ЛИПИДНЫЙ СПЕКТР ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ОТДЕЛЬНЫХ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Коношенко С.В.¹, Тюфикова Э.Р.²

¹Профессор, доктор биологических наук, кафедра биохимии, Таврический национальный университет им.В.И.Вернадского; ²Магистр, специализант кафедры биохимии, Таврический национальный университет им.В.И.Вернадского

ЛИПИДНЫЙ СПЕКТР ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ОТДЕЛЬНЫХ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

Аннотация

Показано, что липидный спектр гемолизатов эритроцитов практически здоровых людей, а также больных эритремией и апластической анемией представлен: фосфолипидами, неидентифицированными липидами, холестеролом, моноглицеридами, диглицеридами, свободными высшими жирными кислотами, триглицеридами и стеридами.

По сравнению с контрольной группой в эритроцитах больных эритремией и апластической анемией наблюдалось более низкое количественное содержание всех идентифицированных липидных фракций.

Полученные данные могут быть использованы в клинической практике.

Ключевые слова: эритроциты, липидный спектр, эритремия, апластическая анемия.

Konoshenko S.V.¹, Tyufikova E.R² .

¹Professor, Doctor of Biological Sciences, Department of Biochemistry, Taurida National Vernadsky V. I. University; ²Masters, Department of Biochemistry, Taurida National Vernadsky V. I. University

LIPID PROFILE OF ERYTHROCYTES IN SOME HEMATOLOGICAL DISEASES

Abstract

It has been shown that the lipid profile of hemolysates of erythrocytes of practically healthy people, as well as of patients with erythremia and aplastic anemia contains: phospholipids, unidentified lipids, cholesterol, monoglycerides, diglycerides, free higher fatty acids, triglycerides and steroids.

Compared with the control group in erythrocytes of patients with erythremia and with aplactic anemia, lower quantitative components of all identified lipid fractions were observed. The data obtained can be used in clinical practice.

Keywords: Erythrocytes (Red blood Cells), lipid spectrum, erythremia, aplastic anemia.

На сегодняшний день изучение биохимических особенностей организма человека является актуальным при диагностике и лечении различных заболеваний, часто встречающихся в лечебной практике[10].Работами последних лет показано, что некоторые заболевания характеризуются определенными биохимическими изменениями в эритроцитах[6,7]. Также известно, что липиды являются одними из  мишеней для действия активных форм кислорода и  их окисление приводит к увеличению количества малонового диальдегида и других продуктов пероксидации липидов[1,9]. В связи с этим, представило интерес  изучить липидный спектр эритроцитов при заболеваниях гематологического характера, вчастности, при эритремии и апластической анемии, что и явилось целью настоящей работы.

 

Материалы и методы исследований

Материалом для исследования служили эритроциты практически  здоровых людей (15 человек) – доноров станции переливания крови г.Симферополя и больных эритремией I степени (9 человек), апластической анемией (11 человек).  В каждой группе соотношение мужчин и женщин было приблизительно одинаковым. Возраст больных эритремией – в среднем 56 лет, апластической анемией – 54 года.

Кровь больных брали на базе Крымского онкологического центра при поступлении больных в стационар, перед началом лечения.

Эритроциты гемолизировали по методу Драбкина[11]. В гемолизатах эритроцитов определяли содержание отдельных липидных фракций.

Липиды, содержащиеся в 0,2 мл исследуемого образца, экстрагировали 5 мл смеси гептан-изопропаноловой смеси (1:1 по объему) при встряхивании в закрытых пробирках в течение 15 минут. Экстракты освобождали от белкового преципитата центрифугированием при 10 000об/мин. К липидным вытяжкам добавляли водный раствор соляной кислоты (рН 2,0) в объеме 2 мл для разделения фаз и отмывки от нелипидных примесей [3].

Для фракционирования липидных экстрактов гемолизата эритроцитов использовались  пластины с тонким слоем силикагеля «Silufol». На зону старта тонкослойной пластины  наносили по 10 мкл экстрактакалиброванным капилляром. Хроматограмму проявляли смесью гексана, диэтилового эфира и ледяной уксусной кислоты (73:25:2) в плотно закрытой камере, обложенной внутри фильтровальной бумагой, при восходящем движении проявителя. Пластины сушили под тягой в течение 30 мин и опрыскивали 10%-ным раствором серной кислоты, после чего нагревали при 80-100% до появления темных пятен [3].

Из литературы известно, что в первом пятне от линии старта сосредоточены фосфолипиды, во втором – неидентифицированные липиды, в третьем – холестерол, в четвертом – моноглицериды, в пятом – диглицериды, в шестом – свободные высшие жирные кислоты (ВЖК), в седьмом – триглицериды и в восьмом – стериды [8].

Полученные данные обрабатывали статистически с использованием критерия Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение

При  изучении содержания отдельных липидных фракций в гемолизате эритроцитов практически здоровых людей и больных эритремией и апластической анемией были получены данные, представленные в таблице 1.

Как видно из данных таблицы, в гемолизате эритроцитов практически здоровых людей наблюдались следующие липидные фракции: фосфолипиды, неидентифицированные липиды, холестерол, моноглицериды, диглицериды, высшие жирные кислоты и триглицериды.

В гемолизате эритроцитов больных эритремией и апластической анемией были выявлены фосфолипиды, неидентифицированные липиды, холестерол, моноглицериды, диглицериды и  высшие жирные кислоты.  Триглицериды идентифицировались в следовых количествах.

Анализ полученных данных показал, что в гемолизатах эритроцитов контрольной группы наибольшим содержанием липидных  фракций характеризовались неидентифицированные липиды, холестерол, ВЖК и триглицериды, что в целом согласуется с имеющимися в литературе данными[2,4,5].Наименьшим содержанием липидных фракций характеризовались  фосфолипиды, моноглицериды и  диглицериды.

Таблица 1 Содержание липидных фракций в гемолизате эритроцитов больных эритремией и апластической анемией (Мm)

 

Примечание: * - достоверность различия показателя по сравнению с контрольной группой (р<0,05)

Из всех липидных фракций идентифицированных в гемолизатах эритроцитов больных эритремией, наибольшим содержанием характеризовались фосфолипиды, неидентифицированные липиды, холестерол, моноглицериды и ВЖК, наименьшим содержанием отличились диглицериды. Триглицериды обнаружены следовых количествах.

У больных апластической анемией содержание липидных фракций в гемолизатах эритроцитов было близким за исключением ВЖК, количественное содержание которых существенно превышало уровень других липидных фракций.

По сравнению с контрольной группой отмечены достоверные различия в содержании практически всех липидных фракций, идентифицированных в эритроцитах больных эритремией и апластической анемией.

Так, у больных эритремией содержание фосфолипидов в эритроцитах было в 3,1 раза меньше, чем в контрольной группе, неидентифицированных липидов меньше в 3,7 раза, холестерола – в 3,5 раза, моноглицеридов – в 2,0раза, диглицеридов – в 4,0 раза, ВЖК – в 3,7 раза.

У больных апластической анемией также наблюдалось меньшее содержание липидных фракций по сравнению с контрольной группой. Содержание фосфолипидов было в 4,2 раза меньше, чем в контрольной группе, неидентифицированных липидов в 7,0 раз, холестерола – в 6,5 раза, моноглицеридов - в 4,1 раза, диглицеридов - в 4,5 раза, высших жирных кислот - в 4,6 раза.

Из данных таблицы также видно, что наименьшим содержанием в гемолизатах эритроцитов больных эритремией и апластической анемией характеризуются фракции диглицеридов триглицеридов. Что касается триглицеридов, то в случае двух групп больных наблюдается содержание этих липидных компонентов в следовых количествах. Это позволяет предположить, что триглицериды и диглицериды в большей степени чем другие липидные фракции, являются мишенями для активных форм кислорода, подвергаясь их разрушительному действию.

Выводы

1. Липидный спектр гемолизатов эритроцитов больных эритремией и апластической анемией представлен: фосфолипидами, неидентифицированными липидами, холестеролом, моноглицеридами, диглицеридами, высшими жирными кислотами. Триглицериды идентифицированы в следовых количествах.
2. По сравнению с контрольной группой  в гемолизатах эритроцитов больных эритремией и апластической анемией наблюдается более низкое количественное  содержание всех выявленных  липидных фракций. У больных эритремией отмечено наиболее выраженное снижение количественного содержания фосфолипидов и  диглицеридов.  У больных апластической анемией показано наиболее выраженное  снижение большинства идентифицированных липидных фракций как по сравнению с контрольной группой, так и по сравнению с больными эритремией.