ОЦЕНКА ПРИМЕНЕНИЯ ВОДНОГО ЭКСТРАКТА ACACIA NILOTICA НА МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ПОЧКАХ У КРЫС С АЛЛОКСАНОВЫМ ДИАБЕТОМ
ОЦЕНКА ПРИМЕНЕНИЯ ВОДНОГО ЭКСТРАКТА ACACIA NILOTICA НА МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ПОЧКАХ У КРЫС С АЛЛОКСАНОВЫМ ДИАБЕТОМ
Аннотация
Цель работы – оценка применения водного экстракта AN на морфологические и функциональные изменения в почках у крыс с аллоксановым диабетом. Настоящее исследование показало, что у крыс с алоксановым диабетом развилась тяжелая гипергликемия и выраженные нарушения функции почек. Применение водного экстракта AN в дозе (0,125 г/кг и 0,25 г/кг массы тела) cтатистически значимо снизило уровень глюкозы в группах 5 и 6 до 5,9 ± 0,09 ммоль/л и 4,6 ± 0,07 ммоль/л соответственно, р<0,05. Применение экстракта AN имело антигипергликемический эффект в дозозависимом режиме. AN значимо улучшила почечную функцию в группе 5 и 6 (снижение титров мочевины и креатинина в сыворотке крови больше, чем в группе 7).
1. Введение
Диабетическая нефропатия – серьезное осложнение сахарного диабета, приводящее к терминальной стадии почечной недостаточности
, , . На ранних этапах диабетическая нефропатия характеризуется гипертрофией клубочков и эпителиальных клеток канальцев, утолщением базальных мембран и усилением почечного кровотока , , утолщением клубочковых и канальцевых мембран и тубулоинтерстициальным фиброзом, все это способствует прогрессирующему ухудшению функции почек. Растения сыграли важную роль в создании новых лекарственных препаратов, например: изучение свойств GALEGA OFFICINALIS привело к синтезу метформина. ACACIA NILOTICA (AN) обладает многими биологическими эффектами, включая антигипертензивный, спазмолитический, антидиабетический, гипохолестеринемический, а также гипогликемический , , . Цель исследования – оценка применения водного экстракта AN на морфологические и функциональные изменения в почках у крыс с аллоксановым диабетом.2. Методы и принципы исследования
Приготовление водного экстракта AСАСIA NILOTICA: Листья AN 1 кг высушивали в духовке при 50 °C и измельчали для получения порошка AN, затем его смешивали с 1 л кипящей воды в течение 1 часа. Полученную смесь фильтровали, и готовили порошкообразную лекарственную форму. Сухой экстракт хранили при температуре 4 °C до использования. Порошок AN растворяли в физиологическом растворе натрия хлорида и вводили перорально в дозе 0,125 г/кг веса тела. В эксперимент включены беспородные крысы (вес: 155-197 г). Животные были разделены на семь равных групп (по шесть крыс в каждой), размещенных в стандартных условиях вивария. Крысы были разделены на две основные группы: нормальные недиабетические группы; группа 1 (контроль), группам 2 и 3 вводили экстракт AN 0,125 г/кг и 0,25 г/кг массы тела соответственно. Группы 4, 5, 6 и 7 получили однократную дозу подкожного (п\к) введения раствора аллоксана-тетрагидрата (АЛТТ) из расчета 30 мг/ на 100 г массы тела. Диабетические группы: группа 4 была контрольной диабетической и получала физиологический раствор натрия хлорида 0,9%-5 мл; группы 5 и 6 получали перорально 0,125 г/кг и 0,25 г/кг массы тела соответственно. В то время как группа 7 получала препарат глибенкламид (25 мг/кг, таблетки измельчались до порошка, растворяли в дистиллированной воде и вводили перорально). Кровь для анализа забиралась из хвостовой вены (на 1-е, 7-е, 14-е, 21-е, 28-е сутки с момента начала эксперимента), анализ уровня гликемии, мочевины и креатинина проводился на анализаторе HUMASTAR 600 (Германия). Крысы выводились их эксперимента на 28-е сутки. Гистопатологические исследования: Почки крыс из всех групп были удалены и немедленно зафиксированы в 10% нейтральном формалине, обезвожены в спиртовой серии, очищены в ксилоле и залиты в парафин. Были приготовлены срезы, окрашенные гематоксилином и эозином для фотомикроскопической оценки. Для статистической обработки был применен t-критерия Стьюдента и критерий Манна-Уитни. Результаты продемонстрированы следующим образом: М ± m (М – среднее, m – ошибка среднего). Данные принимались за значимые при р<0,05.
3. Результаты и их обсуждение
Рисунок 1 - Препарат почки крысы:
А - из группы 6, получавшей AN в дозе 0,25 г/кг; Б - из группы 7, получавшей глибенкламид в дозе 25 мг/кг
Примечание: А - окраска гематоксилин и эозин,х400; нормальные клубочки (Кк) с нормальными канальцами (к), с единичными пикнотическими клетками; Б - окраска гематоксилин и эозин, х400; нормальные канальцы (к) со слегка сморщенными клубочками (Кк), геморрагической зоной между почечными канальцами (длинная стрелка) и несколькими пикнотическими клетками (маленькая стрелка)
4. Заключение
Настоящее исследование показало, что у крыс с алоксановым диабетом развилась тяжелая гипергликемия, и выраженные нарушения функции почек. Достоверно известно, что окислительный стресс – значимый триггер в патофизиологии диабетической нефропатии. Как гипергликемия, так и активация ренин-ангиотензиновой системы играют роль в генерации активных форм кислорода (АФК)
, . Кроме того, повышенное количество АФК в почках, особенно супероксидных радикалов, реагирует с NO, образуя пероксинитрит, который, в свою очередь, связывается с тирозином, образуя высокоцитотоксичные соединения, такие как нитротирозин, что особенно губительно для почек и сосудов. Вероятнее всего, повреждение почечных клубочков при диабете обусловлено повышенной выработкой калликреина и простагландина Е2, которые вызывают гиперфильтрацию и вазодилатацию. Применение экстракта AN имело антигипергликемический эффект в дозозависимом режиме. AN значимо улучшила почечную функцию в группе 5 и 6 (снижение титров мочевины и креатинина в сыворотке крови больше, чем в группе 7). Вероятнее всего, механизм основных эффектов экстракта AN заключается в подавлении окислительного стресса и усилении антиоксидантной ферментной системы, но требуется дальнейшее проведение исследований с оценкой антиоксидантного статуса.