ПРЕПАРАТ ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ ИВЕРЛОНГ, ЕГО ФАРМАТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ И АКАРИЦИДНЫЕ СВОЙСТВА

Енгашева Е.С.¹, Русаков С.В.²

¹Кандидат ветеринарных наук ООО «Научно-внедренческий центр Агроветзащита», ² кандидат биологических наук  ФГБУ «ВГНКИ»

ПРЕПАРАТ ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ ИВЕРЛОНГ, ЕГО ФАРМАТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ И АКАРИЦИДНЫЕ СВОЙСТВА

Аннотация

В статье рассмотрены результаты изучения   фармакотоксикологических и  терапевтических свойства препарата Иверлонг на овцах, спонтанно зараженных клещами Psoroptes ovis.

Ключевые слова: овцы, псороптоз, препарат Иверлонг, гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, АСТ, АЛТ, ЩФ, креатининкеназа.

Engasheva E.C.¹, Rysakov С.V. ²

¹PhD in  Veterinary science "Research and innovation center Agrovetzaschita", ²PhD in Biological sciences FGBU "VGNKI

SUSTAINED-RELEASE PREPARATIONS IVERLONG, ITS PHARMACO-TOXICOLOGICAL AND ACARICIDALPROPERTIES

                                                                                                                                                                                Abstract

In the article the results of the study of pharmaco-toxicological and therapeutic properties of the drug Iverlong on sheep spontaneously infected mites Psoroptes ovis.

 Keywords: sheep, Common scab, a drug Iverlong, hemoglobin, red blood cells, white blood cells, AST, ALT, AST, ALT, alkaline phosphatase, creatinine kinase.

Введение

Ивермектин относится к классу макроциклических лактонов. Препарат обладает высокой противопаразитарной активностью, однако после дегельминтизации животные через 30 дней вновь заражаются. Поэтому создание лекарственных систем пролонгированного действия на основе биоразлагаемых полимеров является приоритетным и перспективным направлением в современной фармакологии.

Использование биосовместимых полимеров в качестве основных форм не только устраняет многие недостатки традиционных препаратов, но и добавляет новые свойства, такие как пролонгированное действие препарата.

Учеными биологического факультета МГУ, института биохимии им. А.Н. Баха и OOO «НВЦ Агроветзащита» разработана лекарственная форма пролонгированного действия ивермектина на основе биоразлагаемых полимеров.

Целью нашей работы было изучение  фармакотоксикологических, терапевтических свойств препарата Иверлонг на овцах, спонтанно зараженных клещами Psoroptes ovis.

Учеными из института им. Баха и МГУ им. Ломоносова разработаны и проанализированы сроки высвобождения из микросфер ивермектина.  Установлено, если на первой стадии высвобождения вещества из микросфер преобладают диффузионные процессы между водным буфером и ЛВ, то на более поздних этапах диффузия уступает место гидролитической деградации полимерной основы, что объясняет линейность скорости высвобождения ЛВ.

Иверлонг представляет собой раствор для инъекций,  относится к противопаразитарным препаратам пролонгированного действия. Ивермектин, входящий в состав препарата, обладает выраженным противопаразитарным действием на личиночные и половозрелые стадии нематод желудочно-кишечного тракта и легких, личинки подкожных, носоглоточных, желудочных оводов, вшей, кровососок и саркоптоидных клещей.

Материалы и методы исследований

Экспериментальные исследования для решения поставленных задач проводились в лаборатории токсикологии и виварии ВНИИВСГЭ, изучение акарицидного действия на ОПХ Ставропольского края.

Острую токсичность препарата изучали на 60 белых мышах – самцах и 12 белых крысах. Исходный вес животных колебался в пределах 21-22 г для мышей и 135 г для крыс. В опыт брали клинически здоровых животных, которые предварительно выдерживались на 15 – дневном карантине. Статистические группы состояли из 6 животных. При введении препарата в желудок были испытаны дозы – 3,3; 5,0; 7,0 и 8,0 г/кг. Расчет доз производился на 100% лекарственную форму.

При введении препарата под кожу были испытаны дозы 9,0; 12,0; 13,0; 14,0 г/кг.

Для гематологических и биохимических исследований от трех овец из каждой группы проводили забор крови до введения препаратов, через 15, 30, 45 и 60 дней. Гематологические исследования проводили на автоматическом гемоанализаторе (США) и учитывали – эритроциты, лейкоциты, гемоглобин. Для выделения лейкоцитарной формулы делали мазки крови, которые фиксировали спирт-эфиром и красили по методу Романовского-Гимза.

Биохимические исследования проводили на автоматическом биохимическом анализаторе (США -  Chemwell R6, биотесты фирмы «Кормей») по  показателям – ALT, AST, амилаза, креатининкеназа, щелочная фосфатаза.

Иммунотоксические и аллергенные свойства препарата изучали согласно Методических рекомендаций [4].

Изучение кинетики и динамики выведения ивермектина при применении препарата Иверлонг провели на 8 овцах, которым препарат вводили однократно, подкожно в терапевтической дозе 1 мл препарата на 50 кг массы животного (соответствует 0,5 мг ивермектина на 1кг массы животного). Пробы крови для анализа отбирали от овец до введения препарата (контрольные пробы) и через 2, 4, 12 часов; на 1, 2, 4, 7, 10, 15, 30, 60, 90 и 110 сутки после введения, в этикетированные полимерные пробирки объемом 15 мл, после инкубации получали сыворотку и готовили пробы по отработанной методике для количественного определения ивермектина методом жидкостной хроматографии высокого давления с флуоресцентным детектированием.

Для исследования динамики выведения остаточных количеств препарата брали по 2 овцы в каждом исследовании: 1 – контрольное животное; 2 – опытное животное. Через 30, 60, 90 и 110 суток после введения препарата провели убой животного и отбор образцов мышечной ткани в месте инъекции, печени, почек, сердца, лёгких, селезёнки и сальникового жира. Полученные пробы сыворотки крови, а также образцы органов и тканей хранили при температуре -20°С до проведения пробоподготовки и хроматографического анализа.

В течение всего периода проведения опыта  вели наблюдения за общим состоянием и особенностями поведения овец, а также за наличием/отсутствием возможного токсического эффекта или каких-либо побочных реакций после введения препарата.

Акарицидное действие Иверлонга проводили в производственных условиях в 2-х опытах на 61 овцах, спонтанно зараженных клещами Psoroptes ovis, при этом были испытаны дозы 1мл и 1,5 мл на 50 кг живой массы. Всего было проведено 2 опыта и испытано 5 серий препарата.

В первом опыте использовали 31 овцу, акарологические исследования были проведены через 19, 24, 36, 48 и 62 дня после введения препарата.

Во втором опыте использовали 30 овец, акарологические исследования были проведены через 12, 18, 29, 43, 53 суток.

Результаты исследований и их обсуждение

По результатам изучения фармакотоксикологических свойств препарата, установлено, что Иверлонг, согласно классификации (ГОСТ 12.1.007-76), в условиях однократного введении в желудок находится на границе между умеренно и мало токсичными соединениями, т.е. относится к 3-4-ому классу соединений (ЛД₅₀ = 4,67: 5,73 г/кг), согласно  классификации  Сидорова К.К.(1977),  в условиях однократного  введении   под кожу  «относительно безвредное соединение» (6 –ой класс; ЛД₅₀ = 4,67 :  5,73 г/кг).

При изучении гематологических показателей, установлено, что введение Иверлонга снижает количество лейкоцитов на 8,2%, что свидетельствует о снижении воспалительного процесса. Наблюдается улучшение физиологических показателей крови, установлено повышенное содержание гемоглобина на 12,2% и эритроцитов на 14,5%.

При изучении биохимических показателей, на основании полученных результатов, констатировали, что показатели АСТ, АЛТ, щелочная фосфатаза и креатининкеназа соответствуют динамике гематологических показателей, а именно увеличение  выше названных ферментов в контрольной зараженной группе и  снижение у дегельминтизированных животных. Наиболее эффективным этот процесс наблюдали в группе животных, получавших Иверлонг.

Таблица 1. Биохимические показатели сыворотки крови овец

На 15 сутки после дачи препарата г
1		2	3			4		5		6
№ группы		ALT, E д/л	AST, E д/л			Амилаза, E д/л		Креатининкиназа, E д/л		Щелочная фосфатаза,
1		24,0±0,7	33,8±2,4			8,6±0,2		198,9±11,9		0,003±0,01
2		38,6±1,9	35,2±5,7			12,1±0,4		375,7±13,2		0,013±0,03
5		28,7±1,3	33,5±4,4			12,13±0,7		170,5±17,2		0,02±0,02
6		23,9±0,9	30,7±6,8			6,76±0,3		195,9±12,8		0,1±0,03
Продолжение таблицы 1
1		2		3		4	5			6
На 30 сутки после дачи препарата
1		14,9±0,9	51,64±4,9			7,13±0,9		169,5±13,8		0,053±0,01
2		34,1±2,4	68,91±7,4			10,02±0,4		274,3±15,7		0,008±0,02
5		18,06±2,7	20,4±3,8			10,38±0,9		201,4±16,3		0,008±0,01
6		18,93±1,8	20,3±2,4			6,06±1,2		122,9±12,4		0,11±0,02
На 45 сутки после дачи препарата
1	15,4±1,1			29,8±2,2	6,9±0,3			158,8±16,2	0,05±0,01
2	30,2±1,8			61,4±1,8	8,1±0,5			250±12,7	0,12±0,02
5	18,06±0,9			18,2±1,2	9,4±0,4			100,2±13,4	0,06±0,01
6	15±0,6			20,3±1,4	6,4±0,2			124±10,8	0,03±0,02
На 60 сутки после дачи препарата
1		18,3±0,7	46,8±9,2			6,99±0,7		197,7±11,4		0,12±0,01
2		29,5±0,3	72,4±6,8			8,2±0,3		226,6±19,8		0,19±0,01
5		16,3±1,3	46,6±5,4			10,66±1,1		151,9±14,6		0,09±0,02
6		15,3±1,9	68,5±7,2			9,46±0,8		185,9±13,2		0,17±0,01

По результатам опыта по определению иммуннотоксичности, установили, что Иверлонг, в терапевтической и десятикратно увеличенной дозах вызывает умеренное усиление клеточной реакции формирования гиперчувствительности замедленного типа. Индекс РГЗТ составил 9,64±1,27 % и превысил показатель контроля на 55,5%. Препарат не обладает токсическим действием по титрам гемагглютининов и индексам действия препарата на клетки иммунной системы и составил 0,98 и 0,89 функционирование которых обеспечивает развитие гуморальных реакций.

По результатам эпикутанного тестирования, внутрикожной и конъюнктивальной проб, реакции дегрануляции тучных клеток и содержанию эозинофилов можно сделать вывод об отсутствии у препарата аллергенных свойств.

Результаты, полученные при исследовании кинетики и динамики выведения остаточных количеств препарата из организма овец свидетельствуют, что при подкожном введении ивермектин обладает хорошей биодоступностью - всасываясь из места инъекции, он достигает максимальных концентраций (около 70-101 нг/мл) в крови овец через 1,5 суток, период полувыведения ивермектина составляет около 382,9-420,5 часов. Остаточные количества  ивермектина регистрировали на 60 сутки после применения препарата в мышцах с места инъекции, почках, сальниковом жире (таб. 2)

Таблица 2. Динамика выведения остаточных количеств ивермектина из организма овец после однократного подкожного введения препарата Иверлонг

Сроки отбора проб после введения, сутки	Мышцы с места инъекции	Мышцы	Печень	Почки	Сердце	Лёгкие	Селезёнка	Сальниковый жир
		Концентрация, нг/г
30	454,7	Н.О.	49,6	81,2	Н.О.	Н.О.	Н.О.	112,5
60	87,5	Н.О.	Н.О.	22,4	Н.О.	Н.О.	Н.О.	75,4
90	Н.О.	Н.О.	Н.О.	Н.О.	Н.О.	Н.О.	Н.О.	Н.О.
110	Н.О.	Н.О.	Н.О.	Н.О.	Н.О.	Н.О.	Н.О.	Н.О.

Акарицидное действие Иверлонга проводили в производственных условиях в 2-х опытах на 61 овцах, спонтанно зараженных клещами Psoroptes ovis, при этом были испытаны дозы 1мл и 1,5 мл на 50 кг живой массы. Всего было проведено 2 опыта и испытано 5 серий препарата.

В первом опыте использовали 31 овцу, акарологические исследования были проведены через 19, 24, 36, 48 и 62 дня после введения препарата. По результатам акарологических и клинических исследований  установлено, что две серии нового препарата,  как и известный  акарицид – ивомек,  профилактировали псороптоз у овец  в течение  45-50  дней.

Во втором опыте использовали 30 овец, акарологические исследования были проведены через 12, 18, 29, 43, 53 суток. Испытания  трех серий нового пролонгированного препарата установили, что образец №1 нового препарата профилактировал псороптоз в течение 60 дней. Препараты образца № 2 и 3 профилактировали псороптоз в течение 50 дней, а  известный  акарицид – ивомек профилактировал псороптоз у овец  в течение  30 дней. В дальнейших экспериментах работали с образцом № 1.

Таким образом, совокупность хорошей биодоступности ивермектина и длительной элиминации остаточных количеств из организма овец обеспечивает присутствие необходимых противопаразитарных концентраций ивермектина в организме животного на протяжении продолжительного периода времени, что в свою очередь обуславливает высокие противопаразитарные свойства препарата.

Препарат может применяться  крупному рогатому скоту, овцам  для лечения и профилактики  нематодозов: диктиокаулеза, трихостронгилятоза, стронгилоидоза, аскаридатоза, буностомоза, телязиоза; при гиподерматозе, эстрозе, псороптозе, саркоптозе, сифункулятозе, маллофагозе, а также для борьбы с падальными и мясными мухами.

 Исследования продолжаются.