkii slovar veterinarnykh terminov [Concise Dictionary of Veterinary Terms] [Electronic resource] / D. Lane, S.Goodry // - 2007.- P.37.-URL. https://www.labirint.ru/books/588282/ (accessed: 22.09.2018). [in Russian]