INFLUENCE OF 1-HYDROXY-1.1-ETHYLIDE DIPHOSPHONIC ACID ON THE BEHAVIOR OF RAT FEMALES IN “OPEN FIELD” AND “ELIMINATED PLUS MAZE” TESTS

ВЛИЯНИЕ 1-ГИДРОКСИ-1,1-ЭТИЛИДЕНДИФОСФОНОВОЙ КИСЛОТЫ НА ПОВЕДЕНИЕ САМОК КРЫС В ТЕСТАХ «ОТКРЫТОЕ ПОЛЕ» И «ПРИПОДНЯТЫЙ КРЕСТООБРАЗНЫЙ ЛАБИРИНТ»

Научная статья

Черетаев И.В.^1, *, Чуян Е.Н.², Раваева М.Ю.³, Шульгин В.Ф.⁴

¹ ORCID: 0000-0003-1852-4323;

² ORCID: 0000-0001-6240-2732;

³ ORCID: 0000-0001-9629-9726;

⁴ ORCID: 0000-0002-1750-3697;

^{1, 2, 3, 4} Таврическая академия (структурное подразделение) ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского», Симферополь, Россия

* Корреспондирующий автор (5612178[at]ukr.net)

Аннотация

В статье изложены данные изучения влияния 1-гидрокси-1,1-этилидендифосфоновой кислоты в широком диапазоне доз (от 5 до 200 мг/кг) на поведение самок крыс в тестах «открытое поле» и «приподнятый крестообразный лабиринт». Опыты проведены на 60 крысах-самках линии Вистар. Показано, что изучаемая кислота в тесте «открытое поле» в дозе 150 мг/кг угнетает локомоторную активность и поисково-исследовательское поведение испытуемых животных, что указывает на седативный и анксиогенный эффект этой дозы кислоты. Эти эффекты отражались в достоверном снижении относительно контроля общего пройденного расстояния на 49,06 % (р≤0.001, n=10) и исследовательской активности норок на 51,85 % (р≤0.05, n=10). В тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» показан слабый анксиогенный эффект 1-гидрокси-1,1-этилидендифосфоновой кислоты в дозе 150 мг/кг, проявлявшийся лишь в достоверном снижении относительно контроля времени выхода крыс в центр лабиринта на 79,35 % (р≤0.05, n=10).

Ключевые слова: 1-гидрокси-1,1-этилидендифосфоновая кислота, крысы, поведение, тревожность, животные-самки.

INFLUENCE OF 1-HYDROXY-1.1-ETHYLIDE DIPHOSPHONIC ACID ON THE BEHAVIOR OF RAT FEMALES IN “OPEN FIELD” AND “ELIMINATED PLUS MAZE” TESTS

Research article

Cheretaev I.V.^1, *, Chuyan E.N.², Ravaeva M.Yu.³, Shulgin V.F.⁴

¹ ORCID: 0000-0003-1852-4323;

² ORCID: 0000-0001-6240-2732;

³ ORCID: 0000-0001-9629-9726;

⁴ ORCID: 0000-0002-1750-3697;

^{1, 2, 3, 4} Tauride Academy (Structural Unit) of FSAEI of HE V.I. Vernadsky Crimean Federal University, Simferopol, Russia

* Corresponding author (5612178[at]ukr.net)

Abstract

The article presents data on the study of the effect of 1-hydroxy-1.1-ethylidene diphosphonic acid in a wide range of doses (from 5 to 200 mg/kg) on the behavior of female rats in the open field and elevated plus maze tests. The experiments were performed on 60 female Wistar rats. The results show that studied acid in the open field test at a dose of 150 mg/kg inhibits the locomotor activity, search and research behavior of the test animals, which indicates a sedative and anxiogenic effect of this dose of acid. These effects were reflected in a significant decrease relative to the control of the total distance by 49.06% (p≤0.001, n = 10) and the research activity of minks by 51.85% (p≤0.05, n=10). The “elevated plus maze” test showed a weak anxiogenic effect of 1-hydroxy-1.1-ethylidene diphosphonic acid at a dose of 150 mg/kg, which manifested itself only in a significant decrease relative to the control of the exit time of rats to the centre of the labyrinth by 79.35% (p≤0.05, n=10).

Keywords: 1-hydroxy-1.1-ethylidene diphosphonic acid, rats, behavior, anxiety, female animals.

Введение

По данным обзорных исследований [1, С. 168–176], [2, С. 83–88], [3, С. 5–13], тревожные и тревожно-депрессивные аффективные расстройства поведения являются глобальной проблемой всего человечества. Распространены эти расстройства и на территории России и, в частности, Республики Крым, [4, С. 80–81]. В связи с этим, проведение биоскрининга различных химических биологически активных веществ на наличие противотревожной (анксиолитической) активности с использованием поведенческих моделей на животных актуально для прикладной фармакологии и медицины.

На настоящий момент для проведения таких биоскрининговых исследований перспективны бисфосфонаты. Так, 1-гидроксиэтилиден-1,1-дифосфоновая кислота (ГДК) существенно влияет на обмен кальция и аденозинтрифосфата (АТФ) в клетке [5, С. 1255–1262]. Как известно, кальций и АТФ – основные вторичные мессенджеры в клетках нервной ткани [6, С. 1–11], [7, С. 1261-1296], [8, С. 326–336], поэтому колебания их уровня способны значительно повлиять на функционирование ЦНС и обусловленные активностью её нейромедиаторных систем поведенческие реакции и психоэмоциональный статус организма. В отношении ГДК нами ранее было показано, что она в определённых дозах обладает противоболевой активностью, повышая у самцов и самок крыс пороги температурной и механической болевой чувствительности [9, С. 162–175], [10, С. 92–97].

Несмотря на сказанное выше, непосредственные данные о влиянии ГДК на тревожное поведение отсутствуют.

Цель работы – изучить влияние ГДК на поведение самок крыс в тестах «открытое поле» (ОП) и «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ).

Методы и принципы исследования

Перед началом в тесте ОП были выбраны 60 лабораторных самок крыс линии Вистар весом 180-200 г со средним показателями поведения по результатам данного теста, что позволяло достичь однородности поведенческих показателей в исследуемой выборке крыс.

Экспериментальные самки находились в условиях содержания, аналогичных представленным в публикациях [9, С. 162–175], [10, С. 92–97]. Научные исследования были выполнены согласно требованиям ГОСТ Р-53434-2009 и Директивой ЕС 2010/63/EU от 22.09.2010 г. Опыты были проведены на базе ЦКП научным оборудованием «Экспериментальная физиология и биофизика» Таврической академии КФУ им. В. И. Вернадского.

В эксперименте с БТП участвовало 60 самок крыс («ФГУП «Питомник лабораторных животных «Рапполово»), разделенных на 6 групп по 10 самок. Перед проведением эксперимента у самок была достигнута синхронизация фаз эстрального цикла. Самкам контрольной группы делали однократные внутрибрюшиные инъекции 0,2 мл 0,9-%-ного раствора хлорида натрия, они содержались в стандартных условиях (согласно ГОСТ Р-53434-2009), остальные 5 экспериментальных групп получали по 0,2 мл однократных внутрибрюшинных инъекций БТП в одной из исследуемых доз (5, 50, 100, 150 и 200 мг/кг соответственно). Тестирование поведенческих показателей у животных проводили через 1 час после инъекций в тестах ОП и ПКЛ, использующихся согласно [11, С. 264–275] в исследованиях по изучению транквилизирующего (анксиолитического) действия веществ. Постоянство освещения опытных установок контролировали с помощью люксметра Testo 540 (ФРГ), интенсивность освещения составляла 250±15 Лк. Установки тестов изнутри протирали мокрыми и сухими салфетками после каждого животного.

В тесте ОП проводили тестирование общей двигательной и ориентировочно-исследовательской активности крыс в установке IR Actimeter (Pan Lab Harvard Apparatus, Испания) – установке размером 45 х 45 см с прозрачными полипропиленовыми стенками высотой 20 см с двумя инфракрасными рамками, выполняющих роль датчиков движений. Принцип теста заключался в количественном измерении компонентов поведения животного, помещенного в неизвестное открытое пространство и испытывающего с одной стороны страх перед неизвестностью, а с другой – стремление исследовать новую обстановку [11, С. 267–268], [12, С. 12–16], [13, С. 68–77]. Регистрацию и анализ данных теста проводили с помощью программного обеспечения Actitrack 2.0 (Pan Lab Harvard Apparatus, Испания). Видеорегистрацию поведенческих реакций животного осуществляли с помощью цифровой видеосистемы с переносным штативом VS1304–P (НПК Открытая Наука, Россия). Регистрировали такие показатели поведенческой активности крыс, как горизонтальная двигательная активность, которая представляла собой общее пройденное расстояние (в см) внутри поля; вертикальная двигательная активность (ВДА), общее количество актов исследовательской активности (ИА); общее количество актов груминга; количество актов дефекации и уринаций (показатели уровня эмоциональности животного). Продолжительность теста составляла 3 мин, в течение которых регистрировали с помощью актиметра IR Actimeter и видеокамеры VS1304-P поведенческие характеристики.

Тест ПКЛ (НПК Открытая Наука, Россия) представлял собой крестообразную установку, пол и стенки которой сконструированы из жёсткого поливинилхлорида серого цвета. Ширина рукавов 14 см при длине 50 см, высота стенок в закрытых рукавах составляла 30 см, а высота борта открытых рукавов – 1 см. В месте пересечения рукавов располагалась центральная площадка 14 х 14 см. Торцевые стенки на концах закрытых рукавов отсутствовали. Лабиринт располагался на высоте 55 см над уровнем пола на тележке со стопорами, выполненной из крашеного алюминия и стальных труб. Продолжительность теста составляла 3 мин. С помощью видеокамеры VS1304-P регистрировали такие характеристики локомоторного и ориентировочно-исследовательского поведения грызунов: время, проведённое в открытых, закрытых рукавах и центре лабиринта (эти показатели отражают исследовательское и тревожное поведение у грызунов), вертикальную двигательную активность (ВДА), количество заглядываний вниз с краёв открытых рукавов [11, С. 266–267], [14, С. 322–328], [15, C. 129–130].

Данные представлены в виде медианы и межквартильного диапазона (25 и 75 %), их статистический анализ и графическое представление выполнены в программном пакете Graph Pad Prism 7.0. Достоверность различий между группами определяли с помощью однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA) c апостериорным тестом Тьюки и непараметрическим критерием множественных сравнений Данна [11, С. 903-906].

Основные результаты и обсуждение

Результаты проведённого анализа влияния ГДК на поведение самок крыс в тесте ОП представлены на рис. 1.

Показано, что ГДК в тесте ОП в исследуемом широком диапазоне доз от 5 до 200 мг/кг в дозе 150 мг/кг приводила к достоверному снижению общего пройденного расстояния (см. рис. 1, а) на 49,06 % (р≤0.001, n=10), то есть угнеталась локомоторная активность испытуемых животных. Также в данном тесте обнаружено угнетающее действие ГДК у самок крыс в дозе 150 мг/кг (см. рис. 1, б) на ИА (показатель характеризует исследовательское, норковое поведение грызунов [11, С. 267]) на 51,85 % (р≤0.05, n=10) относительно контроля. Эти данные согласно официальному экспериментальному протоколу теста [11, С. 267–268] свидетельствуют о седативном и анксиогенном эффекте данного вещества в указанной дозе. Остальные показатели теста – ВДА, общее количество актов груминга, количество актов дефекации и уринаций ни в одной из исследуемых доз ГДК достоверно не отличались от контроля, на рис. 1 они не показаны.

 

Рис. 1 – Влияние 1-гидрокси-1,1-этилидендифосфоновой кислоты на поведение самок крыс в тесте «открытое поле»:

а – общее пройденное расстояние,

б – исследовательская активность;

Примечание: * – p≤0.05; *** – p≤0.001 – достоверность отличий показателя по сравнению с контролем (значение медианы контроля принято за 100 %)

 

В более аверсивном тесте ПКЛ (см. рис. 2), был показан слабый анксиогенный эффект ГДК только в дозе 150 мг/кг. В данном тесте у самок крыс достоверно снижалось относительно контроля только время выхода в центр лабиринта на 79,35 % (р≤0.05, n=10, см. рис. 2, в), что и свидетельствует согласно [11, С. 266–267], [14, С. 322–328] об увеличении тревожности животных и наличии некоторого анксиогенного эффекта ГДК. При этом остальные основные (время, проведённое в открытых и закрытых рукавах лабиринта) и косвенные показатели (ВДА, количество заглядываний вниз) теста достоверно не изменялись, поэтому можно говорить лишь о слабом анксиогенном эффекте ГДК в дозе 150 мг/кг. Тем не менее, данные тестов ОП и ПКЛ согласуются между собой, указывая на угнетающее действие ГДК именно в дозе 150 мг/кг на двигательную активность и ориентировочно-исследовательское поведение самок крыс.

В целом, данные тестов ОП и ПКЛ согласуются между собой, указывая на угнетающее действие ГДК на поведение самок крыс в дозе 150 мг/кг.

Рис. 2 – Влияние 1-гидрокси-1,1-этилидендифосфоновой кислоты на поведение самок крыс в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт»:

а – время, проведённое в открытых рукавах,

б – время, проведённое в закрытых рукавах,

в – время, проведённое в центре лабиринта,

г – вертикальная двигательная активность,

д – количество заглядываний вниз с краёв открытых рукавов;

Примечание: * – p≤0.05; – достоверность отличий показателя по сравнению с контролем (значение медианы контроля принято за 100 %)

 

Таким образом, седативный и слабый анксиогенный эффект ГДК у самок крыс проявляется только в дозе 150 мг/кг. Можно сказать, что данное соединение является относительно безопасным, и только в высокой дозе может существенно изменять психоэмоциональный статус организма крыс, увеличивая тревожность самок крыс и снижая их локомоторную активность. С учётом коэффициента пересчёта доз (в мг/кг) с животных на человека [11, С. 22], учитывающего соотношение между массой и площадью поверхности тела человека и лабораторных крыс, ГДК можно рекомендовать для дальнейших клинических испытаний и применения у женщин при однократном использовании в дозах ниже 885 мг/кг без риска выраженных побочных эффектов в отношении базового уровня тревожности. Предварительные исследования анальгетического эффекта ГДК позволяют рекомендовать её для однократного применения в ещё более низких дозах [10, С. 92–97].

Заключение

Обнаружено, что ГДК в протестированном диапазоне доз от 5 до 200 мг/кг обладает угнетающим действием на двигательную активность и ориентировочно-исследовательское поведение самок крыс только в дозе 150 мг/кг:

1. В тесте ОП ГДК в дозе 150 мг/кг угнетает локомоторную активность, поисково-исследовательское поведение испытуемых животных, достоверно снижая относительно контроля общее пройденное расстояние на 49,06 % (р≤0.001, n=10) и ИА на 51,85 % (р≤0.05, n=10). Эти результаты указывают на седативный и анксиогенный эффект ГДК в дозе 150 мг/кг.
2. В тесте ПКЛ показан слабый анксиогенный эффект ГДК в дозе 150 мг/кг, проявлявшийся лишь в достоверном снижении относительно контроля времени выхода крыс в центр лабиринта на 79,35 % (р≤0.05, n=10). 

Финансирование Исследование выполнено при финансовой поддержке Российского научного фонда в рамках научного проекта No 18-13-00024.	Funding The study was carried out within the financial support of the Russian Science Foundation as part of the scientific project No. 18-13-00024.
Конфликт интересов Не указан.	Conflict of Interest None declared.

Список литературы / References

1. Kessler R. C. Lifetime prevalence and age-on-set distributions of mental disorders in the World Health Organisation’s World Mental Health Survey Initiative / R. C. Kessler, M. Angermeyer, J. C. Anthony and others // Word Psychyatry. – 2007. – V. 6. – P. 168–176.
2. Федотова А. В. Тревожно-депрессивные расстройства в общеклинической практике / А. В. Федотова // Рациональная фармакотерапия в кардиологии. – 2008. – № 3. – С. 83–88.
3. Марута Н. А. Тревожная депрессия (клинико–психопатологическая и патопсихологическая характеристика) / Н. А. Марута, Т. В. Панько, Г. Ю. Каленская [и др.]. // Таврический журнал психиатрии. – 2014. – Т. 18, № 2 (67). – С. 5–13.
4. Строевский В. В.  Профилактика суицидов у пациентов с аффективными расстройствами в АР Крым / В. В. Строевский // Таврический журнал психиатрии. – 2014. – Т. 18, № 2 (67). – С. 80–81.
5. Lehenkari P. P. Further insight into mechanism of action of clodronate: inhibition of mitochondrial ADP/ATP translocase by a nonhydrolyzable, adenine-containing metabolite / P. P. Lehenkari, M. Kellinsalmi, J. P. Näpänkangas and others. // Mol. Pharm. – 2002. – V. 61, No 5. – P. 1255–1262. doi: 10.1124/mol.61.5.1255
6. Kugelgen I. Pharmacology of mammalian P2X and P2Y-receptors / I. Kugelgen // Biotrend Reviews. – 2008. – № 3. – P. 1–11.
7. Berridge M. G. The Inositol Trisphosphate/Calcium Signaling Pathway in Health and Disease / M. G. Berridge // Physiol. Rev. – 2016. – V. 96, No – Р.1261–1296. doi: 10.1152/physrev.00006.2016
8. Черетаев И. В. АТФ-зависимые и кальциевые механизмы влияния салицилатов на электрические потенциалы нейронов моллюска Helix Albescens // И. В. Черетаев, И. И. Коренюк, Д. Р. Хусаинов и др. // Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. – 2015. – Т. 101, № – С. 326–336.
9. Черетаев И. В. Влияние 1-гидрокси-1,1-этилидендифосфоновой кислоты, бис(2-пиридил-1,2,4-триазолил-3)пропана и их аддукта на болевую чувствительность самцов крыс (часть 1) / И. В. Черетаев, М. Ю. Раваева, Э. Р. Джелдубаева [и др.]. // Учёные записки Крымского федерального университета имени В. И. Вернадского. Биология, химия. – 2019. – Т. 5 (71), № 2. – С. 162–175.
10. Черетаев И. В. Влияние 1-гидрокси-1,1-этилиден-дифосфоновой кислоты и бис(2-пиридил-1,2,4-триазолил-3)пропана на болевую чувствительность самок крыс / И. В. Черетаев, Е. Н. Чуян, М. Ю. Раваева и др. // Международный научно-исследовательский журнал. – 2019. – № 7 (85), Ч. 1. – С. 92–97. doi: https://doi.org/10.23670/IRJ.2019.85.7.018
11. Миронов А. Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / А. Н. Миронов, Н. Д. Бунатян, А. Н. Васильев и др. – Ч. 1. – М. : Гриф и К, 2012. – 944 с.
12. Вдовина Н. В. Исследование особенностей поведения здоровых крыс разного возраста и крыс-опухоленосителей в «открытом поле» / Н. В. Вдовина, Е. С. Клинцова, Т. Г. Щербатюк // Современные технологии в медицине. – 2010. – № 2. – С. 12–16.
13. Митрошина Е. В. Адаптационная роль глиального нейротрофического фактора при ишемии головного мозга / Е. В. Митрошина, Б. Ж. Абогессименгане, М. Д. Уразов и др. // Современные технологии в медицине. – 2017. – Т. 9, № 1. – С. 68–77. doi: 10.17691/stm9.1.08
14. Walf A. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents / A. A. Walf, C. A. Frye // Nature Protocols. – 2007. – V. 2, No 2. – Р. 322–328. doi:10.1038/nprot.2007.44
15. Sestakova N. Determination of motor activity and anxiety-related behaviour in rodents: methodological aspects and role of nitric oxide / N. Sestakova, A. Puzserova, M. Kluknavsky [et al.]. // Interdiscip. Toxicol. – 2013. – V. 6 (3). – P. 126–135. doi: 10.2478/intox-2013-0020

Список литературы на английском языке / References in English

1. Kessler R. C. Lifetime prevalence and age-on-set distributions of mental disorders in the World Health Organisation’s World Mental Health Survey Initiative / R. C. Kessler, M. Angermeyer, J. C. Anthony and others // Word Psychyatry. – 2007. – V. 6. – P. 168–176.
2. Fedotova A. V. Trevozhno-depressivnye rasstrojstva v obshcheklinicheskoj praktike [Anxiety-Depressive Disorders in General Clinical Practice] / A. V. Fedotova // Racional'naya farmakoterapiya v kardiologii [Rational pharmacotherapy in cardiology]. – 2008. – № 3. – P. 83–88. [in Russian]
3. Maruta N. A. Trevozhnaya depressiya (kliniko–psihopatologicheskaya i patopsihologicheskaya harakteristika) [Anxiety depression (clinical – psychopathological and pathopsychological characteristics)] / N. A. Maruta, T. V. Pan'ko, G. Yu. Kalenskaya and others. // Tavricheskij zhurnal psihiatrii [Taurida Journal of Psychiatry]. – 2014. – V. 18, № 2 (67). – P. 5–13. [in Russian]
4. Stroevskij V. V.  Profilaktika suicidov u pacientov s affektivnymi rasstrojstvami v AR Krym [Suicide Prevention in Patients with Affective Disorders in AR Crimea] / V. V. Stroevskij // Tavricheskij zhurnal psihiatrii [Taurida Journal of Psychiatry]. – 2014. – V. 18, № 2 (67). – P. 80–81. [in Russian]
5. Lehenkari P. P. Further insight into mechanism of action of clodronate: inhibition of mitochondrial ADP/ATP translocase by a nonhydrolyzable, adenine-containing metabolite / P. P. Lehenkari, M. Kellinsalmi, J. P. Näpänkangas [et al.]. // Mol. Pharm. – 2002. – V. 61, No 5. – P. 1255–1262. doi: 10.1124/mol.61.5.1255
6. Kugelgen I. Pharmacology of mammalian P2X and P2Y-receptors / I. Kugelgen // Biotrend Reviews. – 2008. – № 3. – P. 1–11.
7. Berridge M. G. The Inositol Trisphosphate/Calcium Signaling Pathway in Health and Disease / M. G. Berridge // Physiol. Rev. – 2016. – V. 96, No 4. – Р. 1261–1296. doi: 10.1152/physrev.00006.2016
8. Cheretaev I. V. ATF-zavisimye i kal'cievye mekhanizmy vliyaniya salicilatov na elektricheskie potencialy nejronov mollyuska Helix Albescens [ATP-dependent and calcium mechanisms of the influence of salicylates on the electrical potentials of mollusk neurons Helix Albescens] // I. V. Cheretaev, I. I. Korenyuk, D. R. Husainov and others // Rossijskij fiziologicheskij zhurnal im. I. M. Sechenova [Russian physiological journal I. M. Sechenova]. – 2015. – V. 101, № 3. – P. 326–336. [in Russian]
9. Cheretaev I. V. Vliyanie 1-gidroksi-1,1-etilidendifosfonovoj kisloty, bis(2-piridil-1,2,4-triazolil-3)propana i ih addukta na bolevuyu chuvstvitel'nost' samcov krys (chast 1) [The effect of 1-hydroxy-1,1-ethylidene diphosphonic acid, bis (2-pyridyl-1,2,4-triazolyl-3) propane and their adduct on the pain sensitivity of male rats (part 1)] / I. V. Cheretaev, M. Yu. Ravaeva, E. R. Dzheldubaeva and others. // Uchenye zapiski Krymskogo federal'nogo universiteta imeni V. I. Vernadskogo. Biologiya, himiya. [Scientific notes of the Crimean Federal University named after V.I. Vernadsky. Biology, Chemistry.]. – 2019. – V. 5 (71), № 2. – P. 162–175.
10. Cheretaev I. V. Vliyanie 1-gidroksi-1,1-etiliden-difosfonovoj kisloty i bis(2-piridil-1,2,4-triazolil-3)propana na bolevuyu chuvstvitel'nost' samok krys [The effect of 1-hydroxy-1,1-ethylidene diphosphonic acid and bis(2-pyridyl-1,2,4- triazolyl-3)propane on pain sensitivity of female rats] / I. V. Cheretaev, E. N. Chuyan, M. Yu. Ravaeva and others // Mezhdunarodnyj nauchno-issledovatel'skij zhurnal [International Research Journal]. – 2019. – № 7 (85), Ch. 1. – P. 92–97. doi: https://doi.org/10.23670/IRJ.2019.85.7.018 [in Russian]
11. Mironov A. N. Rukovodstvo po provedeniju doklinicheskih issledovanij lekarstvennyh sredstv [Guidelines for pre-clinical trials of medicines] / A. N. Mironov, N. D. Bunatjan, A. N. Vasil'ev and others – Ch. 1. – M. : Grif i K, 2012. – 944 p. [In Russian]
12. Vdovina N. V. Study of behavioral patterns of healthy rats of different ages and tumor-bearing rats in an “open field” [The study of the behavior of healthy rats of different ages and rat-tumor carriers in the "open field"] / N. V. Vdovina, E. S. Klintsova, T. G. Shcherbatyuk // Sovremennye tekhnologii v medicine [Modern technologies in medicine]. – 2010. – No. 2. – P. 12–16. [in Russian]
13. Mitroshina E. V. Adaptacionnaya rol' glial'nogo nejrotroficheskogo faktora pri ishemii golovnogo mozga [Adaptive role of glial neurotrophic factor in cerebral ischemia] / E. V. Mitroshina, B. Zh. Abogessimengane, M. D. Urazov and others // Sovremennye tekhnologii v medicine [Modern technologies in medicine]. – 2017. – V. 9, № 1. – P. 68–77. doi: 10.17691/stm2017.9.1.08 [in Russian]
14. Walf A. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents / A. A. Walf, C. A. Frye // Nature Protocols. – 2007. – V. 2, No 2. – Р. 322–328. doi:10.1038/nprot.2007.44
15. Sestakova N. Determination of motor activity and anxiety-related behaviour in rodents: methodological aspects and role of nitric oxide / N. Sestakova, A. Puzserova, M. Kluknavsky and others // Interdiscip. Toxicol. – 2013. – V. 6 (3). – P. 126–135. doi: 10.2478/intox-2013-0020