МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПОЧЕК ПОСЛЕ ДЛИТЕЛЬНОГО ПРИЕМА НПВС И НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ЦИАНОТИОАЦЕТАМИДА

Проблема рациональной и эффективной фармакокоррекции болевого синдрома крайне актуальна, учитывая число и распространенность в стоматологической, онкологической, травматологической, камбустиологической, анестезиологической, хирургической, ревматологической, неврологической практике заболеваний, сопровождающихся болью

Фармакологические средства из групп неопиодных и опиодных анальгетиков, а также анксиолитиков и антидепрессантов характеризуются весьма низким коэффициентом «польза/вред». Практически весь спектр применяемых в настоящее время препаратов с анальгетической и противовоспалительной активностью с доказанной эффективностью характеризуется массой значимых для состояния здоровья пациента и назначений доктора неблагоприятных эффектов. Наличие разнообразных противопоказаний и лекарственных взаимодействий осложняет практическое использование этих средств. Все перечисленное указывает на своевременность изыскания высокоэффективных и безопасных лекарственных средств с высокой болеутоляющей активностью.

Медикаментозные поражения печени, почек, желудка, влияние лекарственных средств на систему крови, нервную и сердечно-сосудистую системы на протяжении последних десятилетий представляют одну из важнейших медико-социальных проблем в мире. Эту проблему подчеркивает полипрагмазия. Наиболее назначаемые нестероидные противовоспалительные средства – нимесулид, кеторолак, диклофенак, ибупрофен, индометацин отличаются разнообразным широким спектром показаний при наличии способности к ульцерогенности, гепатотоксичности, нефротоксичности, гематотоксичности, нейротоксичности и кардиотоксичности.

Морфологическая составляющая при изучении нефротоксического действия НПВС изучена не в должной степени. Лишь отдельные работы последних десятилетий проливают свет на структурно-функциональные нарушения в паренхиме почки, лежащие в основе нефротоксического воздействия отдельных представителей этой группы лекарственных средств. И не важен при этом путь поступления препарата, так как энтерально и парентерально вводимые противовоспалительные средства одинаково неблагоприятно воздействуют на почки в силу того, что почки являются основным экскреторным органом.

Новые гетероциклические биологически активные вещества из ряда производных альфа-цианотиоацетамида в настоящее время подлежат интенсивной разработке ученых-фармакологов

Изучение болеутоляющей активности в тесте орофациальной тригеминальной боли позволило ранее установить, что вещества с лабораторными кодами d02-141 и d02-154 на раннем сроке исследования почти в 2 раза были эффективнее по болеутоляющей активности анальгина. При использовании производных цианотиоацетамида с кодами d02-123 и d02-149 установлены у них болеутоляющие свойства, превосходящие таковые у анальгина в 3,5 и 3,2 раз на 10-й и 15-й минутах исследования в этом фармакологическом тесте. Высокую анальгетическую активность показали в ранее проведенных исследованиях новые гетероциклические соединения под кодами d02-122, d02-139 и d02-172 как в тесте орофациальной тригеминальной боли, так и в тестах горячей пластины и тепловой иммерсии хвоста. Комплексная оценка токсичности новых фармакологически активных веществ является необходимым этапом их доклинических исследований. Ранее проведенные исследования острой пероральной токсичности показали перспективность производных цианотиоацетамида для дальнейшей их разработки

Важнейшим этапом доклинических испытаний новых биологически активных соединений является комплексная оценка их органотоксичности в хронических экспериментах. Для детального изучения их вероятного неблагоприятного воздействия на почки целесообразным является сравнительная оценка влияния часто применяемых в медицине противовоспалительных средств и производных цианотиоацетамида с выраженной анальгетической и противовоспалительной активностью на морфофунциональное состояние этих органов выделительной системы. 

На базе НИЛ «ХимЭкс» ФГБОУ ВО «Луганский государственный университет им. Владимира Даля» были синтезированные 5 новых производных α-цианотиацетамида для дальнейшего исследования их анальгетической активности. В научно-исследовательской лаборатории на территории ФГБОУ ВО «Луганский государственный медицинский университет имени Святителя Луки» МЗ РФ был смоделирован научный эксперимент на 40 белых беспородных крысах-самцах с весом 220-250г. Особи были взяты из вивария нашего университета, в осенне-весенний период находились на кафедре фундаментальной и клинической фармакологии. Животные были разделены по 8 крыс на 5 групп, одна из которых являлась интактной, 2 группы сравнения и 2 – опытных. Крысы первой группы сравнения получали парацетамол в дозе 50 мг/кг, второй – нимесулид в дозе 5 мг/кг. Препараты вводились один раз в сутки в течение 14 дней через внутригастральный зонд. Оставшимся двум экспериментальным группам внутрижелудочно вводили новые производные цианотиоацетамида с явной анальгетической активностью в виде водной взвеси в дозе 5 мг/кг один раз в сутки на протяжении 14 дней. Забой осуществляли на 15 день. Эксперимент произведен с учетом данных руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств

Структура и химическое строение производных α-цианотиоацетамида представлены на рис.1.

Рисунок 1 - Структура и химическое строение производных α-цианотиоацетамида

Примечание: химические формулы исследуемых производных цианотиоацетамида

DOI:10.60797/IRJ.2025.153.51.1

Почки экспериментальных животных являлись материалом для гистологического исследования. Эти органы выделительной системы разрезали вдоль в плоскости от наружного края до ворот и после фиксации в формалине стандартным способом материал заливали в парафин с последующей окраской срезов толщиной 7 мкм гематоксилином и эозином. Микроскопическое исследование выполнено под микроскопом «Ломо» с видеокамерой «DV1000». С помощью программы «McrAView 7.3.1.7» (ЛОМО-микросистемы, Россия) получали цифровые микрофотографии одинаковой площади, на которых производили общую и сравнительную оценки степени и распространенности структурных изменений при увеличениях микроскопа от х40 до х400. У каждого животного для анализа получали изображения 10 репрезентативных полей зрения с обязательным наличием почечного тельца и окружающих канальцев.

При макроскопическом исследовании почки животных интактной группы бобовидной формы, их поверхность гладкая. На разрезе четко дифференцируются корковое и мозговое вещество. Микроскопическая картина почечной паренхимы и стромально-сосудистых структур у интактных животных была типичной. При обзорном увеличении х40 в площади полей зрения коркового вещества располагалось 5-6 почечных телец (рис. 2).

Большая часть площади срезов занята срезами извитых канальцев.

Почечные тельца состоят из четко контурированных капиллярных петель со слабым кровенаполнением, окруженных свободными и имеющими ровные контуры просветами капсул. Канальцы с неправильно округлыми, но четкими контурами просветов, чаще оптически пустых, в немногочисленных с мелкозернистыми или хлопьевидными частицами. Отдельные межканальцевые мелкие венозные сосуды умеренно полнокровные. Нефроциты канальцев низкие призматические, с однородной преимущественно амфофильной цитоплазмой, четко контурированными базально расположенными ядрами с 1-2 ядрышками и равномерно распределенным мелкозернистым хроматином (рис 3).

Рисунок 2 - Корковое вещество почек интактных животных

Примечание: равномерно расположенные почечные тельца нормального строения и расположенные между ними извитые канальцы; окраска гематоксилином и эозином; микрофото; ув. Х40

DOI:10.60797/IRJ.2025.153.51.2

Рисунок 3 - Детали микроструктуры почечной паренхимы в группе интактных животных (поля зрения от разных животных): 

а, в, г – почечные тельца с четкими контурами капиллярных петель сосудистых клубочков со слабым кровенаполнением, свободными просветами хорошо контурированных капсул; б – срезы проксимальных извитых канальцев с интактной структурой эпителия, умеренное полнокровие межканальцевой венулы

Примечание: окраска гематоксилином и эозином; микрофото; ув. Х 400

DOI:10.60797/IRJ.2025.153.51.3

На срезах почек крыс группы сравнения, получавших 2 недели нестероидное противовоспалительное средство нимесулид (рис. 4), выявлены изменения только канальцевого эпителия, имевшие очаговый характер. Они проявлялись фрагментацией апикальных участков нефроцитов – области щеточной каемки, с образованием мелкозернистых частиц, скапливающихся в просветах проксимальных извитых канальцев. Структуры почечных телец и мозгового вещества изменений не претерпевали.

Рисунок 4 - Гистоструктура почек у разных животных опытной группы, получавших нимесулид: 

а, в – структура почечных телец без отличий от нормального строения у интактных животных, среди канальцев преобладают имеющие неизмененный эпителий; б – очагово измененный канальцевый эпителий в виде десквамации апикальных участков нефроцитов со скоплением в просветах канальцев зернистых частиц (стрелка)

Примечание: окраска гематоксилином и эозином; микрофото; ув. Х 400

DOI:10.60797/IRJ.2025.153.51.4

На срезах почек крыс, получавших парацетамол согласно дизайна эксперимента, выявлен сходный с предыдущей серией характер изменений (рис. 5). При отсутствии каких-либо повреждений почечных телец очагово распространены заметные изменения канальцевого эпителия в виде набухания апикальных частей нефроцитов, принимавших «апокринизированный» вид, фрагментации области щеточной каймы и накоплением образовавшихся мелкозернистых частиц в просветах канальцев. Высота нефроцитов вследствие данных изменений апикальных отделов уменьшена. 

Рисунок 5 - Гистоструктура почек животных группы сравнения, получавших парацетамол:

а, б – неизмененные почечные тельца с умеренным кровенаполнением капиллярных петель; в, г – апикальные части нефроцитов с фрагментацией и отторжением в просвет канальцев, у части клеток (стрелка на рис. г) апикальная часть набухшая – «апокринизированного» вида, высота нефроцитов очагово уменьшена

Примечание: окраска гематоксилином и эозином; микрофото; ув. Х 400

DOI:10.60797/IRJ.2025.153.51.5

На гистологических срезах почек экспериментальных животных опытной группы, после двухнедельного введения производного 1,4-дигидропиридина под кодом d02-123 при отсутствии повреждений почечных телец выявлены незначительные канальцевые изменения (рис. 6). Большая часть их изменена миниально в виде описанных выше цитоплазматических и апикальных изменений нефроцитов: матовость цитоплазмы и нечеткость апикальных контуров нефроцитов.

Рисунок 6 - Гистоструктура почек разных животных в опытной группе, получавших образец d02-123: 

а – обзорная картина коркового вещества с отсутствием изменений почечных телец, отсутствием значимых канальцевых повреждений; б, в – детали микроскопической картины: почечные тельца без изменений, канальцы преимущественно с незначительными изменениями цитоплазмы и апикальных поверхностей, только единичные (стрелка на рис. а) с гидропически измененной цитоплазмой

Примечание: окраска гематоксилином и эозином; микрофото; ув. Х 400

DOI:10.60797/IRJ.2025.153.51.6

В почках крыс, получавших соединение под кодом d02-133, выявлены в целом сходные микроскопические картины. Общим для них явилось следующее. Не обнаружено повреждений структур. Имевшиеся же минимальные паренхиматозные изменения затрагивали только канальцы – преимущественно проксимальные извитые.

Анализируя особенности структурной организации почек крыс, получавших 2 недели нестероидное противовоспалительное средство нимесулид, установлены изменения только канальцевого эпителия, имевшие очаговый характер. Они проявлялись фрагментацией апикальных участков нефроцитов. Влияние парацетамола на протяжении двух недель привело к появлению на гистологических срезах почек очагово распространенных заметных изменений канальцевого эпителия в виде набухания апикальных частей нефроцитов, принимавших «апокринизированный» вид, фрагментации области щеточной каймы и накоплением образовавшихся мелкозернистых частиц в просветах канальцев.

Изучаемые в доклинических исследованиях два новых деривата альфа-цианотиоацетамида под кодами d02-123 и d02-133 с высокой анальгетической активностью и противовоспалительными свойствами в опытах по определению степени их хронической органотоксичности (ежедневное внутригастральное введение в дозе 5 мг/кг на протяжении 14 суток), не обнаружили способности провоцировать возникновение грубых структурных изменений почечной паренхимы. Установлено отсутствие повреждений почечных телец при незначительных канальцевых изменениях.

Наиболее перспективным для дальнейших доклинических исследований следует считать новое производное цианотиацетамида с лабораторным кодом d02-123(5-cyano-N-(2,4-dichlorophenyl)-4-(2-furyl)-2-methyl-6-[(2-oxo-2-{[3-(trifluoromethyl)phenyl]amino}ethyl)thio]-1,4-dihydropyridine-3-carboxamide), с последующей оценкой морфометрических и стереометрических показатели почечной паренхимы крыс.