ВЫЯВЛЕНИЕ НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Сорокина А.И.

ведущий научный сотрудник, канд. вет. наук,

Государственное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский институт сои»

Российской академии сельскохозяйственных наук

ВЫЯВЛЕНИЕ НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫХ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Аннотация

Целью исследований было выявление некультивируемых форм микобактерий туберкулеза в случае их присутствия в биоматериале от реагирующего крупного рогатого скота. По результатам проведённых исследований получен патент на изобретение №2309681.

Ключевые слова: микобактерии, латентный микробизм, аллергические реакции, окружающая среда.

Key words: mycobacterium, latent microbizm, allergic reactions, environment.

Под влиянием различных факторов окружающей среды (экология, лекарственные и дезинфекционные средства и др.) происходит эволюция микроорганизмов: адаптация к меняющимся условиям окружающей среды, формирование высоковирулентных штаммов, изменение патогенетических свойств и диагностически значимых признаков у возбудителей инфекций [3].

Многие микроорганизмы, в том числе и микобактерии туберкулеза,  в ответ на различные стрессовые условия окружающей среды могут терять способность расти на питательных средах, но при этом оставаться жизнеспособными. Подобное состояние называют “некультивируемым”, а бактерии – “некультивируемыми формами”. При  смене неблагоприятных условий существования данные формы микроорганизмов вновь могут обрести способность к размножению. В  случаях современная лабораторная диагностика инфекционных заболеваний не должна основываться лишь на выявлении классических форм возбудителя, а должна предусматривать индикацию различных морфологически измененных вариантов бактерий, что особенно важно при исследовании нативного материала. Пассажи некультивируемых форм возбудителя через организм чувствительного животного является в большинстве случаев одним из лучших способов “оживления” некультивируемых форм микроорганизмов [1].

Туберкулез с его разнообразием форм проявления, значительной устойчивостью возбудителя во внешней среде и опасностью для людей занимает особое положение среди хронических инфекционных заболеваний крупного рогатого скота [4].

Вызывают озабоченность повторные вспышки туберкулеза в оздоровленных стадах крупного рогатого скота. Их  связывают с несколькими причинами, в том числе и с нахождением в стаде животных с латентным течением туберкулеза, когда у животных отсутствуют специфические туберкулезные поражения, хотя возбудитель находится в организме в измененной форме. В этом случае инфекция представляет серьезную опасность, так как под влиянием неблагоприятных факторов внешней среды латентный микробизм может переходить в прогрессирующий активный туберкулез [2].

Регламентированные методы лабораторной диагностики туберкулеза животных позволяют выявить заболевание только при наличии бактериальных форм возбудителя в биоматериале. Однако в отдельных случаях из биоматериала от убитых с диагностической целью животных, реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих без характерных для туберкулеза патологоанатомических изменений, ни культуральными исследованиями, ни биопробой не удается выделить микобактерии туберкулеза, хотя их наличие возможно, исходя из положительной реакции на ППД-туберкулин. Вследствие этого не выявляются животные с латентным течением болезни.

Цель исследований было выявить некультивируемые формы микобактерий туберкулеза в случае их присутствия в биоматериале от реагирующего крупного рогатого скота.

Материалы и методы исследований.

Исследовали биоматериал без видимых патологоанатомических изменений, характерных для туберкулеза, от реагирующего на ППД-туберкулин крупного рогатого скота из благополучного по туберкулезу хозяйства Амурской области и из оздоравливаемого от туберкулеза пункта Приморского края.

Биоматериал обрабатывали по методу Гона-Левенштейна-Сумиоши, высевали на питательную среду ФАСТ-3Л и инкубировали в течение 30 суток при температуре +37⁰С. Параллельно с культуральными исследованиями проводили выявление  микобактерий в биоматериале путем  трехкратного пассирования на морских свинках с интервалом в 21 день. Суспензию первичного и пассажного биоматериала нейтрализовали 10%-м раствором двууглекислой соды, отстаивали до оседания крупных частиц и вводили двум морским свинкам подкожно в область паха в дозе 1 мл на животное.

Идентификацию полученных на питательных средах культур проводили согласно Наставлению по диагностике туберкулеза животных    (2002).

Биоматериалом от крупного рогатого скота из оздоравливаемого от туберкулеза хозяйства заразили двух морских массой 250–300 г (I пассаж). Через 21 день проверили наличие сенсибилизации  у морских свинок к ППД-туберкулину, который вводили внутрикожно в дозе 25 ТЕ  в 0,1 мл раствора на голову. У обеих морских свинок через 24 часа в месте введения туберкулина обнаружили незначительное покраснение и припухлость диаметром 1,0–1,5 мм. Через 48 часов у одного животного реакция на туберкулин сохранилась, у другого – исчезла. Животных подвергли эвтаназии. На вскрытии обнаружили гиперплазию регионарных лимфатических узлов, при микроскопии мазков-отпечатков которых были обнаружены единичные очень мелкие некислотоустойчивые кокки. Суспензией биоматериала от группы  морских свинок I пассажа, после предварительной обработки, микроскопии мазков-отпечатков и посевов на питательные среды, заразили вторую группу лабораторных животных (II пассаж). Учет аллергических реакций на туберкулин через 21 день показал наличие сенсибилизации к ППД-туберкулину у зараженных морских свинок (у  животных в месте введения аллергена через 24 и 48 часов отмечали покраснение, уплотненную припухлость диаметром 3,0–4,5 мм.). При патологоанатомическом исследовании обнаружили гиперплазию всех лимфоузлов. Микроскопией мазков-отпечатков из лимфатических узлов установили наличие незначительного количества некислотоустойчивых и единичных кислотоустойчивых кокков.  С целью получения типичных форм микобактерий посевную суспензию из биоматериала от животных II пассажа  ввели 3-й группе морских свинок. Реакция на туберкулин у них характеризовалась наличием гиперемии, уплотненной припухлости диаметром 4,7–4,8 мм. У животных отмечалось увеличение и уплотнение паховых лимфоузлов. На вскрытии обнаружили увеличение всех лимфатических узлов и единичные очень мелкие белые очажки в печени. При микроскопии мазков-отпечатков из печени обнаружили нежные единичные слегка изогнутые зернистые кислотоустойчивые палочки, а также единичные кислото- и некислотоустойчивые кокки.

При культуральном исследовании на среде ФАСТ-3Л через 16 суток был получен рост типичных колоний, которые были идентифицированы как M. bovis. Из первичного биоматериала и биоматериала от  I и II пассажей культур микобактерий получено не было.

Результаты трехкратного пассирования на морских свинках биоматериала от реагирующих на туберкулин коров из благополучного по туберкулезу крупного рогатого скота  хозяйства были отрицательны. Из первичного биоматериала на питательной среде ФАСТ – 3Л через 7 дней после посева были выделены  M.vaccae.

Выводы. Проведенные нами исследования позволили исключить заболевание туберкулезом крупного рогатого скота в благополучном хозяйстве и выявить животных со скрытым течением заболевания в оздоравливаемом от этой инфекции неблагополучном пункте.

Литература

1. Гасионов,  Р. Некультивируемые формы микроорганизмов / Вет. газ. – № 5. – 2000. – С.5.
2. Донченко, А.С. Туберкулез крупного рогатого скота, верблюдов, яков, овец и пантовых оленей / А.С. Донченко, В.Н. Донченко ; РАСХН, Сиб. отд-ние, ИЭВСиДВ. – Новосибирск, 1994. – 354 с.
3. Кутырев, В.В. Актуальные проблемы особо опасных инфекционных болезней и санитарная охрана территорий в современных условиях / ЖМЭИ. –  № 1. – 2008. – С.17–23.
4.  Макаров, Ю.А. Микобактерии и диагностика туберкулеза крупного рогатого скота / Ю.А. Макаров. – Благовещенск, 1995. – 80 с.