ИЗУЧЕНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ПОБЕГОВ СМОРОДИНЫ ЧЕРНОЙ И ЭКСТРАКТА ЛИСТЬЕВ И ПОБЕГОВ СМОРОДИНЫ СУХОГО
ИЗУЧЕНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ПОБЕГОВ СМОРОДИНЫ ЧЕРНОЙ И ЭКСТРАКТА ЛИСТЬЕВ И ПОБЕГОВ СМОРОДИНЫ СУХОГО
Аннотация
Для улучшения качества лекарственного обеспечения населения и расширения номенклатуры лекарственных средств с целью лечения различных заболеваний, актуальными являются исследования по изучению токсичности и фармакологической активности перспективных лекарственных средств и субстанций из растительного сырья. Побеги смородины черной, как легкодоступное к заготовке сырье, представляют интерес для изучения с целью установления возможности их применения в научной медицине. В статье приведены результаты изучения токсичности и фармакологической активности побегов смородины черной и экстракта листьев и побегов смородины черной сухого. Оценку острой токсичности осуществляли в соответствии с ГОСТ 32644 – 2014. Определение противовоспалительной активности настоя и экстракта листьев и побегов смородины чёрной осуществляли в соответствии с Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Обработку данных проводили статистически, для сравнения групп рассчитывали непараметрический U-критерий Манна-Уитни. Проведенные исследования показали отсутствие острой токсичности сырья и экстракта смородины черной. Настой побегов смородины черной в дозах 120 и 240 мг/кг проявил наибольшую противовоспалительную активность и ее прирост от 3 к 5 часу, соответствующую активности препарата сравнения – диклофенака натрия. Экстракт листьев и побегов смородины сухой в дозе 50 мг/кг проявил высокую противовоспалительную активность уже к 3 ч наблюдения. Эффективная дозировка экстракта 50 мг/кг была сопоставима с таковой у диклофенака натрия.
1. Введение
Изучение фармакологических свойств является важней задачей для открытия новых свойств лекарственных растений. Комплекс биологически активных веществ растений обеспечивает наличие различных фармакологических эффектов и раскрывает новые возможности применения растительного сырья в лечении различных заболеваний , , , . Смородина черная (Ribes nigrum L.) относится к семейству Grossulariaceae – крыжовниковых, широко используется в медицине, гомеопатии и народной медицине. Как дикорастущее растение смородина черная распространена в Европейской части России, на Урале, в Западной и Восточной Сибири. В культуру введена, как ягодное растение, еще в средние века. В настоящее время она широко культивируется в нашей стране, это одна из самых распространенных ягодных культур как в промышленных садах, так на приусадебных участках . Фармакопейным сырьем смородины являются плоды, которые входят в состав фитопрепаратов. Листья смородины чёрной используются в народной медицине в виде водных извлечений – настоев, отваров, чаёв, их назначают для лечения заболеваний печени, почек, желудка, ревматизма, кожных заболеваний, простуды. Спиртовые извлечения листьев смородины черной содержат флавоноиды, аминокислоты, элементы: калий, кальций, магний, натрий, фосфор , . Побеги смородины черной, как легкодоступное к заготовке сырье, представляют интерес для изучения с целью установления возможности их применения в научной медицине, поэтому на кафедре фармакогнозии ФГБОУ ВО «ПГФА» Минздрава России ведутся исследования побегов и листьев смородины черной.
Цель работы – изучение острой токсичности и противовоспалительной активности перспективного сырья – побегов смородины черной и экстракта листьев и побегов смородины черной сухого.
Объектами для исследований служили побеги смородины черной дикорастущей и культивируемой, заготовленные в период цветения и после плодоношения летом 2022 года на территории Свердловской, Челябинской областей, Пермского края и Республики Башкортостан. Сырье высушено воздушно-теневым способом, а также экстракт листьев и побегов смородины сухой – порошок от желтовато-коричневого до бронзового цвета со специфическим запахом, горьковатым, слегка вяжущим вкусом (срок годности – 2 года, ОАО «Биохиммаш» г. Москва).
Исследование острой токсичности и противовоспалительной активности осуществляли на белых беспородных животных: мышах массой 20 – 22 г. и крысах 180 – 220 г., которых содержали в стандартных условиях вивария в соответствии с требованиями Приказа Минздравсоцразвития России от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики» и «Правилам Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей» (Страсбург, 1986). Все исследования проводили в утренние часы. Оценку острой токсичности осуществляли в соответствии с ГОСТ 32644 – 2014. Для проведения исследования мышей делили на 2 группы в каждой по 6 самцов и 6 самок. Апробируемый сухой экстракт, предварительно растворенный в воде очищенной и настой вводили перорально в дозе 2000 мг/кг. Общая продолжительность наблюдения за животными составляла 14 дней. Регулярно фиксировались показатели, характеризующие токсическое действие: общее состояние животных, изменение физической активности, поведения, аппетита, состояние шёрстного покрова, реакция на внешние раздражители .
Определение противовоспалительной активности настоя и экстракта листьев и побегов смородины чёрной осуществляли в соответствии с Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств .
Настой листьев и побегов смородины черной в дозах 120, 240 и 480 мг/кг и водные растворы экстракта листьев и побегов смородины сухого в дозах 25, 50, 100 мг/кг, а также, препарат сравнения - диклофенак натрия в дозе 20 мг/кг вводили перорально, за час до субплантарного введения в заднюю лапу крыс 0,1 мл 1 % водного раствора каррагенина. Формировали восемь групп, в каждой по пять крыс:
1 интактная группа, животным вводили каррагенин и растворитель;
2 опытная группа, животным вводили каррагенин и настой в дозе 120 мг/кг;
3 опытная группа, животным вводили каррагенин и настой в дозе 240 мг/кг;
4 опытная группа, животным вводили каррагенин и настой в дозе 480 мг/кг;
5 опытная группа, животным вводили каррагенин и раствор экстракта в дозе 25 мг/кг;
6 опытная группа, животным вводили каррагенин и раствор экстракта в дозе 50 мг/кг;
7 опытная группа, животным вводили каррагенин и раствор экстракта в дозе 100 мг/кг;
8 группа препарата сравнения, животным вводили каррагенин и раствор диклофенака натрия в дозе 20 мг/кг.
Прирост объёма воспаленной стопы оценивали онкометрически через 3 и 5 часов после введения флогогенного агента и вычисляли процент торможения отёка к контролю. Обработку данных проводили статистически, для сравнения групп рассчитывали непараметрический U-критерий Манна-Уитни .
2. Основные результаты
2.1. Изучение острой токсичности
Определение острой токсичности проводили на самцах и самках белых беспородных мышей массой 20 – 22 г. Животные содержались на обычном рационе.
Пероральное введение настоя побегов смородины в дозе 2000 мг/кг не привело к гибели животных в течение двух недель наблюдения. После введения настоя не наблюдали снижение двигательной активности, замирания и диареи, спустя сутки токсических эффектов не наблюдали. За период наблюдения не отмечено достоверного изменения массы тела. Опытные группы самцов и самок не имели значимых отличий в проявлении токсических эффектов.
Пероральное введение экстракта побегов смородины в дозе 2000 мг/кг не привело к гибели животных в течение двух недель наблюдения. Токсических проявлений во внешнем виде и поведении не выявлено. За период наблюдения не отмечено достоверного изменения массы тела. Опытные группы самцов и самок не имели значимых отличий в проявлении токсических эффектов.
Таким образом, проведенные исследования показали отсутствие острой токсичности сырья и экстракта смородины черной.
2.2. Изучение противовоспалительной активности
Противовоспалительную активность определяли на 40 крысах обоего пола массой 220-280 грамм. Животные содержались на обычном рационе. Исследуемые препараты: побегов смородины черной настой вводили в дозах 120, 240 и 480 мг/кг перорально (перспективное средство) и экстракт листьев и побегов смородины сухой (перспективная субстанция) вводили в дозах 50, 100 и 150 мг/кг перорально за час до моделирования каррагенинового воспаления. Каррагениновый отек вызывали субплантарным введением 1% раствора каррагенина.
В контрольной группе процент прироста отёка составил 28±6 % и 40±8 %, соответственно через 3 и 5 часов.
Введение настоев листьев и побегов смородины в дозах 120, 240, 480 мг/кг привело к статистически значимому торможению карагенинового отёка (таблица 1).
Таблица 1 - Противовоспалительная активность настоя побегов смородины черной
Исследуемая группа | % торможения отека к контролю после введения каррагенина через | ||
Доза, мг/кг | 3 ч | 5 ч | |
Контрольная группа (1) *1 | - | 28 ± 6 | 40 ± 8 |
Опытная группа (2) (Н-120) | 120 | 24 * 3 | 77 *2 |
Опытная группа (3) (Н-240) | 240 | 44 *2, 3, 4 | 83 *8 |
Опытная группа (4) (Н-480) | 480 | 2 * 2, 3, 4 | 37 * 2, 3, 4, 8 |
Препарат сравнения (8) (диклофенак натрия) | 20 | 77 *2 | 87 *2 |
Примечание: *1 представлены значения процента прироста объёма стопы через 3 и 5 после введения каррагенина; *2 p < 0,05 при сравнении с контрольной группой; *3 p < 0,05 при сравнении с группой препарата сравнения; *3 p < 0,05 при сравнении с опытной группой 2 (Н-120); *4 p < 0,05 при сравнении с опытной группой (Н-240)
В период наблюдения 5 часов настой в дозах 120 и 240 мг/кг проявил наибольшую активность, соответствующую активности препарата сравнения – диклофенака натрия. В исследуемых дозах противовоспалительный эффект настоя прирастал в период от 3 к 5 часу.
Введение экстракта листьев и побегов смородины сухого в дозах 25, 50, 100 мг/кг привело к статистически значимому торможению карагенинового отёка (таблица 2).
Таблица 2 - Противовоспалительная активность экстракта листьев и побегов смородины сухого
Исследуемая группа | % торможения отека к контролю после введения каррагенина через | ||
Доза, мг/кг | 3 ч | 5 ч | |
Контрольная группа (1) *1 | - | 28 ± 6 *1 | 40 ± 8 *1 |
Опытная группа (5) (Э-25) | 25 | 36 *3 | 64 *2, 3 |
Опытная группа (6) (Э-50) | 50 | 82 *2, 4 | 93 *2, 4, |
Опытная группа (7) (Э-100) | 100 | 31 *3, 5 | 52 *3, 5 |
Препарат сравнения группа (8) (диклофенак натрия) | 20 | 77 *2 | 87 *2 |
Примечание: *1 представлены значения процента прироста объёма стопы через 3 и 5 после введения каррагенина; *2 p < 0,05 при сравнении с контрольной группой; *3 p < 0,05 при сравнении с группой препарата сравнения; *4 p < 0,05 при сравнении с опытной группой 5 (Э-25); *5 p < 0,05 при сравнении с опытной группой (Э-50)
Наибольшую активность проявил экстракт в дозе 50 мг/кг, соответствующую активности препарата сравнения диклофенака натрия. Для экстрактов в дозах 25 и 100 мг/кг противовоспалительный эффект нарастал в период от 3 к 5 часу, в то время как в дозе 50 мг/кг наибольшая активность наблюдалась уже к 3 часу наблюдения.
3. Заключение
Таким образом, изучение острой токсичности сырья – смородины черной побеги (Ribes nigri cormus) и экстракта листьев и побегов смородины сухого показало ее отсутствие.
По результатам исследования противовоспалительной активности доказано, что противовоспалительный эффект у настоя смородины чёрной побегов ниже, чем у экстракта листьев и побегов смородины сухого. Установлена эффективная дозировка экстракта – 50 мг/кг, сопоставимая с таковой у НПВС диклофенака натрия.