ИММОБИЛИЗАЦИЯ КЛЕТОК ПРОБИОТИЧЕСКИХ МИКРООРГАНИЗМОВ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ

ИММОБИЛИЗАЦИЯ КЛЕТОК ПРОБИОТИЧЕСКИХ МИКРООРГАНИЗМОВ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ

Обзорная статья

Жантлесова C.Д.*

ORCID: 0000-0001-6604-8056,

Казахский национальный университет имени аль-Фараби, Алматы, Казахстан

* Корреспондирующий автор (sirina.zhantlessova[at]mail.ru)

Аннотация

Пробиотические продукты — это группа функциональных продуктов с растущей долей рынка и большим коммерческим интересом. Использование технологии иммобилизации способствует повышению жизнеспособности пробиотических клеток в пищевых продуктах, так и во время их прохождения через желудочно-кишечный тракт. В обзоре проанализированы критерии использования пробиотических микроорганизмов. Описываются преимущества и способы технологии иммобилизации в пищевой промышленности, направленные на повышение жизнеспособности клеток. Были рассмотрены различные природные материалы для иммобилизации клеток. Приведены примеры использования технологии иммобилизации пробиотических микроорганизмов в создании функциональных пищевых продуктов.

Ключевые слова: пробиотики, функциональные продукты, иммобилизация, альгинаты, пектин.

IMMOBILIZATION OF PROBIOTICS FOR FUNCTIONAL FOOD DEVELOPMENT

Review article

Zhantlesova S.D.*

ORCID: 0000-0001-6604-8056,

Al-Farabi Kazakh National University, Almaty, Kazakhstan

* Corresponding author (sirina.zhantlessova[at]mail.ru)

Abstract

Probiotic products are a group of functional food with a growing market share and significant commercial interest. The use of immobilization technology helps to increase the viability of probiotic cells both in food products and during their passage through the gastrointestinal tract. The current study analyzes the criteria for the use of probiotic microorganisms and describes the advantages and methods of immobilization technology in the food industry aimed at increasing cell viability. The author of the study examines different natural materials for the immobilization of cells as well as provides examples of using the technology of immobilization of probiotic microorganisms in the creation of functional food.

Keywords: probiotics, functional food, immobilization, alginates, pectin.

Применение и разработка функциональных продуктов питания в настоящее время представляют большой интерес. В последнее время тенденция использования полезных для здоровья бактерий, называемых пробиотиками, в пищевой промышленности постоянно растет из-за их благотворного воздействия на иммунную систему и в целом на здоровье человека. Согласно формулировке ФАО/ВОЗ, «пробиотики — это живые микроорганизмы, которые при введении в адекватных количествах вызывают улучшение здоровья организма-хозяина» [1]. Продукты питания, содержащие такие бактерии, относятся к категории функциональных продуктов питания. Они могут считаться функциональными, если доказано, что они благотворно влияют на одну или несколько физиологических функций в организме [2].

На сегодняшний день на рынке доступно большое количество пробиотических пищевых продуктов. Потребление пробиотиков через функциональные пищевые продукты, такие как йогурт, творог и т. д., как правило, более предпочтительно и популярно среди потребителей чем в таких формах как таблетки, капсулы и др. [3].

В качестве пробиотиков наиболее часто используются бактерии, относящиеся к родам лактобацилл и бифидобактерий, являющиеся важными представителями нормальной микрофлоры человека [4], [5].

В процессе отбора подходящего пробиотика следует учитывать несколько аспектов [6]:

1 Безопасный штамм, вид и род пробиотиков;

2 Жизнеспособность и биологическая активность во время процесса и хранения;

3 Способность к выживанию в кишечнике и устойчивость к действию желчи и желудочного сока;

4 Стимулирование ростовых свойств полезных бактерий и угнетение роста вредных микроорганизмов (посредством производства противомикробных соединений и конкурентного уничтожения);

5 Антагонистическая активность в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов;

6 Способность к адгезии слизистой кишечника;

7 Антимутагенные и антиканцерогенные свойства;

8 Иммуностимулирующие действие.

Для получения терапевтического эффекта, пробиотические штаммы должны оставаться жизнеспособными в течение всего срока годности продукта до момента употребления и поддерживать высокую жизнеспособность в процессе их транзита через верхние отделы желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) вплоть до толстой кишки [7].

Пробиотические продукты должны содержать достаточное количество живых клеток (не менее 10⁶-10⁷ КОЕ/г) [8], [9], [10]. Введение такого большого количества клеток связано с негативным воздействием вредных факторов различного происхождения. Основными факторами, которые оказывают негативное влияние, являются [7]: условия обработки (температура, окисление и др.), условия хранения (упаковочные материалы и окружающая среда: влажность, кислород, температура и т. д.), деградация в желудочно-кишечном тракте (низкий pH в желудке и желчные соли в тонком кишечнике).

Однако выживаемость пробиотиков при хранении и прохождении через желудочно-кишечную систему обычно низкая [7]. Одним из возможных решений этой проблемы является иммобилизация или инкапсулирование бактериальных клеток [11].

Технология иммобилизации клеток позволяет увеличить стабильность клеток и снизить летальное воздействие на клетки микроорганизмов, улучшить органолептические показатели и клинический результат по сравнению со свободными клетками. Методы иммобилизации обеспечивают увеличение жизнеспособности пробиотиков как в продуктах питания, так и во время их прохождения через желудочно-кишечный тракт.

К наиболее распространённым методам иммобилизации клеток можно отнести: связывание на твердом носителе, включение в пространственную структуру носителя и иммобилизация с использованием мембранной технологии [12].

Все больший интерес проявляется к иммобилизации с использованием мембранной технологии, а именно к технологии микрокапсулирования, так как получение микрокапсулированных форм пробиотиков является многообещающей перспективой внедрения жизнеспособных пробиотических бактерий в продукты питания [13]. Микрокапсулирование — это процесс формирования непрерывной оболочки вокруг внутренней матрицы, которая полностью содержится в стенке капсулы [14].

Использование сочетания методов адсорбционной и пространственной иммобилизации создают оптимальные условия для живых клеток. Адсорбционная и пространственная иммобилизация — это наиболее мягкий и преимущественный для живых клеток способ фиксации [12]. Включение живых клеток в гели биополимеров происходит в мягких условиях иммобилизации. Клетки включают в носитель, обладающий развитой системой открытых пор с достаточными условиями для газообмена.

Существуют большое количество носителей для иммобилизации, но лишь некоторые считаются пригодными в использовании для производства продуктов питания. В производстве функциональных пищевых продуктов наиболее всего применяют природные полисахариды для иммобилизации клеток микроорганизмов [15]. К полисахаридам, которые используются как пищевые покрытия, относятся: крахмал, производные целлюлозы, хитозан, альгинат, пектин, каррагинан, пуллулан, геллановая камедь, ксантановая камедь и др. [16], [17]. Такие покрытия служат хорошими кислородными, ароматическими и масляными барьерами, также обладают хорошими механическими свойствами [18].

Материалом, наиболее часто используемым для иммобилизации бактериальных клеток, является природный полисахарид альгинат натрия, главным образом из-за его безопасности, хороших гелеобразующих свойств и биосовместимости [19], [20].

Альгинаты, которые являются природными анионными полисахаридами, состоящими из остатков D-маннуроновой и L-гулуроновой кислот, линейно соединенных (1-4) гликозидными связями, считаются безопасными для употребления в пище [21], [22]. С физиологической точки зрения, главное преимущество альгината заключается в том, что иммобилизованные клетки не претерпевают резких изменений физико-химического состояния во время процедуры иммобилизации, а гель является прозрачным и проницаемым [23].

Альгинат использовался для приготовления многослойных шариков гидрогеля, защищающих пробиотические бактерии Bifidobacterium breve в условиях низкого pH желудочного сока [24]. Клетки пробиотиков инкапсулировали в сферические шарики из альгината кальция, используя эмульсионный метод. Полученные шарики с инкапсулированными пробиотическими клетками, а также свободные клетки подвергали воздействию сред с различными значениями pH, которые имитируют условия желудочного сока и кишечной жидкости. Жизнеспособность клеток B. breve, инкапсулированных в гранулы альгината кальция, по сравнению с жизнеспособностью свободных клеток была значительно выше.

Tapia и соавторы предложили съедобные фрукты (яблоки и папайя) на основе альгината и геллана [25]. Благодаря защите клеток L. acidophilus и B. lactis покрытием альгината и геллана, выживаемость клеток была значительно улучшена.

Пектин – природный анионный полисахарид, который применяется для иммобилизации клеток пробиотических микроорганизмов, представляющий собой систему c большими размерами пор [26]. Пектиновые гели, обладают хорошими диффузионными свойствами и способны образовывать структуры с оптимальным размером пор [27].

В исследовании Коркач А.В. и др., бифидобактерии Bifidobacterium bifidum были включены в гель биополимера пектина, в результате чего клетки бактерий заключались в полимерную сетку, сшитого химическими и физическими связями полимера [15]. Клетки, иммобилизованные в гели биополимера пектина, характеризовались большой стабильностью в агрессивной среде желудка и двенадцатиперстной кишки, по сравнению со свободными клетками. Как следует из результатов эксперимента, их выживаемость в ЖКТ составила 57-78 %.

В таблице 1 приведены примеры использования технологии иммобилизации клеток в разработке пробиотических продуктов питания.

 

Таблица 1 – Применение иммобилизации пробиотических микроорганизмов в создании функциональных пищевых продуктов

Носитель для иммобилизации	Микроорганизм	Пробиотический пищевой продукт	Источник
Альгинат, желатин	Bifidobacterium animalis subsp. lactis DSM 10140	Яблоко	[28]
Альгинат	Lactobacillus paracasei ssp. paracasei LBC-1 (LBC-1e)	Сыр	[29]
Ксантан-хитозан	Lactobacillus acidophilus	Йогурт	[30]
Альгинат натрия	Bifidobacterium bifidum F‐35	Йогурт	[31]
Альгинатные шарики, покрытые двухслойным хитозаном	Lactobacillus plantarum	Гранатовый сок	[32]
Альгинат и геллан	L.acidophilus и B. lactis	Яблоки и папайя	[25]
Сыворочный белок/альгинат	Lactobacillus rhamnosus GG	Гранатовый и клюквенный сок	[33]

 

Использование пробиотиков в пищевых продуктах в промышленных масштабах включает в себя ряд микробиологических, технологических и экономических проблем. Необходимы дальнейшие исследования по разработке соответствующих технологий, матриц-носителей и подбору бактериальных штаммов, способствующих выживанию бактериальных клеток в различных условиях обработки (при тепловом, осмотическом и кислородном стрессах), а также при их прохождении через верхние отделы желудочно-кишечного тракта.

Различные технологии иммобилизации еще не полностью освоены и требуют дополнительной экспериментальной работы для успешного внедрения в пищевые матрицы. Исследовательские усилия должны быть направлены на улучшение свойств биокомпозитов, расширение имеющихся в настоящее время методов и преодоление технологических проблем производства новых функциональных пищевых продуктов.

Конфликт интересов Не указан.

Conflict of Interest None declared.

 

Список литературы / References

1. FAO/WHO. Working group on drafting guidelines for the evaluation of probiotics in food. Guidelines for the evaluation of probiotics in food. 2002.
2. Isolauri E. Functional foods and probiotics: Working Group Report of the First World Congress of Pediatric Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition / E. Isolauri, H. Ribeiro, G. Gibson et al. // J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2002;35:S106–S109.
3. Roy P. Functional Food: Probiotic as Health Booster / P. Roy, V. Kumar // J Food Nutr Popul Health, Vol.2, No.2:12.
4. Etchepare M.A. Microencapsulation of probiotics using sodium alginate / M.A. Etchepare, J.S. Barin, A.J. Cichoski et al., // Ciência Rural, vol. 45, no. 7, pp. 1319–1326, 2015.
5. Khosravi Zanjani Microencapsulation of Probiotics by Calcium Alginate-gelatinized Starch with Chitosan Coating and Evaluation of Survival in Simulated Human Gastro-intestinal Condition / Khosravi Zanjani, Mohammad Ali et al.// Iranian journal of pharmaceutical research : IJPR 13,3 (2014): 843-52.
6. Saarela M. Probiotic bacteria: safety, functional and technological properties / M. Saarela, G. Mogensen, R. Fonden et al. // J Biotechnol 2000; 84: 197-
7. Chávarri, M. Encapsulation technology to protect probiotic bacteria / Chávarri, M., Marañon, I., Villarán, C. // In: Rigobelo, E. (Ed.), Probiotics. InTech, pp. 501-540.
8. Boylston T.D. Incorporation of Bifidobacteria into Cheeses: Challenges and Rewards / T.D. Boylston, C.G. Vinderola, H.B. Ghoddusi et al. // International Dairy Journal, Vol. 14, No. 5, 2004, pp. 375-387.
9. Krasaekoopt W. Evaluation of encapsulation techniques of probiotics for yoghurt / W. Krasaekoopt, B. Bhandari, and H. Deeth // Int. Dairy J.13, 3–13.
10. Marinova V. Microbiological quality of probiotic dietary supplements / Marinova, I. Rasheva, Y. Kizheva et al.// Biotechnology & Biotechnological Equipment,33:1, 834-841.
11. Corona-Hernandez R.I. Structural stability and viability of microencapsulated probiotic bacteria: a review / R.I. Corona-Hernandez, E. Álvarez-Parrilla, J. Lizardi-Mendoza, et al. // Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, vol. 12, no. 6, pp. 614–628, 2013.
12. Корочинский А.В. Исследование возможности создания иммобилизованных структур на базе пробиотиков / А.В. Корочинский, В.В. Верниковский, Э.Ф. Степанова // Успехи современного естествознания. – 2010. – № 5. – С. 34-38.
13. Chavarri M. Microencapsulation of a probiotic and prebiotic in alginate-chitosan capsules improves survival in simulated gastro-intestinal conditions / M. Chavarri, I. Marañón, R. Ares et al., // International journal of food microbiology. 142. 185-9.
14. Vidhyalakshmi R. Encapsulation “The future of probiotics”: A review / Vidhyalakshmi R., Bhakyaraj R., Subhasree R.S. // Adv. Biol. Res. 2009, 39, 96–103.
15. Коркач А. В.Обоснование метода иммобилизации микроорганизмов и их применение в технологии кондитерских изделий / А. В. Коркач, Г. В. Крусир, А. В. Егорова // Харчова наука і технологія. - 2013. - № 1. - С. 35-38.
16. Danijela Šuput Edible films and coatings – sources, properties and application / Danijela Šuput et al. // Food and Feed Research, 42 (1), 11-22, 2015.
17. Valencia-Chamorro S.A. Antimicrobial Edible Films and Coatings for Fresh and Minimally Processed Fruits and Vegetables: A Review / S.A. Valencia-Chamorro, Palou L., M.A. del Río et al. // Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2011, 51, 872–900.
18. Ramos O.L. Edible Films and Coatings from Whey Proteins: A Review on Formulation, and on Mechanical and Bioactive Properties / Ramos O.L., Fernandes J.C., Silva S.I. et al. // Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2012, 52, 533–552.
19. Etchepare M.A. Microencapsulation of probiotics using sodium alginate / M.A. Etchepare, J.S. Barin, A.J. Cichoski et al., // Ciência Rural, vol. 45, no. 7, pp. 1319–1326, 2015.
20. Yeung T.W. Microencapsulation in alginate and chitosan microgels to enhance viability of Bifidobacterium longumfor oral delivery / T.W. Yeung, E.F. Üçok, K.A. Tiani et al. // Frontiers in Microbiology, vol. 7, p. 494, 2016.
21. Chávarri M. Microencapsulation of a probiotic and prebiotic in alginate-chitosan capsules improves survival in simulated gastro-intestinal conditions / M. Chávarri, I. Marañón, R. Ares et al. // Int J Food Microbiol. 2010;142 (1-2):185-9.
22. George M. Polyionic hydrocolloids for the intestinal delivery of protein drugs: Alginate and chitosan-a review / M. George, T.E. Abraham // J. Control. Release Off. J. Control. Release Soc. 2006, 114, 1–14.
23. Bashan L.E. Immobilized microalgae for removing pollutants: Review of practical aspects / L.E. Bashan, Y. Bashan // Bioresour. Technol. 101:1611-1627.
24. Li Y. Construction of multilayer alginate hydrogel beads for oral delivery of probiotics cells / Li Y., Feng C., Li J., Mu Y. et al. // Int. J. Biol. Macromol. 2017; 105: 924–930.
25. Tapia M. S. Alginate- and gellan-based edible films for probiotic coatings on fresh-cut fruits / Tapia M. S., Rojas-Grau M. A., Rodríguez E. J. et al. // J. Food Sci.72, pp. 190–196.
26. Li Y. Atomic force microscopic investigations on pectin gelling made under optimum conditions / Li Y., Wu Y., Cai J. // Chemical Journal on Internet. 10, (9), P. 45.
27. Гаврилова Н. Б. Экспериментальное исследование иммобилизации клеток микроорганизмов в гель биополимеров / Н. Б. Гаврилова // Техника и технология пищевых производств - 2012. - № 3. - С. 21-28.
28. Campaniello D. Alginate- and Gelatin-Coated Apple Pieces as Carriers forBifidobacterium animalis lactis DSM 10140 / D. Campaniello, A. Bevilacqua, B. Speranza et al. // Front Microbiol. 2020 Oct 16;11:566596.
29. Ortakci F. Survival of microencapsulated probiotic Lactobacillus paracasei LBC-1e during manufacture of Mozzarella cheese and simulated gastric digestion / F. Ortakci, Broadbent J., W. McManus et al. // Journal of dairy science. 95. 6274-81.
30. Guowei Sh. Microencapsulation of Lactobacillus Acidophilus by Xanthan-Chitosan and Its Stability in Yoghurt / Guowei Sh. & He Y. & Chen Li et al. // Polymers. 9. 733.
31. Mousa A. Evaluation of physiochemical, textural, microbiological and sensory characteristics in set yogurt reinforced by microencapsulated Bifidobacterium bifidum F-35 / A. Mousa, X.M. Liu, Y.Q. Chen et al. // Int. J. Food Sci. Technol. 2014, 49, 1673–1679.
32. Nualkaekul S. Chitosan coated alginate beads for the survival of microencapsulated Lactobacillus plantarum in pomegranate juice / S. Nualkaekul, D. Lenton, M.T. Cook et al. // Carbohydr. Polym. 2012, 90, 1281–1287.
33. Doherty S.B. Application of whey protein micro-bead coatings for enhanced strength and probiotic protection during fruit juice storage and gastric incubation / S.B. Doherty, M.A. Auty, C. Stanton et al. // J. Microencapsul. 2012, 29, 713–728.

Список литературы на английском языке / References in English

1. FAO/WHO. Working group on drafting guidelines for the evaluation of probiotics in food. Guidelines for the evaluation of probiotics in food. 2002.
2. Isolauri E. Functional foods and probiotics: Working Group Report of the First World Congress of Pediatric Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition / E. Isolauri, H. Ribeiro, G. Gibson et al. // J Pediatr Gastroenterol Nutr. 2002;35:S106–S109.
3. Roy P. Functional Food: Probiotic as Health Booster / P. Roy, V. Kumar // J Food Nutr Popul Health, Vol.2, No.2:12.
4. Etchepare M.A. Microencapsulation of probiotics using sodium alginate / M.A. Etchepare, J.S. Barin, A.J. Cichoski et al., // Ciência Rural, vol. 45, no. 7, pp. 1319–1326, 2015.
5. Khosravi Zanjani Microencapsulation of Probiotics by Calcium Alginate-gelatinized Starch with Chitosan Coating and Evaluation of Survival in Simulated Human Gastro-intestinal Condition / Khosravi Zanjani, Mohammad Ali et al.// Iranian journal of pharmaceutical research : IJPR 13,3 (2014): 843-52.
6. Saarela M. Probiotic bacteria: safety, functional and technological properties / M. Saarela, G. Mogensen, R. Fonden et al. // J Biotechnol 2000; 84: 197-
7. Chávarri, M. Encapsulation technology to protect probiotic bacteria / Chávarri, M., Marañon, I., Villarán, C. // In: Rigobelo, E. (Ed.), Probiotics. InTech, pp. 501-540.
8. Boylston T.D. Incorporation of Bifidobacteria into Cheeses: Challenges and Rewards / T.D. Boylston, C.G. Vinderola, H.B. Ghoddusi et al. // International Dairy Journal, Vol. 14, No. 5, 2004, pp. 375-387.
9. Krasaekoopt W. Evaluation of encapsulation techniques of probiotics for yoghurt / W. Krasaekoopt, B. Bhandari, and H. Deeth // Int. Dairy J.13, 3–13.
10. Marinova V. Microbiological quality of probiotic dietary supplements / Marinova, I. Rasheva, Y. Kizheva et al.// Biotechnology & Biotechnological Equipment,33:1, 834-841.
11. Corona-Hernandez R.I. Structural stability and viability of microencapsulated probiotic bacteria: a review / R.I. Corona-Hernandez, E. Álvarez-Parrilla, J. Lizardi-Mendoza, et al. // Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, vol. 12, no. 6, pp. 614–628, 2013.
12. Korochinskij A.V. Issledovanie vozmozhnosti sozdanija immobilizovannyh struktur na baze probiotikov [Investigation of the possibility of creating immobilized structures based on probiotics] / A.V. Korochinskij, V.V. Vernikovskij, Je.F. Stepanova // Uspehi sovremennogo estestvoznanija [Successes of modern natural science]. – 2010. – № 5. – P. 34-38. [in Russian]
13. Chavarri M. Microencapsulation of a probiotic and prebiotic in alginate-chitosan capsules improves survival in simulated gastro-intestinal conditions / M. Chavarri, I. Marañón, R. Ares et al., // International journal of food microbiology. 142. 185-9.
14. Vidhyalakshmi R. Encapsulation “The future of probiotics”: A review / Vidhyalakshmi R., Bhakyaraj R., Subhasree R.S. // Adv. Biol. Res. 2009, 39, 96–103.
15. Korkach A. V. Obosnovanie metoda immobilizacii mikroorganizmov i ih primenenie v tehnologii konditerskih izdelij [Justification of the method of immobilization of microorganisms and their use in confectionery technology] / A. V. Korkach, G. V. Krusir, A. V. Egorova // Harchova nauka і tehnologіja [Food science and technology]. - 2013. - № 1. - P. 35-38. [in Russian]
16. Danijela Šuput Edible films and coatings – sources, properties and application / Danijela Šuput et al. // Food and Feed Research, 42 (1), 11-22, 2015.
17. Valencia-Chamorro S.A. Antimicrobial Edible Films and Coatings for Fresh and Minimally Processed Fruits and Vegetables: A Review / S.A. Valencia-Chamorro, Palou L., M.A. del Río et al. // Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2011, 51, 872–900.
18. Ramos O.L. Edible Films and Coatings from Whey Proteins: A Review on Formulation, and on Mechanical and Bioactive Properties / Ramos O.L., Fernandes J.C., Silva S.I. et al. // Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2012, 52, 533–552.
19. Etchepare M.A. Microencapsulation of probiotics using sodium alginate / M.A. Etchepare, J.S. Barin, A.J. Cichoski et al., // Ciência Rural, vol. 45, no. 7, pp. 1319–1326, 2015.
20. Yeung T.W. Microencapsulation in alginate and chitosan microgels to enhance viability of Bifidobacterium longumfor oral delivery / T.W. Yeung, E.F. Üçok, K.A. Tiani et al. // Frontiers in Microbiology, vol. 7, p. 494, 2016.
21. Chávarri M. Microencapsulation of a probiotic and prebiotic in alginate-chitosan capsules improves survival in simulated gastro-intestinal conditions / M. Chávarri, I. Marañón, R. Ares et al. // Int J Food Microbiol. 2010;142 (1-2):185-9.
22. George M. Polyionic hydrocolloids for the intestinal delivery of protein drugs: Alginate and chitosan-a review / M. George, T.E. Abraham // J. Control. Release Off. J. Control. Release Soc. 2006, 114, 1–14.
23. Bashan L.E. Immobilized microalgae for removing pollutants: Review of practical aspects / L.E. Bashan, Y. Bashan // Bioresour. Technol. 101:1611-1627.
24. Li Y. Construction of multilayer alginate hydrogel beads for oral delivery of probiotics cells / Li Y., Feng C., Li J., Mu Y. et al. // Int. J. Biol. Macromol. 2017; 105: 924–930.
25. Tapia M. S. Alginate- and gellan-based edible films for probiotic coatings on fresh-cut fruits / Tapia M. S., Rojas-Grau M. A., Rodríguez E. J. et al. // J. Food Sci.72, pp. 190–196.
26. Li Y. Atomic force microscopic investigations on pectin gelling made under optimum conditions / Li Y., Wu Y., Cai J. // Chemical Journal on Internet. 10, (9), P. 4527
27. Gavrilova N. Jeksperimental'noe issledovanie immobilizacii kletok mikroorganizmov v gel' biopolimerov [Experimental study of immobilization of microbial cells in biopolymer gel] / N. Gavrilova // Tehnika i tehnologija pishhevyh proizvodstv [Technics and technology of food production] - 2012. - № 3. - P. 21-28. [in Russian]
28. Campaniello D. Alginate- and Gelatin-Coated Apple Pieces as Carriers forBifidobacterium animalis lactis DSM 10140 / D. Campaniello, A. Bevilacqua, B. Speranza et al. // Front Microbiol. 2020 Oct 16;11:566596.
29. Ortakci F. Survival of microencapsulated probiotic Lactobacillus paracasei LBC-1e during manufacture of Mozzarella cheese and simulated gastric digestion / F. Ortakci, Broadbent J., W. McManus et al. // Journal of dairy science. 95. 6274-81.
30. Guowei Sh. Microencapsulation of Lactobacillus Acidophilus by Xanthan-Chitosan and Its Stability in Yoghurt / Guowei Sh. & He Y. & Chen Li et al. // Polymers. 9. 733.
31. Mousa A. Evaluation of physiochemical, textural, microbiological and sensory characteristics in set yogurt reinforced by microencapsulated Bifidobacterium bifidum F-35 / A. Mousa, X.M. Liu, Y.Q. Chen et al. // Int. J. Food Sci. Technol. 2014, 49, 1673–1679.
32. Nualkaekul S. Chitosan coated alginate beads for the survival of microencapsulated Lactobacillus plantarum in pomegranate juice / S. Nualkaekul, D. Lenton, M.T. Cook et al. // Carbohydr. Polym. 2012, 90, 1281–1287.
33. Doherty S.B. Application of whey protein micro-bead coatings for enhanced strength and probiotic protection during fruit juice storage and gastric incubation / S.B. Doherty, M.A. Auty, C. Stanton et al. // J. Microencapsul. 2012, 29, 713–728.