THE INVESTIGATION OF HEMOSTASIS INDICATORS OF BLOOD IN RATS BY THE INHALATION OF THE DRUG "APINHALIN" IN MODELING THE EDEMA OF LUNGS

Копылова С.В.¹, Старателева Ю.А.²

¹Доцент, кафедра физиологии и биохимии человека и животных, Нижегородский государственный университет – ННГУ, имени Н.И. Лобачевского, ²Ассистент, кафедра биохимии и физиологии растений,

Нижегородский государственный университет – ННГУ, имени Н.И. Лобачевского

ИССЛЕДОВАНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА КРОВИ КРЫС ПРИ ИНГАЛЯЦИОННОМ ВВЕДЕНИИ ПРЕПАРАТА «АПИНГАЛИН» В УСЛОВИЯХ МОДЕЛИРОВАНИЯ ОТЕКА ЛЕГКИХ

Аннотация

Исследовано изменение показателей системы гемостаза крови крыс при ингаляционном введении препарата на основе маточного молочка и прополиса – «Апингалин» на фоне адреналового отека легких.  Установлено, что ингаляционная терапия препаратом  «Апингалин» в условиях отека легких способствовала восстановлению функционального состояния тромбоцитов и улучшению процессов гемокоагуляции крови крыс.

Ключевые слова: отек легких, ингаляция, апингалин, тромбоциты, гемостаз.

Keywords:  edema lungs, inhalation, apinhalin, platelets, hemostasis.

Введение

Нарушения микроциркуляции крови принадлежат к типовым патологическим процессам, лежащим в основе многих заболеваний. Состояние микроциркуляторной системы определяется, прежде всего, ее внутрисосудистым звеном, где немаловажное значение имеют функциональная активность клеток крови и интенсивность процессов гемокоагуляции. Как известно, важную роль в регуляции функционального состояния системы крови, в частности, ее агрегатного состояния, процессов свертывания и фибринолиза, выполняют легкие, в связи с этим, воспалительные реакции развивающиеся в легких, могут приводить к сдвигам в свертывающей системе крови [1]. Так, при нарушении функции легких, в частности, при отеке легких, в крови увеличивается образование клеточных коопераций, в том числе и тромбоцитарно-эритроцитарных агрегатов (ТЭА), что приводит к лизису эритроцитов с выделением ингибиторов фибринолиза, кроме того, ряд факторов системы гемостаза являются реактантами воспаления, в связи с этим, развитие отека легких опасно не только воспалительным процессом в легочной ткани и бронхиолах, но и сопровождается значительными нарушениями в свертывающей системе крови [2]. В свою очередь, это может привести к изменению реологических свойств крови, расстройствам микроциркуляции, возникновению стазов и инициированию процесса тромбообразования. Таким образом, воспалительные повреждения легочной ткани оказывают непосредственное влияние на состояние микрогемодинамики. Более того, не только воспалительный процесс в легких вызывает изменения микрососудистого кровотока, но и, со своей стороны, нарушения микроциркуляции могут отрицательно сказываться на общей динамике тканевой воспалительной реакции и являются одним из механизмов прогрессирования патологического процесса. В связи с этим, возникает необходимость поиска способов коррекции состояния микроциркуляции на ранних этапах лечения, при этом, как мы полагаем, одним из критериев оценки степени выраженности нарушений микроциркуляторного звена могут быть изменения показателей функциональной активности тромбоцитов и системы гемостаза крови при патологических процессах в легких.

Ранее проведенными исследованиями было показано, что при профилактике и терапии бронхолегочных заболеваний могут успешно применяться продукты пчеловодства, оказывающие широкий спектр биологического действия на организм. При этом, наиболее целесообразным в подобных случаях является комплексное использование пчелиного прополиса с маточным молочком [3].

В связи с вышеизложенным, целью данной работы явилось исследование показателей системы гемостаза крови крыс при ингаляционном введении препарата на основе маточного молочка и прополиса – «Апингалин» на фоне адреналового отека легких.

Материалы и методы исследования

                Исследование проводилось на  60 белых лабораторных крысах, весом 150-200 грамм. Животные были разделены на 3 группы: первая - интактная группа; вторая группа - животные, которым моделировали адреналовый отек легких (0,5 мг/кг); третья группа  - животные, которым наносился адреналовый отек легких, а затем проводилась курсовая ингаляция средства «Апингалин» в  течение 10 дней по 10 минут.

Для ингаляций использовали разработанный в ННГУ препарат «Апингалин», представляющий собой водно-спиртовую суспензию пчелиного маточного молочка и прополиса (патент «Средство для ингаляции, обладающее бронхорасширяющим действием» с приоритетом от 15.09.2000; №2174002). В работе использовались стандартные лабораторные методы анализа. Статистическая обработка результатов осуществлялась с помощью компьютерной программы BIOSTAT с использованием t-критерия Стьюдента (с поправкой Бонферрони).

Результаты и их обсуждение

В ходе проведенного исследования, было установлено, что в контрольной группе крыс через 10 дней после моделирования отека легких наблюдается повышение количества тромбоцитов на 35,6% относительно интактных животных (р<0,05). При этом адгезивная активность тромбоцитов увеличилась на 51%, а время образования тромбоцитарных агрегатов уменьшилось на 21% по отношению к интактной группе.

Проведенный анализ коагулограммы показал, что в контрольной группе крыс через 10 дней после моделирования отека легких наблюдается уменьшение времени начала (Т₁), окончания (Т₂) и продолжительности свертывания крови (Т) на    18%, 19% и 35%  соответственно относительно интактных животных (р<0,05). Время начала ретракции и фибринолиза (Т₃) достоверно увеличилось на 9%, время существования плотного кровяного сгустка (Т₄) – на 57% по сравнению  с интактной группой.

Таким образом, развитие адреналового отека легких вызывает увеличение количества тромбоцитов и усиление их функциональной активности у крыс контрольной группы. Наряду с этим, наблюдается гиперкоагуляция и снижение фибринолитической активности крови, на что указывают данные коагулограммы. Вероятно, подобные изменения в системе крови вызваны активацией симпато-адреналовой системы, и, как следствие, повышенным  содержанием в кровеносном русле катехоламинов. Как известно, тромбоциты на своей поверхности несут адренорецепторы, соответственно, увеличение уровня катехоламинов в крови, в том числе адреналина, может вызвать активацию клеток [4]. По всей видимости, указанные изменения явились одной из причин гиперкоагуляции крови. Кроме того, в ответ на действие агонистов тромбоциты могут высвобождать из внутриклеточных органелл вещества, подавляющие фибринолиз (в частности, ингибитор активатора плазминогена) [5]. Следует отметить, что при отеке легких усиливаются процессы ПОЛ. В связи с этим, можно предположить, что повышенная функциональная активность тромбоцитов и нарушения в системе гемостаза могут быть вызваны активацией процессов свободно-радикального окисления, которые, как известно, оказывают негативное влияние на мембраны клеток.

Ингаляционная терапия препаратом «Апингалин» не оказывала существенного влияния на общее количество тромбоцитов в крови крыс. В то же время «Апингалин» способствовал снижению адгезивности тромбоцитов на 48% по сравнению с контрольной группой (р<0,05) и восстановлению данного показателя до уровня здоровых животных.  Наряду с этим после  десятидневной ингаляции крыс препаратом наблюдалось увеличение времени образования тромбоцитарных агрегатов на 30,3% относительно контрольной группы (р<0,05).

Исследование коагулограммы после курсовой ингаляции крыс с отеком легких препаратом «Апингалин» выявило увеличение времени начала (Т₁), окончания (Т₂) и продолжительности свертывания крови (Т) на 31%, 46,7% и 63% соответственно относительно контрольной группы. При этом было отмечено уменьшение времени начала ретракции и фибринолиза (Т₃) на   13,5%, времени существования плотного сгустка (Т₄) - на 32%  по сравнению с животными, которым не проводилась ингаляция (р<0,05). Данные сопоставимы с таковыми интактной группы.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что ингаляционноя терапия крыс «Апингалином» способствовала улучшению исследуемых функциональных характеристик тромбоцитов - снижению степени адгезии и агрегационных свойств клеток. По-видимому, это обусловлено антиагрегантными свойствами прополиса, входящего в состав препарата. В частности, установлено, что биофлавоноиды подавляют повышенную агрегацию клеток крови, в том числе тромбоцитов, препятствуя образованию тромбов. Из литературных данных известно, что феруловая кислота оказывает ингибирующее действие на метаболизм простагландинов и активность тромбоксансинтетаз (А2 и В2), подавляя каскад арахидоновой кислоты на первоначальном этапе [6]. Исходя из этого, можно предположить, что феруловая кислота влияет на время свертывания крови, увеличивая его. Тем самым, пчелиный прополис способствует нормализации процессов гемокоагуляции. Кроме того, по всей видимости, после ингаляции препаратом произошло снижение интенсивности процессов свободно-радикального окисления в крови крыс, что связано с мощным антиоксидантным действием биофлавоноидов. Вероятно, это способствовало стабилизации мембран клеток, и, как следствие, нормализации  свойств тромбоцитов и системы свертывания крови.

Заключение

Полученные результаты позволяют заключить, что у крыс в условиях моделированного отека легких наблюдается повышенная функциональная активность тромбоцитов, которая сопровождается выраженной гиперкоагуляцией (уменьшением времени начала, окончания и продолжительности свертывания крови) и снижением фибринолитической активности крови (увеличением времени начала ретракции и фибринолиза и времени существования плотного кровяного сгустка). В то время как курсовая ингаляция крыс препаратом на основе прополиса и маточного молочка восстанавливает функциональное состояние тромбоцитов, подавляя повышенную адгезию и агрегацию клеток. Наряду с этим, «Апингалин» улучшает процессы гемокоагуляции, на что указывают данные коагулограммы: удлинение времени начала, окончания, продолжительности свертывания крови и усиление ретракции и фибринолиза, что в целом свидетельствует о  снижении риска возникновения тромбов и улучшении микроциркуляции крови.

Литература

1. Якушева Э.В., Полунина О.С., Воронина Л.П. и др. Гемокоагуляционные сдвиги при хронической обструктивной болезни легких // Российская Академия Естествознания. - 2008. - №5. - С. 12-14.
2. Кузник Б.И., Долина А.Б., Вишнякова Т.М. Лейкоцитарно-эритроцитарно-тромбоцитарные взаимодействия у детей, страдающих инфекционным эндокардитом // Тромбоз, гемостаз и реология. - 2008. - №3. - С. 31-38.
3. Крылов В.Н., Агафонов А.В., Кривцов Н.И., Лебедев В.И. и др. Теория и средства апитерапии. - М.: Комильфо, 2007. - 296 с.
4. Дуджак Г.В., Коркушко Г.В., Коркушко О.В. Возрастные особенности изменения реологических свойств крови при введении адреналина // Проблемы старения и долголетия. - 2009. - №4. - С.373-380.
5. Шахматов И.И., Вдовин В.М., Киселев В.И. Состояние системы гемостаза при различных видах гипоксического воздействия // Бюллетень СО РАМН. - 2010. – Т. 30, №2. - С.131-138.
6. Назарова Л.Е., Дьякова И.Н., Абисалова И.Л. Влияние феруловой кислоты на свертываемость крови крыс в опытах in vitro // Психофармакология и биологическая наркология: материалы III съезда фармакологов России. – 2007. - Т. 7, №4. - Режим доступа: http://www.psychopharmacology.ru/index.php/PPBN/article/view/774.