ANALYSIS OF THE GROWTH OF BACTERIA GENERA AEROMONAS AND PSEUDOMONAS ON SUBSTRATES WITH DIFFERENT NITROGEN SUPPLY

Горшков И. Г. ¹, Гринева Т.А. ², Воротников А.П. ³, Куклина Н.Г. ⁴, Викторов Д. А. ⁵, Васильев Д.А.⁶

¹научный сотрудник, ²соискатель, ³студент, ⁴научный сотрудник, ⁵к.б.н., старший научный сотрудник, ⁶д.б.н., профессор

ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», г. Ульяновск

ИССЛЕДОВАНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ АЗОТНОГО ПИТАНИЯ БАКТЕРИЙ РОДОВ AEROMONAS И PSEUDOMONAS.

Аннотация

Анализ роста бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas на субстратах с различным азотным питанием.

Ключевые слова: Aeromonas, Pseudomonas, азотное питание, микробиология, биотехнология, питательные среды, дифференциация, биологические свойства.

Keywords: Aeromonas, Pseudomonas, nitrogen nutrition, microbiology, biotechnology, сulture media, differentiation, biological properties.

Бактерии родов Aeromonas и Pseudomonas являются возбудителями заболеваний рыб и причиной порчи продуктов питания [1], а также представителями естественной микрофлоры пресных и морских вод, почвы. Бактерии обоих родов часто сопутствуют друг друга в источниках выделения [2], что, наряду со схожими биохимическим свойствами и ферментативной активностью, создаёт объективные сложности при их дифференциации [3]. В связи с этим, в настоящие время остаётся актуальной проблема идентификации аэромонад и псевдомонад, их родовая дифференциация, а так же лабораторное селективное культивирование.

Цель исследования.

Выявление особенностей азотного питания бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas, а также подбор оптимального источника азота в питательных средах для названных групп микроорганизмов.

Объект, материалы и методы исследований.

Объектами исследования явились референс-штаммы бактерий Pseudomonas aeruginosa 128, Pseudomonas fluorescens ATCC 13525, Pseudomonas putida ATCC 12633, Pseudomonas chlororaphis B-1246, Aeromonas hydrophila 43, полученные из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Ульяновской ГСХА им. П.А. Столыпина, а также полевые штаммы бактерий Aeromonas sobria Asob26-УГСХА и Aeromonas salmonicida Asal17-УГСХА выделенные нами из объектов окружающей среды.

Для проведения исследования была разработана линейка плотных селективных питательных сред следующего состава:

Вода дистиллированная – 1000 мл., сульфат магния – 0,2 г, дигидрофосфат калия – 1,0 г, хлорид натрия – 5,0 г, галактоза – 10,0 г, агар-агар – 15 г. Источники азота добавлялись в среду до стерилизации в количестве: пептон ферментированный – 10 г, нитрат калия – 1 г, сульфат аммония – 1 г, нитрат аммония – 1 г.

Готовую питательную среду стерилизовали автоклавированием при 0,5 атм. в течение 15 минут. После стерилизации к среде в асептических условиях добавляется 20 мл 10% водного раствора трифинилтетразолия хлорида, стерилизованного фильтрованием через бактериальные фильтры. Для подсушки и контроля стерильности чашки Петри со средой помещали в термостат на 24 ч при 37 ^оС.

Галактоза в данной среде служит источником углеродного питания бактерий, сульфат магния и гидрофосфат калия – для биохимических процессов в клетках бактерий, трифенилтетразолия хлорид – в качестве хромогенного субстрата.

Для исследования чашки с готовой селективной средой были засеяны штаммами Pseudomonas aeruginosa 128, Pseudomonas fluorescens ATCC 13525, Pseudomonas putida ATCC 12633, Pseudomonas chlororaphis B-1246, Aeromonas hydrophila 43, Aeromonas sobria Asob26-УГСХА, Aeromonas salmonicida Asal17-УГСХА и помещены в термостат при 28 ^оС. Чашки засеянные Aeromonas hydrophila 43 и Pseudomonas aeruginosa 128 были помещены в термостат при 37 ^оС (оптимальные температуры культивирования для названных видов бактерий).

Учет результатов проводился через 48 часов культивирования на чашках с ферментированным пептоном, и через 72 часа на чашках с минеральными солями.

Результаты исследования.

Таблица 1 – Характер роста исследуемых бактериальных штаммов на средах с различными источниками азотного питания.

Источник азота	Исследуемые бактериальные штаммы
	Pseudomonas aeruginosa 128	Aeromonas hydrophila 43	Pseudomonas fluorescens ATCC 13525	Pseudomonas putida ATCC 12633	Pseudomonas chlororaphis B-1246	Aeromonas sobria Asob26-УГСХА	Aeromonas salmonicida Asal17-УГСХА
Пептон ферменти-рованный	Колонии крупные красные	Колонии крупные красные	Колонии крупные красные	Колонии крупные красные	Колонии крупные красные	Колонии крупные красные	Колонии крупные красные
Нитрат калия	Колонии мелкие розовые переходящие в красные	Роста нет	Колонии мелкие белые	Колонии мелкие красные	Колонии мелкие белые	Роста нет	Роста нет
Сульфат аммония	Роста нет	Роста нет	Колонии мелкие белые	Колонии мелкие белые	Роста нет	Роста нет	Роста нет
Нитрат аммония	Колонии мелкие с желтоватым оттенком	Колонии мелкие белые	Колонии мелкие с желтоватым оттенком	Колонии мелкие с желтоватым оттенком	Колонии мелкие с желтоватым оттенком	Роста нет	Роста нет

Выводы.

1. Для бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas оптимальным источником азота является пептон ферментированный.
2. Бактерии рода Pseudomonas, в отличие от аэромонад, способны к использованию нитратов в качестве источника азота.
3. На питательной среде с нитратами в качестве единственного источника азота наблюдаются различия в характере роста исследуемых видов псевдомонад по цвету и размеру колоний.
4. Ионы аммония в качестве источника азотного питания не используются исследуемыми штаммами бактерий рода Aeromonas, а также Pseudomonas aeruginosa и Pseudomonas chlororaphis, слабо усваиваются бактериями Pseudomonas fluorescens и Pseudomonas putida.

Литература

1. Сидоров М.А., Скородумов Д.И.. Федотов В.Ф. // Определитель зоопатогенных микроорганизмов, справочник – М., 1995 – С. 227.
2. Методические указания по санитарно- бактериологической оценке рыбохозяйственных водоемов. Указание министерство Здравоохранения РФ. 27 сентября 1999г. № 13-4-2/1742.
3. BERGEY’S MANUAL OF Systematic Bacteriology Second Edition. USA 2007.