МИКРОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ СБОРА ГРУДНОГО «БРОНХОЛИСАН»

МИКРОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ СБОРА ГРУДНОГО «БРОНХОЛИСАН»

Научная статья

Мартынов А.М.^1, *, Даргаева Т.Д.²

¹ Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования – филиал Российской медицинской академии непрерывного профессионального образования Минздрава России, Иркутск, Россия;

² Всероссийский институт лекарственных и ароматических растений, Москва, Россия

* Корреспондирующий автор (martinov_irk[at]mail.ru)

Аннотация

Проведены микроморфологические исследования сбора грудного «Бронхолисан». В приготовленных по известным методикам микропрепаратах установлены признаки, характерные для компонентов сбора: надземных частей Viola uniflora (L.), Thymus serpyllum (L.) и подземных органов Glycyrrhizae uralensis (Fisch.). Для анализа сбор измельчался и просеивался сквозь сито с отверстиями 0,5 мм, полученный просев перемешивался и использовался в изготовлении микропрепаратов. В полученных препаратах определены диагностически значимые признаки и установлены их количественные соотношения, позволяющие контролировать качество сбора.

Ключевые слова: сбор «Бронхолисан», Viola uniflora (L.), Thymus serpyllum (L.), Glycyrrhiza uralensis (Fisch.), микродиагностические признаки.

MICROMORPHOLOGICAL ELEMENTS OF THE "BRONKHOLISAN" HERBAL MEDICINAL MIXTURE

Research article

Martynov A.M.^1, *, Dargaeva T.D.²

¹ Irkutsk State Medical Academy of Postgraduate Education, the branch of The Russian Medical Academy of Continuous Professional Education of the Ministry of Health of the Russian Federation, Irkutsk, Russia;

² All-Russian Institute of Medicinal and Aromatic Plants, Moscow, Russia

* Corresponding author (martinov_irk[at]mail.ru)

Abstract

The study conducts a micromorphological research of a medicinal herbal tea mixture "Bronkholisan". In the microslides prepared in accordance with commonly applied methods, the study identifies the distinct elements indicative of the components of the medicinal mixture: aboveground parts of Viola uniflora (L.), Thymus serpyllum (L.) and underground organs of Glycyrrhizae uralensis (Fisch.). For the purpose of the analysis, the mixture was ground up and sifted through a sieve with 0.5 mm holes, the resulting material was mixed and used in the preparation of microlides. In the obtained slides, the study identifies the diagnostically significant elements and defines their quantitative ratios that allow controlling the quality of the mixture.

Keywords: collection "Bronkholisan", Viola uniflora (L.), Thymus serpyllum (L.), Glycyrrhiza uralensis (Fisch.), microdiagnostic signs.

Введение

Сборы – лекарственная форма, часто используемая в терапии многих патологий органов дыхания, пищеварения и других систем организма. Они обладают широким спектром действия и пользуются спросом у населения [1], [2]. Заболевания органов дыхания – это довольно часто встречающаяся патология, особенно в условиях резко-континентального климата. Характеризуются они большим разнообразием и представлены, чаще всего, простудными явлениями и ОРЗ. Нередко они являются предшественниками бронхита, пневмонии, плеврита, астмы, приводят к нарушениям работы других органов и систем организма. Для лечения этой группы заболеваний используются антибиотики, сульфаниламиды, ферменты, иммуностимуляторы, витамины и другие лекарственные средства. Важное место в терапии органов дыхания занимают лекарственные растительные объекты, содержащие различные группы биологически активных соединений. Более широким спектром действия обладают сборы, состоящие из нескольких растительных объектов, подобранных с учетом характера и тяжести заболевания. Они могут использоваться как в комплексе с другими лекарственными препаратами, так и после их отмены, а также при хроническом течении болезни [1], [2].

Нами разработан сбор с условным названием «Бронхолисан», составными частями которого являлись Viola uniflora (L.), Thymus serpyllum (L.) и Glycyrrhiza uralensis (Fisch.). Состав сбора подобран с учетом биологически активных соединений и фармакологических свойств растительных объектов. Имея различные точки приложения, компоненты сбора потенцируют терапевтический эффект, что повышает надежность ожидаемого лечебного действия. Количественное соотношение компонентов сбора обосновывали с учетом влияния каждого вида растительного сырья на эффективность терапевтического действия. Оптимальное соотношение компонентов сбора устанавливали экспериментально [3], [10].

Объекты, включенные в состав сбора, как отмечено выше, имеют различные группы природных соединений и достаточно широкий спектр биологического действия. Трава фиалки одноцветковой богата полисахаридами, содержит также флавоноиды (рутин, кверцетин), фенольные кислоты, кумарины, аминокислоты и другие соединения [4]. Препараты фиалки одноцветковой оказывают противовоспалительное и отхаркивающее действие, способствуют отделению мокроты [3], [10]. Фармакологическое действие чабреца травы обусловлено наличием эфирного масла, содержащего фенольные соединения (тимол и карвакрол). Кроме эфирного масла в траве содержатся флавоноиды, олеаноловая и урсоловая кислоты, и другие природные соединения. Этот комплекс БАВ обладает бактерицидным, отхаркивающим и усиливающим секрецию бронхиальных желез свойствами [5], [2]. Солодки корень за счет глицирризиновой кислоты повышает активность реснитчатого эпителия, ее метаболиты обладают кортикостероидоподобным свойством. Комплекс веществ этого растительного объекта оказывает противовоспалительное, противовирусное, бронхолитическое и иммуномодулирующее действие, а также проявляет противомикробную активность. Для солодки корня характерно также наличие флавоноидов (производные ликвиритигенина), пектиновых веществ и других природных соединений [5], [2].

Изготовление сбора проводили в соответствии со статьей «Сборы» [6]. Для этого использовали траву фиалки одноцветковой, заготовленную в период цветения и высушенную в соответствии с «Правилами сбора и сушки лекарственных растений» [7], чабреца трава и солодки корни приобретены в аптечной сети*.

При внедрении новых лекарственных средств, том числе растительных сборов необходимо установить их подлинность и доброкачественность.

Цель настоящей работы - установление микроморфологических диагностических признаков компонентов разработанного грудного сбора «Бронхолисан», составными частями которого являлись фиалки одноцветковой трава – Viola uniflora (L.), чабреца трава – Thymus serpyllum (L.) и солодки уральской корни – Glycyrrhiza uralensis (Fisch.) взятые в весовом соотношении (35:30:35).

Материалы и методы

Объектом исследования служил грудной сбор «Бронхолисан». Микропрепараты из растительных объектов, входящих в состав сбора, готовили по методике приготовления микропрепаратов из измельченного сырья с использованием микроскопа “Биолам Р-11” с окулярами ×7, ×10, ×15 и объективами ×8, ×20 и ×40. Изучение анатомических диагностических признаков растительного сырья проводили в соответствии с требованиями ОФС.1.5.3.0003.15 «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов» [6]. Из аналитической пробы получали препараты по методике приготовления микропрепаратов из цельного, резаного и порошкованного сырья в соответствии с требованиями ОФС «Травы». Микрофотографии выполнены на микроскопе «ЛОМО МИКМЕД – 1» с бинокуляром АУ-12 1,5х (окуляр ×10 и объективы: ×3,7, ×10, ×20, ×40) с помощью цифровой фотокамеры «Canon PowerShot A8». Полученные фотографии обрабатывались с использованием компьютерной программы “GIMP 2.8.14”.5.

Результаты и их обсуждения

Микроскопическим анализом  препаратов сырья фиалки одноцветковой установлено, что эпидермис верхней стороны листа извилистостенный, с нижней стороны – с сильноизвилистыми стенками. Устьица окружены 3-4 клетками эпидермиса (аномоцитный тип), расположены с обеих сторон, наиболее частая встречаемость отмечается на нижнем эпидермисе. Устьичные клетки преимущественно овальной формы. Волоски встречаются двух типов – простые с толстыми стенками и бородавчатой поверхностью, располагаются в большей части по жилкам и по краю листа, головчатые волоски с многоклеточной головкой на широкой многоклеточной ножке обнаруживаются по краю листа на концах зубцов и в углублениях между ними. В местах прикрепления и около устьиц видна слабо-лучисто-морщинистая кутикула. По краям листа и чашелистиков расположены сосочковидные выросты. В мезофилле листа отмечаются многочисленные крупные друзы оксалата кальция. Эпидермис стебля имеет прямые вытянутые прямоугольно-веретенообразные стенки. Устьица окружены 3-4 клетками эпидермиса, аномоцитного типа. Также на эпидермисе находятся простые волоски. Эпидермис лепестков имеет сосочковидные выросты, по краю располагаются бахромчатые тупоконечные волоски. Для паренхимы нижней части лепестков характерны друзы оксалата кальция. Эпидермис чашелистика имеет аналогичное строение, что и листовая пластинка (см. рисунок 1).

     

Рис. 1 – Микродиагностические признаки V. uniflora herba: 1 – клетки эпидермиса с устьицами; 2 – край листа (простые одноклеточные волоски); 3 –простые волоски с бородавчатой поверхностью; 4 – головчатый волосок; 5 – мезофилл листа с друзами; 6 – фрагмент эпидермиса стебля с устьицами (увел. ×240)

При рассмотрении фрагментов листа чабреца с поверхности видны клетки эпидермиса с извилистыми боковыми стенками (верхняя или нижняя сторона листа); на верхнем эпидермисе и по краю листа иногда заметна складчатость кутикулы. Устьица имеются на обеих сторонах листа, на нижней их значительно больше, они сопровождаются двумя околоустьичными клетками, смежные стенки которых расположены перпендикулярно устьичной щели (диацитный тип). Округлые эфиромасличные железки крупные, состоят из 8 выделительных клеток, расположенных радиально, клетки эпидермиса вокруг места прикрепления железки часто образуют розетку. Волоски нескольких типов: очень крупные, многоклеточные, бородавчатые расположены у основания листа («щетинистые» волоски); выше, по краю листа, встречаются более мелкие простые двух-, трехклеточные волоски с бородавчатой поверхностью; головчатые волоски очень мелкие с овальной одноклеточной головкой на короткой одноклеточной ножке встречаются по всей поверхности листа; сосочковидные выросты эпидермиса гладкие или слегка бородавчатые, чаще встречаются на верхней стороне и по краю листа (рисунок 2).

 

    

Рис. 2 – Микродиагностические признаки – Thymi serpylli herba: фрагменты листа (клетки эпидермиса с извилистыми стенками) 1 – диацитный тип устьиц с 2 околоустьичными клетками; 2 – эфиромасличная железка; 3 – волоски простые одноклеточные; 4 – головчатый волосок; 5 – волосок простой многоклеточный с бородавчатой поверхностью (увел. ×240)

 

В препаратах солодки корня видны обрывки пробки, волокна с кристаллоносной обкладкой, состоящей из призматических кристаллов. Характерны обрывки сосудов с сетчатым утолщением и сосудов, состоящих из коротких широких члеников (бочковидной формы) с окаймленными порами, фрагменты паренхимы с крахмальными зернами (рисунок 3) [6].

 

Рис. 3 – Микродиагностические признаки – Glycyrrhizae uralensis radices: 1 – фрагмент пробки; 2 – фрагмент клеток паренхимы с крахмальными зернами; 3 – фрагменты волокон с кристаллоносной обкладкой; 4 – фрагменты сосудов древесины; 5 – фрагмент паренхимы (увел. ×240)

Приведенные данные микроскопического анализа фиалки одноцветковой, чабреца и солодки сложно использовать для характеристики исследуемого сбора, поскольку многие признаки могут быть характерны и для других видов сырья входящих в состав фитокомпозиции. Поэтому важно выделить диагностически значимые признаки, характерные для каждого вида растительного сырья, включенного в состав сбора.

Для определения соотношения компонентов в составе сбора нами использована методика количественной оценки диагностически значимых признаков, предложенная О.Г. Потаниной и И.А. Самылиной [8], [9].

За основу этой методики взяты наиболее характерные диагностические признаки, представленные в растительном сырье в достаточном количестве и могут легко быть идентифицированы при проведении контроля качества разработанной лекарственной формы. Эта методика позволяет определить количественное соотношение компонентов и выявить нарушения в технологии изготовления сборов, в том числе использования нестандартного сырья [6], [8]. Элементы сбора с диагностически значимыми признаками отражены в таблице 1 и на рисунках 1 – 3.

 

Таблица 1 – Основные диагностически значимые признаки порошков компонентов сбора

№ п/п	Violae uniflorae herba	Thymi serpylli herba	Glycyrrhizae radices
	Основные диагностически значимые признаки
1	фрагменты листа (клетки с извилистыми и сильноизвилистыми стенками, устьица аномоцитного типа с 3-4 околоустьичными клетками, волоски простые слабо-бородавчатые толстостенные остро-конусовидные и головчатые волоски с многоклеточной головкой на многоклеточной ножке, в мезофилле листа многочисленные крупные друзы оксалата кальция)	фрагменты листа (клетки с извилистыми стенками, диацитный тип устьиц с 2 околоустьичными клетками, Простые многоклеточные с бородавчатой поверхностью и головчатые волоски, эфирномасличные железки круглые, состоят из 8 выделительных клеток)	фрагменты паренхимы с кристаллами
2.	фрагменты стебля (эпидермис имеет прямые вытянутые прямоугольно-веретеновидные стенки; устьица окружены 3-4 клетками, аномоцитного типа, на эпидермисе находятся простые волоски)	фрагменты стебля (клетки эпидермиса с прямыми стенками, с характерными простыми и головчатыми волосками, эфирномасличными железками и диацитными устьицами с двумя околоустьичными клетками)	фрагменты волокон с призмати-ческими кристаллами
3.	фрагменты простых волосков с толстыми стенками	фрагменты отдельных простых волосков	фрагменты сосудов
4.			фрагменты пробки

 

Для установления диагностически значимых признаков видов растительного сырья, включенных в состав сбора, из образца средней пробы брали аналитическую пробу массой 10 г, измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями 0,5 мм. Затем полученный порошок (около 2 г) помещали в пробирку, закрывающуюся пробкой, интенсивно перемешивали до получения равномерной смеси. На предметное стекло, размеченное на 16 квадратов по величине покровного стекла (24х24 мм), помещали каплю 5% раствора натрия гидроксида и препаровальной иглой вносили порошок сбора, который закрывали покровным стеклом и для просветления препарат нагревали над пламенем спиртовки. После охлаждения отсасывали раствор натрия гидроксида фильтровальной бумагой, добавляя пипеткой с другой стороны 33% раствор глицерина. В дальнейшем препарат рассматривали под микроскопом при соответствующем увеличении и подсчитывали количество диагностически значимых частиц каждого компонента. Подсчет частиц проводили внутри исследуемого квадрата, находящегося на левой и верхней отмеченных сторонах [8], [9]. Результаты рассчитывали на основании среднего из 10 определений.

Индекс участия (Х) 1-го компонента сбора в % рассчитывали по формуле:

 

a – число диагностически значимых признаков 1-го компонента, b – 2-го компонента, c – 3-го компонента.

Доверительные интервалы индексов участия для каждого компонента приведены в таблице 2, индексы находятся в указанных пределах. Доверительные интервалы индексов участия получали на основе статистической обработки данных 10 измерений (см. таблицы 2, 3).

 

Таблица 2 – Результаты количественного определения компонентов сбора

№ опыта	Количество частиц			Сумма частиц	Индекс участия
	Viola uniflora	Thymus serpyllum	Glycyrrhiza uralensis		Viola uniflora	Thymus serpyllum	Glycyrrhiza uralensis
1	6	6	7	19	31,57	31,57	36,84
2	9	8	9	26	34,61	30,77	34,61
3	12	9	10	31	38,71	29,03	32,25
4	9	8	10	27	33,33	29,62	37,03
5	6	6	6	18	33,33	33,33	33,33
6	8	7	7	22	36,36	31,81	31,80
7	10	10	9	29	34,48	34,48	31,03
8	7	7	6	20	35,00	35,00	30,00
9	9	7	9	25	36,00	28,00	36,00
10	12	12	13	37	32,43	32,43	35,13

 

Таблица 3 – Результаты статистической обработки полученных данных количественного определения компонентов сбора

№ п/п	Растительный объект	_Х	Sx	S	P	t (P, f)	Δx	E, %
1	Viola uniflora	34,58	0,65	4,33	95,0	2,24	2,08	0,66
2	Thymus serpyllum	31,61	0,73	5,29	95,0	2,24	2,30	0,72
3	Glycyrrhiza uralensis	33,81	0,78	6,15	95,0	2,24	2,48	0,78

 

Полученные результаты свидетельствуют о том, что ошибка определений не превышает ± 10 %, это позволяют сделать заключение о соответствии сбора указанной прописи.

Заключение

Изучены микроморфологические признаки растительных объектов, входящих в состав разработанного сбора «Бронхолисан». Определены диагностически значимые признаки и установлены их количественные соотношения, позволяющие контролировать качество растительного сбора.

Содержание радионуклидов в исследуемых видах сырья: цезия-137 не превышает 2,36 Бк/кг, стронция-90 не более 0,65 Бк/кг, что отвечает требованиям ОФС.1.5.3.0001.15.

Конфликт интересов Не указан.

Conflict of Interest None declared.

Список литературы/ References

1. Пупыкина К.А. Исследования по разработке и стандартизации лекарственных растительных средств для профилактики и комплексного лечения заболеваний органов пищеварения: автореф. дис... докт. фарм. наук: 15.00.02 / Пупыкина Кира Александровна. – М., – 2008. – 51 с.
2. Чирков А.И. Лекарственные сборы. Монография / А.И. Чирков, В.С. Серый. – М.: Медицина, 1993. – 288 с.
3. Соседова Л.М. Исследование муколитических и противовоспалительных свойств спиртового экстракта и фитосбора / Л.М. Соседова, А.М. Мартынов, Е.А. Капустина, Е.А. Титов // Сибирский медицинский журнал. – 2013. – № 6. – С. 149-152.
4. Мартынов А.М. Полифенольные соединения и аминокислоты надземной части Viola uniflora L. / А.М. Мартынов, А.М. Собенин // Растительные ресурсы. – 2011. – № 2. – С. 118-122.
5. Палов М. Энциклопедия лекарственных растений. / М. Палов. Пер. с немец. – М.: Мир. 1998. – 467 с.
6. Государственная фармакопея РФ – 14-е изд. – М:, 2018. [Электронный ресурс]. – URL: https://clck.ru/SsBx4 (дата обращения 18.10.20).
7. Правила сбора и сушки лекарственных растений / под ред. А.И. Шретера. – М.: Медицина, 1985. – 328 с.
8. Потанина О. Г. Проявляемость диагностически значимых признаков компонентов сбора грудного N 2 / О.Г. Потанина, И.А. Самылина // Фармация. – 2001. – N – С. 29-30.
9. Потанина О. Г. Количественное определение компонентов сборов микроскопическим методом / О.Г. Потанина, И.А. Самылина // Фармация. – 2003. – N – C. 14–16.
10. Martynov A.M. Standardization of phyto-colletion for therapy of the upper respiratory tracts / A.M. Martynov, T.D. Dargaeva // Traditional medicine: Ways of integration with modern Health care. VI International scientific conference. August 15-17, 2013, Ulan-Ude. – P. 42.

Список литературы на английском языке / References in English

1. Pupykina K.A. Issledovaniya po razrabotke i standartizacii lekarstvennyx rastitelnyx sredstv dlya profilaktiki i kompleksnogo lecheniya zabolevanij organov pishhevareniya [Research on the development and standardization of herbal medicines for the prevention and complex treatment of diseases of the digestive system]: avtoref. dis... dokt. farm. nauk: 15.00.02 / Pupykina Kira Aleksandrovna. – M., – 2008. – 51 p. [in Russian]
2. Chirkov A.I. Lekarstvennye sbory. Monografiya [Medicinal fees. Monograph] A.I. Chirkov, V.S. Seryj. – M.: Medicina, 1993. – 288 p. [in Russian]
3. Sosedova L.M. Issledovanie mukoliticheskix i protivovospalitel`ny`x svojstv spirtovogo ekstrakta i fitosbora [Study of mucolytic and anti-inflammatory properties of alcoholic extract and phyto-collection] L.M. Sosedova, A.M. Martynov, E.A. Kapustina, E.A. Titov // Sibirskij medicinskij zhurnal. – 2013. – № 6. – P. 149-152. [in Russian]
4. Martynov A.M. Polifenolnye soedineniya i aminokisloty nadzemnoj chasti Viola uniflora [Polyphenolic compounds and amino acids of the aerial part of Viola uniflora L.] / A.M. Martynov, A.M. Sobenin // Rastitelnye resursy. – 2011. – № 2. – P. 118-122. [in Russian]
5. Palov M. Enciklopediya lekarstvennyx rastenij [Encyclopedia of Medicinal Plants] / M. Palov. – M.: Mir. 1998. – 467 p. [in Russian]
6. Gosudarstvennaja farmakopeja Rossijskoj Federacii XIV edition [State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIV]. – М:, 2018. – [Electronic resource]. – URL: http://femb.ru/femb/pharmacopea.php (accessed: 18.10.2020). [in Russian]
7. Pravila sbora i sushki lekarstvenny`x rastenij / edit. by. A.I. Shretera. [Rules for the collection and drying of medicinal plants] / ed. A.I. Schreter – M.: Medicina, 1985. – 328 p. [in Russian]
8. Potanina O. G. Proyavlyaemost` diagnosticheski znachimy`x priznakov komponentov sbora grudnogo N 2 [Manifestation of diagnostically significant signs of components of collection of breast Н 2] / O.G. Potanina, I.A. Samylina // Farmaciya. – 2001. – N 6. – P. 29-30. [in Russian]
9. Potanina O. G. Kolichestvennoe opredelenie komponentov sborov mikroskopicheskim metodom [Quantification of collection components by microscopic method] / O.G. Potanina, I.A. Samy`lina // Farmaciya. – 2003. – N 6. – P. 14-16. [in Russian]
10. Martynov, A.M. Standardization of phyto-colletion for therapy of the upper respiratory tracts / A.M. Martynov, T.D. Dargaeva // Traditional medicine: Ways of integration with modern Health care. VI International scientific conference. August 15-17, 2013, Ulan-Ude. – P. 42. [in Russian]