ВОЗРАСТНАЯ ИНВОЛЮЦИЯ СОСУДИСТОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА
ВОЗРАСТНАЯ ИНВОЛЮЦИЯ СОСУДИСТОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ РТА
Аннотация
Адентия является серьезной проблемой старших групп населения во всем мире. Не изученной является роль слизистой оболочки в трофическом обеспечении и сохранности зубных рядов при старении организма. Изучение вопросов адекватности кровоснабжения и индукторов ангиогенеза в возрастном аспекте требует глубоких исследований. Методом иммуногистохимии на материале человека изучены вопросы экспрессии VEGF и CD34 в динамике возрастных изменений слизистой оболочки рта. Установлено, что VEGFa и CD34 позитивные клетки в зоне протезного ложа десны являются информативными показателями состояния слизистой оболочки рта, отражающими возрастные изменения. Анализ полученных результатов показал, что пациенты различных возрастных групп нуждаются в подготовительном к протезированию этапу в оценке VEGFa и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны.
1. Введение
Количество людей, страдающих адентией, как врожденной, так и приобретенной, локальной или генерализованной, на фоне возрастных и патологических изменений слизистой оболочки рта (СОР) является серьёзной проблемой для всех возрастных групп населения как в мировом масштабе, так и для России в частности , , . Известно, что слизистая оболочка полости рта имеет важное значение в трофическом обеспечении структур зуба, поэтому её состояние оказывает значительное влияние на состояние зубных рядов и тканей, окружающих зубы , , . На современном этапе причины успешной имплантации зубов находятся в формате эмпирических анализов данных без системного алгоритма изучения всех факторов, способствующих физиологической регенерации слизистой оболочки рта в возрастном аспекте и особенно в старших возрастных группах, наиболее язвимых в связи со снижением многих жизненных функций со стороны эндокринной, сердечно-сосудистой, мочевыделительной и других систем. Исследования показали, что местные бактерии прикрепляются к поверхностям слизистой оболочки рта и зубам очень избирательно в рамках резких тропизмов к скрытым рецепторам для бактериальных адгезинов «криптитопов». Оральный эпителиальный барьер состоит из тщательно контролируемой структуры многослойного плоского эпителия, который является воротами в организм человека и сталкивается с огромным бременем микробных, воздушных и пищевых антигенов, а также жевательных повреждений. Как только этот барьер будет разрушен, это вызовет потерю костной массы, повреждение тканей и микробный дисбактериоз и приведет к таким заболеваниям, как пародонтит, заболевания слизистой оболочки полости рта и рак полости рта , , , . Практически отсутствуют данные об инволюции структур слизистой оболочки, которая является одной из главнейших составляющих элементов пародонта , . Требуют глубоких исследований вопросы возрастных изменений слизистой оболочки рта, играющей важную роль в противодействии адгезивным механизмам прикрепления к зубам бактерий, находящихся во взвешенном состоянии в слюне и распознающих криптические сегменты с экспонированием только в адсорбированных молекулах. Несмотря на многочисленные разработки методов имплантации зубов, практически не рассмотрена роль слизистой оболочки в успешности и эффективности лечебных мероприятий при адентии.
Цель исследования: выполнить сравнительный анализ распределения VEGF и CD34 позитивных клеток в структурах СОПР человека в возрастном аспекте.
2. Методы и принципы исследования
Предметом исследования являлись пациенты, нуждающиеся в протезировании зубов после травм и адентии неинфекционной этиологии, с различной локализацией. С помощью иммуногистохимии изучены фенотипы и гистофизиологические характеристики системы клеточных взаимодействий VEGF165a и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны.
Объектом изучения были 184 человека, из которых 19 человек вошли в группу контроля (ГК), а 165 (73 мужчин и 92 женщины), в возрасте от 20 до 85 лет, у которых имели место дефекты зубных рядов, составили группу наблюдения. Предмет исследования – биоптаты слизистой оболочки десны в зоне протезного ложа пациентов с адентией, нуждающихся в протезировании зубов; метод: иммуногистохимическое фенотипирование на основе выявления экспрессии VEGFa и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны.
Иммуноокрашивание кератиноцитов из СОПР оценивалось количественно путем оценки процента окрашенных клеток. Микрофотографии были сделаны цифровой камерой в световом микроскопе (Olympus BX41, Япония) с программным обеспечением Micrometrics SE Premium 4.4. Все изображения были сохранены в формате JPGE. Клетки подсчитывались с использованием пакета программного обеспечения ImageJ. Иммуномаркировка VEGF и CD34 оценивалась для цитоплазматического окрашивания. Положительно окрашенные клетки подсчитывались в пяти случайно выбранных полях при увеличении ×400. Было рассчитано общее количество положительных клеток на 100 полях зрения. Иммуногистохимическая экспрессия микрососудистой плотности (MVD) была оценена через экспрессию VEGF и CD34. MDV была количественно определена путем подсчета внутрислизистых микрососудов, положительных на CD34, по пяти HPF к общей площади, эквивалентной увеличению 200× (0,7386 мм2).
Данное исследование было проведено в соответствии с основополагающими этическими принципами Хельсинкской Декларации, Правилами GCP (Good Clinical Practice, Надлежащая Клиническая Практика) и одобрено Междисциплинарным комитетом по этике ФГАОУ ВО ДВФУ Министерства образования и науки Российской Федерации (протокол №7).
3. Результаты исследования и их обсуждение
Рисунок 1 - Слизистая оболочка пациентов в старших возрастных группах:
а - 56 лет; б - 67 лет; в - 75 лет; г - эпителий СОПР пациента 79 лет, неравномерная кератинизация
Примечание: окраска гематоксилином и эозином; микрофото; увеличение а, б - х100; в, г - х400
Рисунок 2 - Иммуногистохимия на выявление локализации VEGF позитивных клеток
Примечание: микрофото; увеличение х200
Полученные результаты по выявлению VEGF позитивных клеток, выявленных в базальном и шиповатом слоях эпителия слизистой оболочки рта дополняют новые данные об открытии ранее неизвестных свойств VEGF как важного индуктора морфогенеза в зонах, ранее известных, как не оказывающих ангиогенных эффектов. Среднее значение экспрессии VEGF составило 15,5 в нормальной слизистой оболочке, без существенных различий между старшими возрастными группами.
Рисунок 3 - СОПР человека:
а - 45; б - 51; в - 60; г - 61 года
Примечание: CD34 в СОПР; иммуногистохимия на выявление локализации белка гена CD34; микрофото; ув. х200
В субэндотелиальном слое выявляются крупные хромофобные клетки с неокрашенной цитоплазмой и ядрами овальной формы. Форма клеток вытянутая, близкая к веретеновидной, и соответствует спиральному расположению гладкомышечных клеток. Встречаются исключительно в средней оболочке не во всех сосудах, а только в артериях (а, б, в) и венах (г) у пациентов с адентией.
Полученные нами данные согласуются с данными Irsaliev KhI. (1993) изучавшего морфофункциональные особенности кровоснабжения слизистой оболочки щеки и показавшего с помощью методов реографии, полярографии, световой и электронной трансмиссионной микроскопии и стереоморфометрии у пациентов с частичной адентией и после протезирования изменение функциональных параметров кровообращения в СОПР. Морфологически это проявлялось стазом микрососудов, сладжированием эритроцитов, отеком стромы и полиморфно-ядерной инфильтрацией. Ультраструктура эндотелия и других компонентов микрососудов указывала на нарушение проницаемости сосудов на фоне адентии в СОПР пациентов старших возрастных групп . Выявление VEGF и CD34 является более информативным методом для оценки состояния кровообращения в СОПР пациентов старших возрастных групп и наиболее ярко отражает снижение трофического обеспечение эпителиального барьера.
4. Заключение
Определение уровня активности и расположения ангиогенных факторов путем применения маркеров для выявления локализации CD34 и VEGF может быть полезным ключевым критерием для дифференциации нормальной слизистой оболочки рта от патологически изменяющейся, включая раковые и предраковые поражения. Экспрессирующие VEGFa и CD34, клетки могут быть использованы в диагностике нарушений в системе клеточных взаимодействий в структуре СОР в возрастном аспекте. Параметры VEGFa и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны СОР имеют возрастные особенности в сравнении с группой контроля. VEGFa и CD34 позитивные клетки в зоне протезного ложа десны являются информативными показателями состояния слизистой оболочки рта, прогнозирующими реакцию на лечение. Пациенты различных возрастных групп нуждаются в подготовительный к протезированию этап в оценке VEGFa и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны. Увеличение количества VEGFa и CD34 позитивных клеток в зоне протезного ложа десны является информативным морфологическим критерием прогнозирования риска патологических процессов в старших возрастных группах.