ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРГЕКСИДИНА БИГЛЮКОНАТА В ГЕЛЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КАРИЕСА ДЕНТИНА

Березина Е.С.¹, Голованенко А.Л.², Алексеева И.В.³

¹Доцент, кандидат фармацевтических наук, ²Доцент, кандидат фармацевтических наук, ³Доцент, доктор фармацевтических наук, Пермская государственная фармацевтическая академия

ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРГЕКСИДИНА БИГЛЮКОНАТА В ГЕЛЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КАРИЕСА ДЕНТИНА

Аннотация

В статье представлены результаты валидации методики количественного определения хлоргексидина биглюконата в геле для лечения кариеса дентина. Для количественного определения хлоргексидина биглюконата предложен лаурилсульфатный метод по варианту осадительного титрования. Методика оценивалась по валидационным характеристикам: аналитическая область применения, линейность, правильность и прецизионность (сходимость). В результате проведенных исследований установлено, что аналитическая область применения, предложенной методики от 80 до 120%, подтверждена линейная зависимость расхода титранта от количественного содержания хлоргексидина биглюконата, средний процент регенерации 99,2%. Валидируемая методика позволяет определить количественное содержание хлоргексидина биглюконата в присутствии сопутствующих компонентов и может быть рекомендована для включения в нормативную документацию.

 Ключевые слова:  валидация, хлоргексидина биглюконат, лаурилсульфатный метод.

Berezina E.S.¹, Golovanenco A.L.², Alekseeva I.V.³

¹Associate professor, PhD in Pharmaceutics, ²Associate professor, PhD in Pharmaceutics, ³Associate professor, PhD in Pharmaceutics, Perm State Pharmaceutical Academy

VALIDATION OF QUANTITATIVE DETERMINATION METHOD OF CHLOROXEXIDINE BIGLUCONATE IN GEL FOR DENTINE CARIES TREATMENT

Abstract

The paper presents the results of validation method for quantitative determination of chlorhexidine bigluconate in gel for dentine caries treatment. Lauryl-sulfate method was proposed as a means of quantitative determination of chlorhexidine bigluconate according to precipitation titration variant. The method was evaluated by validation characteristics: Analytical field of application, linearity, accuracy and precision (convergence). As a result of the conducted studies, it was found that analytical range of application of the proposed method from 80 to 120% confirmed the linear dependence of titrant consumption on the quantitative content of chlorhexidine bigluconate, the average regeneration rate comprised 99.2%. The validated procedure allows determining quantitative content of chlorhexidine bigluconate in the presence of concomitant components and can be recommended for inclusion in regulatory documentation.

 Keywords:  validation, chlorhexidine bigluconate, lauryl-sulfate method.

Кариес зубов в настоящее время является наиболее распространенным заболеванием человечества. Поэтому в последние годы особую актуальность приобретает реминерализующая терапия - лечебно-восстановительная методика поступления и проникновения в твердые ткани зуба фтора, кальция, фосфора  и др., в результате чего происходит укрепление дентина и зубной эмали, что повышает устойчивость к кариозным поражениям. Несмотря на большое количество разработанных к настоящему времени препаратов, методик их применения, поиск и апробация новых средств для проведения реминерализующей терапии не теряют свою актуальность и востребованность в практическом здравоохранении. Одним из путей решения данной проблемы является разработка лекарственных форм на основе полимеров.

В результате комплекса проведенных научно – экспериментальных исследований предложен медикаментозный способ лечения среднего и глубокого кариеса реминерализующим гелем. В геле одновременно содержатся основные реминерализующие ионы - кальция, фосфора и фтора. Благодаря структурированным водным пространствам в геле обеспечивается защитный эффект относительно взаимодействия Са²⁺, НРО₄^2- и F^-, что позволяет сохранить минерализующие компоненты в свободном активном состоянии и тем самым обеспечить существенное повышение их проникновения в дентин; моделирование осуществляется по кальциевофосфорному коэффициенту дентина 2:1. Для подавления кариесогенной микрофлоры в кариозной полости в состав геля для реминерализации дентина введен антисептик  хлоргексидина биглюконат, эффективный в отношении грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, оказывающий фунгицидное действие на грибы [1, С. 71].

Необходимым условием внедрения лекарственного препарата в медицинскую практику является стандартизация, предусматривающая разработку нормативной документации, регламентирующей показатели качества, требования к ним  и методики их определения. Документированным подтверждением обоснованности выбора метода испытания для определения показателей и норм качества лекарственных средств является валидация, главной задачей, которой является экспериментальное доказательство того, что данная методика пригодна для достижения тех целей, для которых она предназначена [2, С. 222 ].

Валидация аналитической методики позволяет своевременно выявить недостатки методики, улучшить качество, повысить точность результата [3, С. 7].

Целью исследования являлась валидация методики количественного определения хлоргексидина биглюконата в геле для лечения кариеса дентина лаурилсульфатным методом по варианту осадительного титрования. Метод основан на образовании трудно растворимых лаурилсульфатов органических соединений, содержащих основный атом азота и имеющих величину молекулярной массы более 200 [4, С.50].

Методика оценивалась по следующим валидационным характеристикам: аналитическая область применения, линейность, правильность и прецизионность (сходимость) [2, С. 222].

Неорганические соли, входящие в состав геля, не реагируют с титрантом и не влияют на результаты анализа, что было подтверждено экспериментально. При апробации методики параллельно были приготовлены модельные смеси без хлоргексидина биглюконата,  при титровании которых изменение окраски индикатора не происходило. Поэтому метод можно рассматривать как специфичный для хлоргексидина биглюконата.

Валидационные характеристики методики изучали на десяти лабораторных сериях геля, для каждой серии проведено не менее трех определений, для статической обработки взяты средние результаты. Для изучения аналитической области применения, линейности, правильности методики, были приготовлены модельные смеси с содержанием хлоргексидина биглюконата 80%, 90%, 100%, 110%, 120% от количества, заявленного в составе геля.

Методика. 2,0 г геля растворяют в 50 мл воды очищенной, прибавляют 3 мл уксусной кислоты разведенной 30% (раствор должен быть прозрачным), 5 кап. спиртового раствора бромфенолового синего 0,1% и титруют раствором лаурилсульфата натрия (натрия додецилсульфата) 0,005 М до перехода окраски от зеленой через сине-зеленую до светло зеленой.

1 мл 0,005М раствора лаурилсульфата натрия (натрия додецилсульфата) соответствует 0,002243 г хлоргексидина биглюконата.

Содержание хлоргексидина биглюконата (ХГБ) в геле для лечения кариеса дентина рассчитывали по формуле:

Х= ТVКР/а, где

Х – содержание ХГБ в геле, г;

Т – титр 0,005 М лаурилсульфата натрия по ХГБ, г/мл;

Р – масса геля, г;

V – объем титрованного раствора, израсходованного на титрование, мл;

К – коэффициент поправки к молярности титранта;

а – навеска геля, г.

При статистической обработке полученных данных установлено: относительная ошибка среднего результата составляет 0,91%, доверительный интервал  0,100г ±0,001г, стандартное отклонение результата отдельного определения 0,00128г или 1,28%. Полученные данные свидетельствуют об удовлетворительном уровне прецизионности (сходимости) валидируемой методики [5, С. 243].

Результаты анализа модельных смесей подтверждают линейную зависимость расхода титранта  (у) от количества хлоргексидина биглюконата  (х) в образце (рис. 1).

Рис. 1 – График зависимости объема титрованного раствора от количества хлоргексидина биглюконата в геле

При обработке данных было выведено следующее уравнение зависимости:

у  =  8,8975х  +  0,0015

Коэффициент корреляции R = 1, что свидетельствует о линейной связи между переменными х и у.

8,8975 – угловой коэффициент (в);

0,0015 – свободный член (а).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что аналитическая область использования валидируемой методики находится в интервале от 80% до 120% содержания хлоргексидина биглюконата в геле для лечения кариеса дентина (от номинального по составу) [5, С. 254].

Для оценки правильности методики по результатам анализа модельных смесей рассчитан процент регенерации хлоргексидина биглюконата (табл. 1).

 

Таблица 1 –  Оценка правильности методики

Количество хлоргексидина биглюконата			Регенерация, %
От заявленного в геле (по составу), %	В модельной смеси, г	Найдено, г
80	0,080	0,074	93
90	0,090	0,086	96
100	0,100	0,100	100
110	0,110	0,114	104
120	0,120	0,124	103

 

Полученные данные находятся в интервале от 93% до 103%, средний процент регенерации составляет 99,2%, что свидетельствует об удовлетворительной правильности валидируемой методики.

В результате проведенных исследований установлено, что методика определения хлоргексидина биглюконата в геле для лечения кариеса дентина лаурилсульфатным методом имеет удовлетворительную прецизионность (сходимость), аналитическая область применения от 80 до 120%, подтверждена линейная зависимость расхода титранта от количественного содержания хлоргексидина биглюконата, коэффициент корреляции R = 1, средний процент регенерации составляет 99,2%, что свидетельствует об удовлетворительной правильности. Валидируемая методика специфична, позволяет определить количественное содержание  хлоргексидина биглюконата в присутствии сопутствующих компонентов, и может быть использована при постадийном контроле в процессе производства и контроле качества конечного продукта. Предлагаемая методика может быть рекомендована для включения в нормативную документацию.

Список литературы / References

1. Леонова Л.Е. Эффективность лечения кариеса дентина с использованием лекарственных средств реминерализующего действия / Л.Е. Леонова, Г.А. Павлова, Р.Г. Першина и др. // Пермский медицинский журнал.  – 2016. – №2. – Т.33. – С.71-75.
2. ОФС 1.1.0012.15 Валидация аналитических методик. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. – Т. I, – М., –2015. – С.222 - 234. (Федеральная электронная медицинская библиотека) [Электронный ресурс].  – URL: http://www.femb.ru/feml (дата обращения: 14.03.2017).
3. Юргель Н.В. Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств: Методические рекомендации / Н.В. Юргель.  – М.:  Издательство «Спорт и Культура – 2000», 2007.  – 48 с.
4. Чекрышкина Л.А. Анализ растворов хлоргексидина биглюконата в условиях аптеки  / Л.А. Чекрышкина, Н.И. Эвич, Е.С. Березина и др. // Новая аптека. Эффективное управление. –   – №3. – C. 49-51.
5. ОФС.1.1.0013.15 Статистическая обработка результатов химического эксперимента.  Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. – Т. I, – М., – 2015.  – С.235 - 264. (Федеральная электронная медицинская библиотека) [Электронный ресурс].  – URL: http://www.femb.ru/feml (дата обращения: 14.03.2017).

Список литературы на английском языке / References in English

1. Leonova L.E. Effektivnost lecheniya kariesa dentina s ispolzovaniem lekarstvennykh sredstv remineraliziruyeschego deystviya [Efficiency of dentine Caries Treatment with the Help of Remineralizing Drugs] / L.E. Leonova, G.A. Pavlova, R.G. Pershina, etc. // Permskiy meditsinskiy zhurnal [Perm Medical Journal] - 2016. - No.2. - Т.33. - P.71-75. [In Russian]
2. OFS 1.1.0012.15 Validatsiya analiticheskikh metodik. Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii [General Monograph 1.1.0012.15 Validation of Analytical Techniques. State Pharmacopoeia of the Russian Federation] XIII ed. - V. I, - M., -2015. - P.222 - 234. (Federal electronic medical library) [Electronic resource]. - URL: http://www.femb.ru/feml (accessed date: 14.03.2017). [In Russian]
3. Yurgel N.V. Rukovodstvo po validatsii metodik analiza lekarstvennykh sredstv: Metodicheskiye rekomendatsii [Guidance on the Validation of Drug Analysis Techniques: Methodological Recommendations] / N.V. Yurgel. - M.: Publishing House “Sport and Culture - 2000,” 2007. - 48 p. [In Russian]
4. Chekryshkina L.A. Analiz rastvorov khlorgeksidina bigliukononata v usloviyakh apteki [Analysis of Chlorhexidine Bigluconate Solutions in the Condition sof a Pharmacy] / L.A. Chekryshkina, N.I. Evich, E.S. Berezina and others // Novava apteka. Effektivnoye upravleniye [New pharmacy. Effective management] - 2009. - No.3. - P. 49-51. [In Russian]
5. 1.1.0013.15 Statisticheskaya obrabotka rezultatov khimicheskogo eksperimenta. Gosudarstvennaya farmakepeya Rossipeyskoy Federatsii [General Monograph.1.1.0013.15 Statistical Processing of the Results of a Chemical Experiment. State Pharmacopoeia of the Russian Federation] XIII ed. - V. I, - М., - 2015. - P.235 - 264. (Federal electronic medical library) [Electronic resource]. - URL: http://www.femb.ru/feml (accessed date: 14.03.2017). [In Russian]