ВЛИЯНИЕ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА НА МОРФОГЕНЕТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ЭКСПЛАНОТОВ DIOSCOREA NIPPONICA MAKINO И ОБРАЗОВАНИЕ ПОЛИФЕНОЛОВ

ВЛИЯНИЕ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА НА МОРФОГЕНЕТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ЭКСПЛАНОТОВ DIOSCOREA NIPPONICA MAKINO И ОБРАЗОВАНИЕ ПОЛИФЕНОЛОВ

Научная статья

Калашникова Е.А.¹, Зайцева С.М.^2, *, Доан Тху Тхуи³, Киракосян Р.Н.⁴

^{1, 2, 4} Российский Государственный аграрный университет МСХА имени К.А. Тимирязева, Москва, Россия;

²Московская Государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии МВА имени К.И. Скрябина, Москва, Россия;

³Вьетнамский национальный аграрный университет, Ханой, Республика Вьетнам

* Корреспондирующий авто (Smzaytseva[at]yandex.ru)

Аннотация

Изучали влияние регуляторов роста на морфогенетическую активность различных эксплантов лекарственных растениях рода Диоскореи, а также образование растворимых фенольных соединений. Наилучшие результаты были показаны на питательной среде с ИУК (концентрация 5 мг/л).  Интактные растения Dioscorea nipponica Makino и индуцированные на их основе микроклоны обладают высокой способностью к биосинтезу разнообразных фенольных соединений. Органоспецифичность к накоплению полифенолов, характерная для интактного растения, сохраняется и в условиях in vitro, но в менее выраженной степени.

Ключевые слова: фенольные соединения, Dioscorea nipponica Makino, микроклоны. Фитогормоны.

INFLUENCE OF GROWTH REGULATORS ON THE MORPHOGENETIC ACTIVITY OF EXPLANTS DIOSCOREA NIPPONICA MAKINO AND THE FORMATION OF POLYPHENOLS

Research article

Kalashnikova E.A.¹, Zaytseva S.M.²^, *, Doan Thu Thui³, Kirakosyan R.N.⁴

¹^{, 2, 4} Moscow Agricultural Academy named after K.A. Timiryazev, Moscow, Russia;

² Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology MVA named after K.I. Scriabin, Moscow, Russia;

³ Vietnam National Agrarian University

* Corresponding author (Smzaytseva[at]yandex.ru)

Abstract

We studied the effect of growth regulators on the morphogenetic activity of various explants of medicinal plants of the Dioscorea genus, as well as the formation of soluble phenolic compounds. The best results were shown on the nutrient medium with IAA (concentration of 5 mg/l). The intact plants Dioscorea nipponica Makino and the micro-clones induced on their basis are highly biosynthetic in a variety of phenolic compounds. Organ specificity for the accumulation of polyphenols characteristic of an intact plant is preserved in vitro but to a lesser extent.

Keywords: phenolic compounds, Dioscorea nipponica Makino, microclones, phytohormones

Растения рода Dioscorеa являются ценным источником биологически активных веществ для фармацевтической промышленности. Препараты, изготовленные на основе растительных экстрактов диоскореи проявляют множественное терапевтическое действие, которое обусловлено их способностью к образованию богатого спектра вторичных метаболитов, особенно полифенолов [1]. Диоскорея обладает противоопухолевым, иммуномодулирующим и дерматотоническим действием, снижает содержание холестерина в крови, расширяет периферические сосуды, углубляет дыхание, улучшает проведение импульсов к сердцу по блуждающему нерву [2].

Широкое применение полифенолов в фармакологии основано на их способности к окислению с образованием хинных форм, что обуславливает их гепатопротекторные, нейрорегуляторные, капиляроукрепляющие, желчегонные и противоопухолевые свойства [3]. Однако данных об образовании фенольных соединений в растениях рода Dioscorea немного, а сложность физиолого-биохимических процессов, происходящих в растительных организмах, в том числе и в условиях in virto, остается еще недостаточно изученной.

Одним из перспективных и экономически оправданным методом быстрого размножения растений является клональное микроразмножение.  Метод позволяет сохранять ценные виды растений, которые находятся на грани исчезновения или занесены в Красную книгу России. На основе технологий культивирования изолированных клеток, тканей и органов растений in vitro создают генетические банки растительных объектов, которые могут представлять интерес для селекционеров, растениеводов, фитопатологов, фармацевтов и др. Рядом исследователей показано, что коллекция клеток может состоять не только из дифференцированных тканей в виде растений-регенерантов, но и может быть представлена дедифференцированными клетками в виде суспензионных и каллусных культур. Такие коллекции имеют практическое применение для сохранения уникальных генотипов и источников ценных вторичных метаболитов, в частности и веществ фенольной природы [4], [5].

Процессами вторичного метаболизма можно управлять, за счет изменения условий культивирования растительных объектов in vitro, при модификациях гормонального и минерального состава питательной среды, интенсивности и доступности спектрального освещения, температурного режима и др., и тем самым добиваться биосинтеза целевого продукта или его модификаций [6].

Изучение фенольного метаболизма растений в условиях in vitro представляет определенный интерес для физиологов в связи с широким спектром участия этих веществ в таких важных процессах как фотосинтез, дыхание, трансдукция энергии, аллелопатия, защита клеток от патогенов и разных стрессовых факторов [7].

Что касается растений рода Dioscorea, то исследования по изучению фенольного метаболизма в микроклонах, полученных в разных условиях выращивания и дальнейшим сравнении с качественным и количественным составом в интактном растении являются актуальными. Кроме того, исследования данного направления ранее не были проведены с D. nipponica Makino.

Исходя и вышеизложенного целью нашего исследования являлось изучение влияния гормонального состава питательной среды на морфогенетический потенциал различных эксплантов и биосинтез полифенолов.

Методы и материалы

Исследования проводили на изолированных адвентивных почках, сегментах листовых пластинок и стебля, изолированных как с интактных растений Dioscorea nipponica Makino, так и с микроклонов, кроме того использовали семена и многолетние клубни растений in vivo. Источником первичных эксплантов служили растения, произрастающие на территории Главного ботанического сада РАН им. Н.В. Цицина (участок редких и исчезающих растений).

В работе придерживались общепринятых правил работы в лаборатории и методик, разработанных на кафедре биотехнологии РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева [8]. Культивирование первичных эксплантов осуществляли на питательной среде Мурасига и Скуга с заданными модификациями [8], содержащей 6-бензиламинопурин (БАП) 1 мг/л или 2-изопентиладенин (2 iР) 1 мг/л в сочетании с ауксинами различного происхождения: нафталилуксусная кислота ИУК (1-7 мг/л), индолилмаслянная кислота ИМК (1-7 мг/л). Для укоренения микропобегов применяли ½ нормы макросолей по прописи Мурасиге и Скуга, ИУК (1 мг/л), 20 г/л сахарозы, 7 г/л агара.

Первичные экспланты выращивали в условиях световой комнаты, где поддерживалась температура 24⁰С, 16-ти часовой фотопериод, интенсивность освещения 4 000 люк белыми люминсцентными лампами.

Для извлечения фенольных соединений применяли общепринятые методики [9]. Навеску растительного материала измельчали в ступке, а затем подвергали экстракции горячим 96%-ным этанолом. В экстрактах спектрофотометрическим методом определяли полифенолов с построением калибровочных кривых по (-)-эпикатехину и по рутину. В таблицах представлены средние арифметические значения из трех биологических параллельных и их стандартные отклонения. Исследования проводили в 3-х биологических и 3-х аналитических повторностях. На графиках представлены средние арифметические значения с доверительными интервалами на 5%-ом уровне значимости.

Результаты и обсуждения

В настоящее время большое практическое значение приобретает технология по клональному микроразмножению диоскореи ниппонской. Это связано не только с целью сохранения ее исходных форм в природных условиях, но и возможностью их дальнейшего использования в качестве источников биологически активных веществ и лекарственных препаратов [10].

Процесс морфогенеза зависит от ряда взаимосвязанных факторов: гормональной и физиологической природы объекта, а также от типа первичного экспланта. В работе проведен сравнительный анализ морфогенетического потенциала изолированных листовых эксплантов с сегментами стебля.

Было установлено, что возможно осуществлять размножение in vitro диоскореи ниппонской двумя способами: 1) индукция образования адвентивных почек или микроклубней в базальной части побегов или пазухе листа, 2) образование микропобегов из существующих меристем пазушных почек (Рис. 1). Причем данные морфогенетические процессы зависели от гормонального состава питательной среды и типа первичного экспланта (Рис. 1а, б).

 

Рис. 1 – Реализация морфогенентического потенциала: образование адвентивных микроклубней в базальной части побега (А), в пазухе листа (Б) и образование кореней в базальной части микропобега диоскореи ниппонской (В)

 

Выявлено, что морфогенетические процессы имеют отклик на гормональный состав питательной среды (рис. 2). Так, например, присутствие в питательной среде БАП в сочетании с НУК оказывало существенное влияние только на формирование в базальной части микропобегов корней (до 6 шт. на 1 эксплант) и не оказывало значительного эффекта на индукцию образования адвентивных почек по сравнению с питательной средой, в которой присутствовал 2ip. Среднее число полученных адвентивных побегов составило 5,5 и 2,7 шт., соответственно. Что касается таких показателей, как формирование микроклубней, то на этот процесс значительное влияние оказывает 2ip.При таких условиях культивирования микроклубни формировались как в базальной части микропобега, так и в пазухе листа (формировались воздушные микроклубни), а на питательной среде с добавлением БАП микроклубни образовывались только в основании микропобега.

Что касается изолированных листовых эксплантов, то не зависимо от гормонального состава среды наблюдалось образование адвентивных почек (2-3 шт.), непосредственно на экспланте или в новообразованной каллусной ткани. Причем частота органогенеза была не высокой и составляла всего 21 и 15% соответственно. Результаты, полученные нами в данной серии исследований, свидетельствуют о том, что листовые экспланты диоскореи ниппонской не целесообразно использовать в качестве первичного экспланта в технологии клонального микроразмножения.

В дальнейшем полученные микроклоны помещались на питательные среды для укоренения, где в качестве индуктора корнеобразования использовали такие ауксины как ИУК или ИМК в концентрации1-7 мг/л.

 

Рис. 2 – Морфометрические показатели диоскореи ниппонской in vitro в зависимости от состава питательной среды

 

Нами была установлена обратная корреляция между концентрацией гормонов и ростом микропобегов: с увеличением концентрации ауксинов в питательной среде уменьшается рост микрорастений в высоту. (Рис. 3). Данная ответная морфометрическая реакция ярче выражалась на вариантах среды в которой присутствовала ИМК.

 

Рис. 3 - Влияние различных концентраций ИУК и ИМК на формирование надземной части растений диоскореи ниппонской

 

Что касается интенсивности корнеобразования, то исследуемые ауксины оказали неоднозначное влияние на данный процесс (Рис. 4). Для индолилуксусной кислоты была установлена прямая корреляция: с увеличением концентрации гормона активизировался рост корней. Максимальная длина корневой системы (3,2 см) зарегистрирована в варианте с применением ИУК 5 мг/л. Что касается индолилмаслянной кислоты, то с увеличением ее концентрации рост корней замедляется. Максимальная длина корней (1,9 см) была отмечена в варианте 3 мг/л. Разницу в действии исследуемых ауксинов можно объяснить различным их происхождением. ИУК является природным гормоном, что повышает его доступность клеткам растений), а ИМК – его синтетическим аналог. Вероятно, эти и объясняются такие различия в их действии на наш объект. Кроме того, указанная тенденция была неоднократно отмечена в литературе и обусловлена функционированием различных рецепторных систем, в том числе, особенностью данного фитогормона (ИУК) влиять на биопроцессы проницаемости мембран, поступления воды в клетку, и активность ферментов [11].

Рис. 4 – Влияние различных концентраций ИУК и ИМК на длину корневой системы микрорастений диоскореи ниппонской

 

Известно, что все растения способны к биосинтезу полифенолов, причем некоторые соединения простого строения, такие как фенилпропаноиды, имеют практически всеобщее распространение [7]. Однако исследователями отмечается, что биосинтез полифенолов в растениях происходит с разной интенсивностью и зависит от ряда взаимосвязанных факторов, например, возраста исходного экспланта, типа первичного экспланта, условий выращивания интактного растения и др. В большинстве случаев показано, что наиболее интенсивно биосинтез фенольных соединений происходит в молодых активно вегетирующих органах [12].

Ранее мы установили биосинтетические особенности в различных органах интактных растений диоскореи в отношении накопления полифенолов, в частности, суммы растворимых фенольных соединений (ФС), флаванов (ФЛ) и флавонолов. Показано, что изолированные с интактных растений первичные экспланты (побеги, однолетние корневища, многолетние корневища), обладают очень высокой способностью к синтезу полифенолов, где наибольшее их содержание отмечалось в корневищах. Причем в долговегетирующих многолетних корневищах суммарное содержание ФС было почти вдвое выше по сравнению с содержанием таковых в молодых (Рис. 5).

 

Рис.5 – Содержание полифенолов в интактных растениях диоскореи ниппонской

Рис.6 – Содержание полифенолов в микроклонах диоскореи наппонской (гормональный состав питательной среды представлен 1,0 мг/л 2 ip+ 1,0 мг/л НУК)

 

Аналогичные биосинтетические тенденции характерны и для флаванов, одних из наиболее высокореакционных низкомолекулярных веществ, обладающих мощными антиоксидантными свойствами [13]. Относительно флавонолов, следует заметить, то что их содержание было отмечено только в побегах, то есть в зеленых надземных частях растений. Мы связываем это с тем, что в зеленых растительных тканях флаванолы, как правило, являются доминирующими полифенолами, так как их биосинтез приурочен к хлоропластам [14]. Полученные данные согласуются и с результатами других исследователей, а также с ранее полученными нашими данными по диоскорее кавказской (Dioscorea caucasia Lypsky) [15].

На заключительном этапе исследований необходимо определить содержание полифенолов в микроклонах и установить зависимость их содержания от типа исследуемой ткани. Для изучения содержания фенольных соединений в растениях-регенерантах диоскореи ниппонской были взяты микроклоны, инициированные на питательной среде, содержащей 2ip в концентрации 1 мг/л в сочетании с НУК 1 мг/л.  Установлено, что наибольшее количество суммы растворимых фенольных соединений отмечалось в микролистьях и микроклубнях, сформированных в основании побегов, а в корнях учитываемый показатель был примерно в 4 раза меньше. Аналогичные результаты были получены и в отношении флаванов. Присутствие флаванолов отмечено только в микролистьях и микроклубнях. В микрокорнях диоскореи их присутствие не обнаружено (Рис. 6). Полученные данные полностью согласуются с результатами нашей работы с интактными растениями in vivo, а также с данными других исследователей [16]. Скорее всего наличие полифенолов в надземной части диокореи играет роль медиаторов в физиолого-биохимических реакциях, а также определяет защиту растений от механических воздействий и патогенов, а растворимые фенольные соединения, находящиеся в многолетних долговегетирующих корневищах, преимущественно являются запасными и регуляторными веществами [17].

Сравнивая результаты исследований по содержанию фенольных соединений в интактных растениях и микроклонах следует обратить внимание, что способность к синтезу вторичных соединений в микроклонах была ниже, чем у исходных интактных тканей.

Заключение

Таким образом, показано влияние регуляторов роста на морфогенетическую активность различных экспланотов диоскореи, где для формирования надземной части наиболее благоприятным ауксином была ИМК в концентрации 1 мг/л, а для ризогенеза среда с добавлением 5 и 7 мг/л ИМК. Диоскорея ниппонская обладает высокой способностью к биосинтезу разнообразных фенольных соединений, что несомненно имеет важное практическое значение как потенциальный источник ценных биологически активных веществ для фарминдустрии. Выявленные нами различия в накоплении фенольных соединений в разных органах как интактных растений диоскореи ниппонской, так и в условиях in vitro еще раз подтверждают, что биосинтез продуктов вторичного метаболизма характеризуется органоспецифичностью, и указывает на их важную роль, в качестве запасных и физиологически активных веществ [18],[19].

Конфликт интересов Не указан.

Conflict of Interest None declared.

 

Список литературы / References

1. Woo K.W. Phenolic derivatives from the rhizomes of Dioscorea nipponica and their anti-neuroinflammatory and neuroprotective activities / K.W. Woo, O.W. Kwon, S.Y. Kim, S.Z.Choi, M.W. Son, K.H. Kim, K.R. Lee // Journal Ethno pharmacology.2014 Sep 11;155(2):1164-70. doi: 10.1016/j.jep.2014.06.043. Epub 2014 Jun 25.
2. АлексееваГ.М. Фармакогнозия. Лекарственное сырье растительного и животного происхождения / Г.М. Алексеева, Г.А. Белодубровская, К.Ф. Блинова, М.Ю. Гончаров / под ред. Г.П. Яковлева. – Санкт-Петербург: СпецЛит, 2013.
3. Тюкавкина Н.А. Биофлавоноиды / Н.А. Тюкавкина. – М.: Издательский дом «Русский врач». 2002. – 56 с.
4. Bhaising S.R. Plant tissue culture – a potential source of medicinal compounds / S.R. Bhaising, V.L. Maheshwari // J. Scientific and Industrial research. – 1998. – V. 57. – P. 703–708.
5. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе / Р.Г. Бутенко. - М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. – 160 с.
6. Носов А.М. Регуляция синтеза вторичных соединений в культуре клеток растений // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений / А.М Носов / под ред. Р.Г. Бутенко. – М. Наука.– 1991.
7. Запрометов М.Н.Фенольные соединения и их роль в жизни растения / М.Н Запрометов.// LVI Тимирязевские чтения. – М.: Наука. 1996. – 45 с.
8. Калашникова Е.А. Лабораторный практикум по сельскохозяйственной биотехнологии / Е.А. Калашникова, О.Ю. Миронова, Н.В. Лаврова и др. – М.:РГАУ-МСХА, 2004, 134 с.
9. Запрометов М. Н. Фенольные соединения и методы их исследования / М. Н. Запрометов // Биохимические методы в физиологии растений. Наука, 1971. С. 185–197
10. Si-hong Ou-yang Dioscorea nipponicaMakino: a systematic review on its ethnobotany, phytochemical and pharmacological profiles / Si-hong Ou-yang, Tao Jiang, Lin Zhu, Tao Yi //Chemistry Central Journalvolume 12, Article number: 57 (2018).
11. Ковалев В.М. Скрининг регуляторов роста с целью применения их в биотехнологии в культуре ткани картофеля./ В.М.Ковалев // Тезисы докл. VI Международная конференция "Регуляторы роста и развития в биотехнологиях".- Москва.- 2001.- C. 165
12. Santiago L. Compartmentation of phenolic compounds and phenylalanine ammonia-lyase in ltaves of Phyllanthus tenellus and their induction by copper sulphate / L. Santiago, R. Louro // Annals of botany. – 2000. – V. 86 – P. 1023-1032.
13. Giovanni F. Flavanoids as antioxidants: Localisation and functional significance / Giovanni Fgati, Elisa Azzarello, Susanna Polastri, Massimiliano Tattini // Plant Science 196 (2012) 67-76
14. Запрометов М.Н. Способность изолированных хлоропластов из листьев фасоли осуществлять биосинтез фенольных соединений / М.Н. Запрометов, Т.Н. Николаева // Физиология растений. 2003. – Т. 50. – № 5. – С. 699-702.
15. Доан Тху Тхуи О способности микроклонов лекарственных растений на примере Dioscorеa caucasica Lipsky к образованию биофлаваноидов / Доан Тху Тхуи, Е.А. Калашникова, С.М. Зайцева, Р.Н Киракосян // Естественные и технические науки. – 2018. – №2 – С.38
16. Qunfeng Zhang, Meiya Liu, Jianyun Rua Metabolomics analysis reveals the metabolic and functional roles of flavonoids in light-sensitive tea leaves // Plant Biology, 2017 March 8.
17. Grandmaison J. Characterization and localization of plant phenolics likely involved in the pathogen resistance expressed by endomycorrhizal roots / J Grandmaison, GM Olah, MR Van Calsteren, V Furlan // Mycorrhiza 1993 – V. 3:155–164
18. Eichholz I. UV-B-induced changes of volatile metabolites and phenolic compounds in blueberries (Vaccinium corymbosumL.) / I Eichholz, S. Huyskens-Keil, A. Keller, D. Ulrich, L.W. Kroh, S. Rohn // Food Chem., 2011. 126: 60-64.
19. Dixon R. Stress-indused phynylpropanoid metabolism / R. Dixon, N. Paiva // Plant cell, 1995, Vol. 7, P. 1085-1097.

Список литературы на английском языке / References in English

1. Woo K.W. Phenolic derivatives from the rhizomes of Dioscorea nipponica and their anti-neuroinflammatory and neuroprotective activities / K.W. Woo, O.W. Kwon, S.Y. Kim, S.Z.Choi, M.W. Son, K.H. Kim, K.R. Lee // Journal Ethno pharmacology. 2014 Sep 11;155(2):1164-70. doi: 10.1016/j.jep.2014.06.043. Epub 2014 Jun 25.
2. Alekseeva G.M. Farmakognozija. Lekarstvennoe syr'e rastitel'nogo i zhivotnogo proishozhdenija [Pharmacognosy. Medicinal raw materials of plant and animal origin] / G.M. Alekseeva, G.A. Belodubrovskaja, K.F. Blinova, M.Ju. Goncharov / ed. by G.P. Jakovleva. – Sankt-Peterburg: SpecLit, 2013. [in Russian]
3. Tjukavkina N.A. Bioflavonoidy [Bioflavonoids]. – M.: Izdatel'skij dom «Russkij vrach». 2002. – 56 p. [in Russian]
4. Bhaising S.R. Plant tissue culture – a potential source of medicinal compounds / S.R. Bhaising, V.L. Maheshwari // J. Scientific and Industrial research. – 1998. – V. 57. – P. 703–708.
5. Butenko R.G. Biologija kletok vysshih rastenij in vitro i biotehnologija na ih osnove [Biology of cells of higher plants in vitro and biotechnology on their basis] / R.G. Butenko - M.: FBK-PRESS, 1999. – 160 p. [in Russian]
6. Nosov A.M. Reguljacija sinteza vtorichnyh soedinenij v kul'ture kletok rastenij [Regulation of synthesis of secondary compounds in plant cell culture] // Biologija kul'tiviruemyh kletok i biotehnologija rastenij [Biology of cultured cells and plant biotechnology] / ed. by R.G. Butenko. – M. Nauka. – 1991. [in Russian]
7. Zaprometov M.N. Fenol'nye soedinenija i ih rol' v zhizni rastenija [Phenolic compounds and their role in plant life] // LVI Timirjazevskie chtenija [LVI Timiryazev's readings]. – M.: Nauka. 1996. – 45 p. [in Russian]
8. Kalashnikova E.A. Laboratornyj praktikum po sel'skohozjajstvennoj biotehnologii [Laboratory workshop on agricultural biotechnology] / E.A. Kalashnikova, O.Ju. Mironova, N.V. Lavrova i dr. – M.:RGAU-MSHA, 2004, 134 p. [in Russian]
9. Zaprometov M. N. Fenol'nye soedinenija i metody ih issledovanija [Phenolic compounds and methods of their research] // Biohimicheskie metody v fiziologii rastenij [Biochemical methods in plant physiology]. Nauka, 1971. P. 185–197 [in Russian]
10. Si-hong Ou-yang Dioscorea nipponica Makino: a systematic review on its ethnobotany, phytochemical and pharmacological profiles / Si-hong Ou-yang, Tao Jiang, Lin Zhu, Tao Yi //Chemistry Central Journal volume 12, Article number: 57 (2018).
11. Kovalev V.M. Skrining reguljatorov rosta s cel'ju primenenija ih v biotehnologii v kul'ture tkani kartofelja / V.M. Kovalev [Screening of growth regulators for their application in biotechnology in potato tissue culture] // Tezisy dokl. VI Mezhdunarodnaja konferencija "Reguljatory rosta i razvitija v biotehnologijah" [Abstracts. VI international conference "Growth and development Regulators in biotechnologies”]. – Moskva.- 2001.- P. 165 [in Russian]
12. Santiago L. Compartmentation of phenolic compounds and phenylalanine ammonia-lyase in ltaves of Phyllanthus tenellus and their induction by copper sulphate / L. Santiago, R. Louro // Annals of botany. – 2000. – V. 86 – P. 1023-1032.
13. Giovanni F. Flavanoids as antioxidants: Localisation and functional significance / Giovanni Fgati, Elisa Azzarello, Susanna Polastri, Massimiliano Tattini // Plant Science 196 (2012) 67-76
14. Zaprometov M.N. Sposobnost' izolirovannyh hloroplastov iz list'ev fasoli osushhestvljat' biosintez fenol'nyh soedinenij [The Ability of isolated chloroplasts from bean leaves to carry out biosynthesis of phenolic compounds] / M.N. Zaprometov, T.N. Nikolaeva // Fiziologija rastenij [Plant Physiology]. 2003. – V. 50. – № 5. – P. 699-702. [in Russian]
15. Doan Thu Thui O sposobnosti mikroklonov lekarstvennyh rastenij na primere Dioscorea caucasica Lipsky k obrazovaniju bioflavanoidov [About the ability of microclones of medicinal plants on the example of Dioscorea caucasica Lipsky to form bioflavonoids] / Doan Thu Thui, E.A. Kalashnikova, S.M. Zajceva, R.N Kirakosjan // Estestvennye i tehnicheskie nauki [Natural and technical Sciences]. – 2018. – №2 – P.38 [in Russian]
16. Qunfeng Zhang, Meiya Liu , Jianyun Rua Metabolomics analysis reveals the metabolic and functional roles of flavonoids in light-sensitive tea leaves // Plant Biology, 2017 March 8.
17. Grandmaison J. Characterization and localization of plant phenolics likely involved in the pathogen resistance expressed by endomycorrhizal roots / J Grandmaison, GM Olah, MR Van Calsteren, V Furlan // Mycorrhiza 1993. – V. 3:155–164
18. Eichholz I. UV-B-induced changes of volatile metabolites and phenolic compounds in blueberries (Vaccinium corymbosum L.) / I Eichholz, S. Huyskens-Keil, A. Keller, D. Ulrich, L.W. Kroh, S. Rohn // Food Chem., 2011. 126: 60-64.
19. Dixon R. Stress-indused phynylpropanoid metabolism / R. Dixon, N. Paiva // Plant cell, 1995, Vol. 7, P. 1085-1097