ПРОЯВЛЕНИЕ ПОЛОВОГО ДИМОРФИЗМА В АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНОГО ВАРИАНТА M235T ГЕНА AGT С РИСКОМ РАЗВИТИЯ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ В ПОПУЛЯЦИИ ЦЕНТРАЛЬНО - ЧЕРНОЗЕМНОГО РЕГИОНА РОССИИ

Стецкая Т.А.1, Бушуева О.Ю.², Булгакова И.В.³, Полоников А.В.⁴, Иванов В.П.⁵.Корогодина Т.В.⁶

¹Соискатель кафедры биологии, медицинской генетики и экологии, ²Кандидат медицинских наук, доцент; 3Соискатель кафедры биологии, медицинской генетики и экологии; 4Доктор медицинских наук, профессор; 5Доктор медицинских наук, профессор; 6Студент.  Курский государственный медицинский университет

ПРОЯВЛЕНИЕ ПОЛОВОГО ДИМОРФИЗМА В АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНОГО ВАРИАНТА M235T ГЕНА AGT С РИСКОМ РАЗВИТИЯ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ В ПОПУЛЯЦИИ ЦЕНТРАЛЬНО - ЧЕРНОЗЕМНОГО РЕГИОНА РОССИИ

Аннотация

Целью данного  исследования было выявление  связи между полиморфизмом M235T ангиотензиногена (AGT)  и повышенным риском развития  артериальной гипертензии среди населения Центрального Черноземного региона России. В исследование было включено 1696 субъектов: 1115 пациентов с артериальной гипертонией и 581 – нормотензивный контроль. Генотипирование  полиморфизма M235T AGT проводили с помощью ПЦР в «реальном времени».

Ключевые слова:  Met 235 Thr  полиморфизм гена  (AGT), артериальная гипертония, сердечно-сосудистые заболевания.

Stetskaya T.A.¹, Bushueva O.Y.², Bulgakova I.V.³, Polonikov A.V.⁴, Ivanov V.P.⁵, Korogodina T.V.⁵

1Seeker at the department of biology, medical genetics and ecology; 2PhD of medical sciences, associate professor; 3Seeker at the department of biology, medical genetics and ecology; 4Doctor of Medicine, professor; 5Doctor of Medicine, professor; 6Student. Kursk State Medical University

GENDER – RELATED ASSOCIATION OF M235T POLYMORPHISM OF AGT GENE WITH RISK OF ESSENTIAL HYPERTENSION IN POPULATION FROM CENTRAL RUSSIA

Abstract

The aim of the present study was to explore the association between the M235T polymorphism of the angiotensinogen (AGT) gene and  risk of essential hypertension in the  population from Central Russia. The study included 1696 subjects: 1115 hypertensive patients and 581 normotensive controls. Genotyping for the AGT M235T polymorphism was carried out by Real-Time PCR.

Keywords: Met 235 Thr  polymorphism   of angiotenzinogene (AGT)  gene, an arterial hypertension, cardiovascular diseases.

В многоуровневой  системе регуляции артериального давления (АД) ведущая роль отводится ренин-ангиотензиновой системе (РАС). Ангиотензиноген (AGT)-ключевой белок ренин-ангиотензиновой системы, являющийся субстратом для ренина, который превращает его в ангиотензин 1 [5].  Ген AGT  расположен на коротком плече 1-й хромосомы в локусе 1q42. В гене AGT уже известно более 30 различных полиморфных сайтов [3, 4].  AGT экспрессируется преимущественно в печени и находится под контролем глюкокортикоидов, эстрогенов, тиреоидных гормонов и ангиотензина II. В роли генетического маркера  кардиоваскулярных заболеваний чаще всего используются Мet235Тhr полиморфизма AGT: физиологически значимой является мутация в 235-м кодоне, приводящая к замене кодируемой аминокислоты метионин на треонин (полиморфизм М235Т). Наличие одного или двух Т аллелей в 235-й позиции приводит к значимому  повышению ангиотензина II (АТ II), вследствие этого М235Т полиморфизм ассоциирован с артериальной гипертензией (АГ) [1; 6]. В последние  годы значительно увеличилось  количество исследований, посвященных  роли полового диморфизма гена AGT в развитии  сердечно-сосудистых заболеваний. Опубликованные в литературе данные исследований, посвященных изучению вклада данного гена в риск развития сердечно-сосудистой  патологии, носят противоречивый характер.

Цель данного  исследования - изучить распространенность аллеля  M235T гена AGT  у населения Центрального Черноземного региона России и исследовать  проявление полового диморфизма в ассоциации предполагаемого маркера с повышенным риском развития  артериальной гипертензии.

Материалы и методы исследования.  Материалом для исследования послужила популяционная выборка неродственных индивидов, проживающих в Центрально-Черноземном  регионе  России. В исследование включены 1115 больных с артериальной гипертонией, а также  581 практически здоровых индивидов с нормальным артериальным давлением (АД), без клинических проявлений сердечно-сосудистых заболеваний (контрольная группа). По полу и возрасту больные не отличались от контрольной группы (р>0,05).У всех пациентов проводился забор венозной крови. Выделение геномной ДНК осуществляли из размороженной венозной крови стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции. Генотипирование полиморфизма M235T гена AGT проводилось методом ПЦР в режиме реального времени путем дискриминации аллелей с помощью TaqMan-зондов на амплификаторе CFX96 (Bio-Rad) с использованием праймеров и зондов, синтезированных в компании “Синтол” (Москва).

Результаты и обсуждение

Нами был изучен полиморфизм М235Т гена AGT, представляющий интерес в связи с патологическими состояниями, ведущими к нарушению функционирования РАС, играющей ключевую роль в регуляции артериального давления,  водного и электролитного баланса. Распределение частот генотипов полиморфизма M235T гена AGT и их соответствие популяционному равновесию Харди–Вайнберга (РХВ) проводилось раздельно в контрольной группе и в группе больных с АГ. Отклонений от уравнения Харди-Вайнберга в группе больных и контрольной не обнаружено (P>0,05).

Таблица 1. Ассоциации   аллелей  ДНК-маркеров у больных АГ и здоровых

Ген	Полиморфизм и его локализация в гене	Аллели*	Частоты аллелей		Критерий различий, c2 (p)
			Больные АГ (n=1115)	Контрольная группа (n=581)
AGT	M235T (2 экзон)	M	0,492	0,521	2,44(0,12)
		T	0,508	0,479
* Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркеров.

OR=1,12, (95%CI=0,97-1,29)

Из данных таблицы видно, что значимых различий в частотах аллелей выявлено не было.  Учитывая вероятность проявления полового диморфизма, нами был проведен  анализ ассоциации полиморфизма M235T гена AGT раздельно у мужчин и женщин.

Таблица 2. Ассоциации аллелей ДНК-маркеров с АГ у мужчин

Ген	Полиморфизм и его локализация в гене	Аллели*	Частоты аллелей		Критерий различий, c2 (p)
			Больные АГ (n=598)	Контрольная группа (n=349)
AGT	M235T (2 экзон)	M	0,527	0,509	0,001(0,94)
		T	0,473	0,491
* Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркеров.

OR=1,01, (95%CI=0,84-1,21) Из данных таблицы видно, что у мужчин ассоциации исследуемого полиморфного варианта гена с риском развития АГ выявлено не было.  

Таблица 3 - Ассоциации аллелей ДНК-маркеров с АГ у женщин

Ген	Полиморфизм и его локализация в гене	Аллели*	Частоты аллелей		Критерий различий, c2 (p)
			Больные АГ (n=511)	Контрольная группа (n=219)
AGT	M235T (2 экзон)	M	0,473	0,530	4,00(0,05)*
		T	0,527	0,470
* Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркеров.

OR=1,26 (95%CI=1,00-1,57)

По данным таблицы, у женщин отмечалось статистически значимое увеличение частоты мутантного аллеля Т в группе больных АГ: p=0,05, OR=1,26, 95%CI =1,00-1,57.

Таблица 4 - Ассоциации генотипов ДНК-маркеров с АГ

Ген	Полиморфизм и его локализация в гене	генотипы	Распределение генотипов, n (%)				Критерий различий при df=1, c2 (p)
			Больные АГ (n=1115)		Контрольная группа (n=581)
			n	%	n	%
AGT	M235T (2 экзон)	M/M	275	24,7	157	27,0	1,12 (0,29)
		M/T	548	49,1	291	50,1	0,13 (0,71)
		T/T	292	26,2	133	22,9	2,21(0,14)
Группа больных  АГ мужчин (n=953) и контрольная группа (n=581)
AGT	M235T (2 экзон)	M/M	164	27,4	92	26,4	0,13(0,72)
		M/T	280	46,8	172	49,3	0,53(0,46)
		T/T	154	25,8	85	24,4	0,23(0,63)
Группа больных  АГ женщин (n=743) и контрольная группа (n=581)
AGT	M235T (2 экзон)	M/M	109	21,3	60	27,4	3,17(0,07)
		M/T	265	51,9	112	51,1	2,28(0,13)
		T/T	137	26,8	47	21,5	0,16(0,68)
* Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркеров.

Исходя из представленных данных,  сравнительный анализ частот генотипов полиморфизма M235T гена AGT   между больными АГ и контрольной группой не показал статистически значимых различий.

Литературные данные о связи полиморфизма М235Т гена AGT носят противоречивый характер. Например, при изучении 149 человек из английских семей, в которых не  менее двух членов страдали АГ, не выявлена связь полиморфизма М235Т гена AGT с этим заболеванием. При изучении 63 этих же семей с высоким риском АГ и 64 здоровых индивидов наблюдали достоверное сцепление и связь АГ с другим полиморфным вариантом гена AGT (динуклеотидный фланкирующий GT-повтор) [1].

Cравнительный анализ частот генотипов у женщин статистически значимых различий не показал, однако, мы наблюдали относительное увеличение частоты гомозигот по дикому аллелю в контрольной группе по сравнению с больными артериальной гипертензией: различия приближались к достоверным, но не достигали уровня статистически значимых: р=0,07, OR=1,39,  95%CI = 0,97-2,00 (результаты представлены в таблице 4). Полученные в настоящей работе данные по изучению полиморфного варианта M235T гена AGT в популяции Центрально-Черноземного  региона  России подтверждают влияние генов РАС на риск развития гипертонической болезни, а также демонстрируют проявление полового диморфизма в ассоциации генов с мультифакториальными заболеваниями у человека.  Полученные данные могут иметь высокую прогностическую значимость для расчета риска развития гипертонической болезни с учетом генетических и средовых факторов риска.

Литература

1. Jenkins L.D., Powers R.W., Cooper M. Preeclampsia risk and angiotensinogen polymorphisms M235T and AGT 217 in African American and Caucasian women // J. Reprod. Sci. – 2008. – Vol. 15(7). – P. 696–701.
2. Kanat O. Renin-angiotensin system polymorphisms and coronary artery surgery patients / O. Kanat [et al.] // Asian Cardiovasc. Thorac. Ann. – 2005. – № 13. – P. 153–156.
3. Kurland L., Liljedahl U., Karlsson J. et al. Angiotensinogen gene polymorphisms: relationship to blood pressure response to antihypertensive treatment. Results from the Swedish Irbesartan Left Ventricular Hypertrophy Investigation vs Atenolol (SILVHIA) trial // Am J Hypertens.—2004. –Vol. 1.—P. 8–13.
4. Liljedahl U., Karlsson J., Melhus H. et al. A microarray minisequencing system for pharmacogenetic profiling of antihypertensive drug response // Pharmacogenetics.—2003.—Vol. 13, № 1.—P. 7–17.