ИССЛЕДОВАНИЕ РАЗДРАЖАЮЩЕГО И СЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ЭКСТРАКТА КОРНЕВИЩ POTENTILLA SUPINA L.
ИССЛЕДОВАНИЕ РАЗДРАЖАЮЩЕГО И СЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ЭКСТРАКТА КОРНЕВИЩ POTENTILLA SUPINA L.
Аннотация
В последнее время в научной литературе появляется все больше работ, свидетельствующих о значимой роли растительного лекарственного сырья как основы для изготовления фитопрепаратов, что является одним из наиболее важных направлений в современной медицине и фармации. Перспективным растительным источником фитопрепаратов является растение семейства Rosaceae – лапчатка низкая (Potentilla supina L.), произрастающее на территории Астраханской области. Цель работы: исследование кожно-раздражающего и аллергизирующего действия экстракта корневищ лапчатки низкой (Potentilla supina L.), произрастающей на территории Астраханской области. Материалы и методы. В качестве объекта исследования использовались корневища Potentilla supina L. Исследования проводили на белых беспородных крысах-самцах массой 200-220 г. Местно-раздражающее действие оценивали путем накожного нанесения исследуемого экстракта в виде ежедневной аппликации со временем экспозиции 4 часа в течение 3 дней. Сенсибилизирующее действие экстракта корневищ Potentilla supina L. изучали на крысах-самцах, разделенных на две группы (n=6): опытные животные, которым вводили сенсибилизирующую дозу экстракта (60 мкг) однократно внутрикожно в основание хвоста; контрольные животные, которым вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме. На шестые сутки под апоневроз задней лапки опытных животных вводили повторно экстракт в дозе 100 мкг; контрольным животным – физиологический раствор в эквивалентном объеме. После выведения животных из эксперимента был рассчитан индекс реакции гиперчувствительности замедленного типа. Результаты. В результате оценки местно-раздражающего действия экстракта корневищ Potentilla supina L. было установлено, что выраженность эритематозной реакции у всех особей контрольной и опытной групп соответствовало 0 баллам. Полученные в ходе эксперимента результаты показали, что у опытных животных не было установлено значительного увеличения размера лапки, т.е., показатель соответствовал у пятерых животных 1 баллу и у одного животного – 0 баллов. Экспериментально выявлено, что экстракт корневищ лапчатки низкой можно считать относительно безопасным и нетоксичным. Заключение. Таким образом, проведенные исследования показали отсутствие кожно-раздражающего и аллергизирующего действия жидкого экстракта корневищ Potentilla supina L. при накожном и внутрикожном введении, что подтверждает безопасность применения и возможное его использование в качестве лекарственного растительного сырья.
1. Введение
В последнее время в научной литературе появляется все больше работ, свидетельствующих о значимой роли растительного лекарственного сырья как основы для изготовления фитопрепаратов, что является одним из наиболее важных направлений в современной медицине и фармации , . Лекарственные средства, полученные на основе растительного сырья, обладающие мягким и пролонгированным действием, малой токсичностью и содержащие сложный комплекс биологически активных компонентов, на сегодняшний день широко применяются для эффективного терапевтического лечения и профилактики различных заболеваний , . Учитывая вышеизложенное, изучение безопасности и фармакологической активности растительного сырья является актуальной задачей.
Перспективным растительным источником фитопрепаратов является растение семейства Rosaceae – лапчатка низкая (Potentilla supina L.), произрастающее на территории Астраханской области. В качестве сырья у видов рода Potentilla используются корневища, содержащие в большом количестве тритерпеноиды, дубильные вещества, органические кислоты, флавоноиды, кумарины, полисахариды, макро- и микроэлементы и др. , . Научными исследованиями доказано, что извлечения, полученные из растений рода Potentilla, обладают отхаркивающим, вяжущим, регенераторным, противовоспалительным, гемостатическим действием . В настоящее время фармакопейным является растение лапчатка прямостоячая (Potentillae erectae), лекарственные формы которой представлены измельченным корневищем, таблетками и капсулами, имеющие основные назначения такие как заболевания щитовидной железы, печени и кишечника. Принимая во внимание вышеописанные биофармакологические свойства данного растения, перспективным направлением является разработка наружных лекарственных форм как жидких, так и мягких, где в качестве действующего компонента может быть использован экстракт корневищ Potentilla supina L. С целью применения растений для получения фитопрепаратов необходимо провести исследование безопасности (местно-раздражающего и сенсибилизирующего действия) экстракта корневищ Potentilla supina L., что позволит после проведения дополнительных доклинических исследований фармакологической активности указанного сырья, использовать его для получения наружных форм в виде крема, мази и геля с целью лечения инфекционно-воспалительных заболеваний кожи и подкожно-жировой клетчатки. Интерпретированные результаты проведенных экспериментальных работ на животных могут быть использованы как основа для клинических исследований новых лекарственных форм. В связи с отсутствием научных данных о биологическом действии Potentilla supina L., целью работы явилось исследование кожно-раздражающего и аллергизирующего действия экстракта корневищ лапчатки низкой (Potentilla supina L.), произрастающей на территории Астраханской области.
2. Методы и принципы исследования
В эксперименте исследовали раздражающие и сенсибилизирующие свойства экстракта корневищ Potentilla supina L., полученного в соотношении 1:10 путем настаивания измельченного и высушенного сырья на водяной бане при температуре 60оС в течение 2 часов с последующей отгонкой экстрагента на вакуумном испарителе. В качестве экстрагента использовали водно-спиртовой раствор 70% концентрации.
Исследования проводили на белых беспородных крысах-самцах массой 200-220 г. Местно-раздражающее действие оценивали путем накожного нанесения исследуемого экстракта в виде ежедневной аппликации со временем экспозиции 4 часа в течение 3 дней. Предварительно, за сутки до эксперимента, на боковых поверхностях туловища крыс выстригали шерсть площадью 4 см2. Наносили экстракт в дозе 0,02 мл на 1 см2 поверхности стеклянной палочкой (опытные животные – 6 особей) и дистиллированную воду (контрольные животные – 6 особей). После чего крыс фиксировали на 4 часа в индивидуальных маленьких клетках во избежание слизывания экстракта. Спустя 24 часа после последнего нанесения исследуемого экстракта оценивали состояние кожных покровов: наличие и выраженность эритемы – визуальная оценка; толщину кожной складки (мм) – измерение микрометром (ТКСапл – после аппликации; ТКСфон – до аппликации). Далее рассчитывали индекс местно-раздражающего действия в баллах от 0 до 2 (от отсутствия эритемы до умеренно выраженной); выраженность отека: 0 баллов – 0-0,09; 1 балл – 0,1 – 0,39; 3 балла – 0,4-0,69 , .
Сенсибилизирующее действие экстракта корневищ Potentilla supina L. изучали на крысах-самцах, разделенных на две группы (n=6): опытные животные, которым вводили сенсибилизирующую дозу экстракта (60 мкг) однократно внутрикожно в основание хвоста; контрольные животные, которым вводили физиологический раствор в эквивалентном объеме. На шестые сутки под апоневроз задней лапки опытных животных вводили повторно экстракт в дозе 100 мкг; контрольным животным – физиологический раствор в эквивалентном объеме. О развитии реакции гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ) свидетельствовало наличие разницы в толщине лапы (мм), которую измеряли до и через 24 ч введения экстракта (измерение проводили микрометром). Сравнивали среднегрупповые показатели толщины лап опытных и контрольных животных и оценивали их в баллах:
- 0 баллов – до 0,1 мм;
- 1 балл – 0,11–0,20 мм;
- 2 балла – 0,21–0,30 мм;
- 3 балла – 0,31–0,40 мм;
- 4 балла – 0,41–0,50 мм;
- 5 баллов - 0,51 мм и более (измерения проводили пятикратно с последующим расчетом среднего значения) .
После выведения животных из эксперимента был рассчитан индекс РГЗТ: отношение разницы массы лапки контрольной и опытной к контрольной, выраженное в процентах.
Полученные результаты были статистически обработаны при помощи пакета программы «Statistica 6.0» с учетом U-критерия Манна-Уитни. Различия между группами признавали статистически значимыми при р ≤ 0,05.
3. Основные результаты
В результате оценки местно-раздражающего действия экстракта корневищ Potentilla supina L. было установлено, что выраженность эритематозной реакции у всех особей контрольной и опытной групп соответствовало 0 баллам.
Результаты оценки выраженности отека при воздействии исследуемого экстракта показаны на рисунке 1.
Рисунок 1 - Выраженности отека под влиянием экстракта корневищ Potentilla supina L. при оценке местно-раздражающего действия
Результаты оценки сенсибилизирующего действия экстракта корневищ Potentilla supina L. показаны на рисунке 2.
Рисунок 2 - Изменение толщины лап крыс под влиянием экстракта корневищ Potentilla supina L. при оценке сенсибилизирующего действия
Была проведена оценка индекса РГЗТ, результаты которой установили, что в контрольной группе данный показатель имел значение 2,35±0,38 и в опытной 2,74±0,87, т.е. изменение составляло 16% (р ≥ 0,05), однако не имело статистической значимости.
Анализ полученных результатов показал, что экстракта корневищ Potentilla supina L. можно считать относительно безопасным и нетоксичным.
4. Обсуждение
Полученные нами экспериментальные данные могут быть подтверждены исследованиями местно-раздражающего и сенсибилизирующего действия других растений. Выявлено, что указанные эффекты редко возникают под воздействием экстрактов растений, что возможно связано с технологическими особенностями их получения и наличием разнообразного комплекса биологически активных соединений, а не индивидуальных компонентов, оказывающих выраженный биологический эффект, в том числе и неблагоприятный. Однако наблюдаемые нами изменения у двух особей могут быть связаны с наличием в составе растений рода Лапчатка значительного количества тритерпеноидов, которые обладают наибольшим сенсибилизирующим потенциалом, а также с индивидуальными особенностями организма животного , , .
5. Заключение
Таким образом, проведенные исследования показали отсутствие кожно-раздражающего и аллергизирующего действия жидкого экстракта корневищ лапчатки низкой (Potentilla supina L.) при накожном и внутрикожном введении, что подтверждает безопасность применения и возможное его использование в качестве лекарственного растительного сырья для получения наружных лекарственных форм.