ПРИЖИЗНЕННАЯ И ПОСЛЕУБОЙНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ

Гламаздин И.Г.¹; Ибрахим М.И.С.²; Сысоева Н.Ю.3; Панова О.А.⁴

¹Доктор ветеринарных наук, профессор: ²Аспирант; ³Кандидат ветеринарных наук, доцент; 4 Аспирант,

ФГБОУ ВПО Московский государственный университет пищевых производств

ПРИЖИЗНЕННАЯ И ПОСЛЕУБОЙНАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ

Аннотация

Целью настоящих исследований являлось изучение распространения гельминтозных инвазий жвачных животных и проведения сравнительной оценки существующих диагностических методов. Проведены исследования по разработке параметров собственных диагностических тест – систем. Полученные результаты могут быть использованы при создании эффективной системы контроля над гельминтозами жвачных животных.

Ключевые слова: Гельминтозы жвачных животных, копрологические методы диагностики,  послеубойная экспертиза, мультиантигенный вариант ELISA.

Glamazdin I.G.¹;  Ibrakhim M.I.S.²; Sysoyeva N.Y.3; Panova O.A.⁴

¹Doctor of Veterinary Sciences, Professor, ²Graduate Student, ³Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor, ⁴Graduate Student, the Moscow State University of Food Productions

INTRAVITAL AND POST-MORTEM DIAGNOSTICS FOR HELMINTHIASES OF RUMINANTS

Abstract

The aim of the present study was to investigate the distribution of helminth infestation ruminants and comparative assessment of existing diagnostic methods. Studies on the development of the parameters of their own diagnostic test - systems. The results can be used to create an effective system of control worm infections of ruminants.

Keywords: Helminth infections of ruminants, scatological diagnostic methods Post slaughter examination multiantigenny option ELISA.

Давно установлено, что жвачные животные в большой степени заражены гельминтами и на территории Российской Федерации и на территориях сопредельных стран. В результате эпизоотологических исследований в популяции овец Нижегородской и Волгоградской областей был зарегистрирован 21 вид гельминтов: 3 вида трематод (15.0%), 4 – цестод (20,0%) и 14 – нематод (65,0%). [3]

Существующие на сегодняшний день копрологические методы диагностики гельминтозов выявляют далеко не все болезни. Например: фасциолез можно диагностировать только через 3,5 – 4 месяца после начала инвазии, эхинококкоз или финноз вообще не представляется возможным. Между тем возбудители фасциолеза, эхинококкоза или тонкошейного финноза являются опасными болезнетворными агентами, которые  затрагивает всю гепатобиллиарную систему хозяина, и часто вызывают  хронический гепатит по пролиферативному типу. Обозначенная патология  ведет к нарушению деятельности желудочно-кишечного тракта и к явлению мальабсорбции, что провоцирует значительное снижение эффективности откорма и снижение пищевой ценности получаемой животноводческой продукции, а также к сокращению сроков хранения продуктов убоя. [2]

В соответствии с актуальностью проблемы цель работы заключалась в изучении гельминтозной инвазии жвачных животных и разработки научно-обоснованной системы диагностических мероприятий.

Метод неполных гельминтологических исследований отдельных органов животных. Видовой состав гельминтов определяли с помощью гельминтологических исследований различных органов: легких, сычуга и кишечника. При необходимости проведения дифференциальной диагностики и идентификации гельминтов крупного рогатого скота использовали определители К.И.Скрябина, Н.П. Шихобаловой, Р.С.Шульца и др.  [5] [6]

Диагностику паразитарных болезней проводили по правилам ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов. Утверждены Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 27 декабря 1983 года.

Упрощенный метод Ветцеля-Орлова. Монтировали аппарат Бермана, но вместо зажима на свободный конец резиновой трубки надевали пробирку. Пробы фекалий (10 г) помещали в воронки аппарата Бермана на металлической сетке или завернув их в отрезки марли.  Аппарат с пробами от овец оставляли при комнатной температуре на 3 ч, крупного рогатого скота — на 5 ч. Исследовали осадок под малым увеличением микроскопа. Для обнаружения личинок в фекалиях овец применяли метод Вайда. [4]

Мультиантигенный тест осуществляли исследованием каждой сыворотки сразу на пять антигенов, которые были адсорбированы каждый в своей лунке: нематод легочной ткани, нематод желудочно-кишечного тракта, F. hepatica, C.tenuicollis, E. granulosus. [1] [2]

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Как видно из таблицы 1 наибольшее число гельминтов было зарегистрировано при исследовании желудочно-кишечного тракта крупного рогатого скота и овец, ЭИ =9,58 и 13,77, соответственно. Интересно отметить, что нематодозы крупного рогатого скота были представлены: Ostertagia ostertagi 4,23%, Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis – 3,72%, Nematodirus filicollis – 3,05%, Hemonchus contortus – 2,6%, причем в 32,07% случаях наблюдали смешанную инвазию.

Таблица 1 - Распространение гельминтозов жвачных животных

Гельминтозы	Выявлено случаев	Экстенсивность инвазии,%
	крупный рогатый скот, n=970	овцы, n=610	крупный рогатый скот, n=970	овцы, n=610
легочные	80	77	8,25	12,6
желудочно-кишечные	93	84	9,58	13,77
фасциолез	60	41	6,18	6,72
цистицеркоз тенуикольный	67	64	6,91	10,49
эхинококкоз	17	14	1,75	2,29

Возбудителей нематодозов желудочно-кишечного тракта овец дифференцировали как следующие виды: Ostertagia circumcincta – 3,04%, Trichostrongylus colubriformis, Trichostrongylus axei – 4,78%, Nematodirus filicollis – 4,63%, Hemonchus contortus – 1,32%, причем смешанная инвазия наблюдалась у овец в 41,7% случаях.

Как видно из таблицы 2 далеко не все методы диагностики одинаково эффективны. При легочных и кишечных нематодозах наиболее ценным в диагностическом отношении являлся метод лярвоскопии.

Эффективность этого метода при нематодозах легких у крупного рогатого скота была 95,0% и у овец 96,1%. Желудочно-кишечные нематодозы могли определить методом лярвоскопии у крупного рогатого скота и овец с эффективностью 94,6% и 96,4%, соответственно.

Гельминтозы жвачных определяли также методами последовательного промывания и флотацией в этих случаях обнаруживали яйца/личинки. Сравнивая эти два метода можно сказать, что наиболее целесообразно применять метод флотации, его эффективность у крупного рогатого скота и овец была установлена 76,3% и 79,4%, соответственно. В методе флотации (Фюллеборна) – мы использовали для приготовления насыщенного раствора тиосульфат натрия Na₂SO₃S. На его основе получали раствор с удельной плотностью 1,4.

Таблица 2 - Сравнительная эффективность диагностических методов при основных гельминтозах жвачных животных гельминтозах жвачных животных

Гельминтозы	Число выявленных случаев (% эффективности)
	методом последовательного промывания	Флотацией		Лярвоскопией
	к.р.с.	овцы		к.р.с.	овцы			к.р.с.	овцы
нематодозы легких	N=80 5 (6,2%)		N=77 2 (2,6%)	N=80 3 (3,7%)		N=77 3 (3,8%)	N=80 76 (95,0%)		N=77 74 (96,1%)
нематодозы желудочно-кишечного тракта	N=93 32 (34,4%)		N=84 26 (30,9%)	N=93 71 (76,3%)		N=84 61 (79,4%)	N=93 88 (94,6%)		N=84 81 (96,4%)
Фасциолез	N=60 42(70,0%)		N=41 32 (78,0%)	N=60 45(75,0%)		N=41 33 (80,5%)	N=60 нет		N=41 нет
тонкошейный финноз	Невозможно выявление паразита
эхинококкоз	Невозможно выявление паразита

Для замедления кристаллизации раствора на предметном стекле в исследуемый препарат добавляли каплю глицерина, разведенного водой 1:1. В редких случаях замечали деформацию яиц фасциол, которые приобретали вогнутую форму овала коричневой окраски.

Нематодозы легких у коров и овец выявлялись экспертизой в 91,25% и 93,5%, соответственно. Метод неполных гельминтологических вскрытий оказался более эффективным и с его помощью в 100% случаях выявляли всех паразитических червей в продуктах убоя овец и крупного рогатого скота. При ветеринарно-санитарной экспертизы печени, в желчных ходах, нами выявлялись возбудители фасциолеза. Эффективность диагностики и у крупного рогатого скота и овец оказалась очень высокой, например: 96,6% и 97,56%, соответственно.

Возбудителей тонкошейного финноза и эхинококкоза диагностировали методами экспертизы и неполных гельминтологических исследований отдельных органов животных с одинаковой эффективностью – 100%.

Эффективность мультиантигенного теста оказалась достаточно высокой и при учете результатов реакции достигала 100%. Максимальное значение экстинкции получено при диагностике тонкошейного финноза, Е = 1,42±0,20. При принятой нами системы учета положительных ответов в ИФА были получены ложноположительные реакции при диагностике эхинококкоза с животными, зараженными тонкошейным финнозом. При диагностике нематодозов желудочно-кишечного тракта регистрировались ложноположительные реакции с сыворотками крови от животных, зараженных нематодозами. Однако, сравнивая коэффициенты экстинкции гомологичных и гетерологичных реакций,  установили большую разницу в цифрах, например: 0,24±0,04 и 1,42±0,02 (более чем в 6,5 раз).

Таблица 3 - Эффективность мультиантигенного теста на основе ИФА (ELISA) при гельминтозах крупного рогатого скота

Гельминтозы	Коэффициент экстинкции (Е) в ИФА с разными антигенами
	АГ легочных нематод	АГ кишечных нематод	АГ фасциол	АГ цистицерк	АГ эхинококк
нематодозы легких, N=32	1,14±0,37	0,24±0,12	0,11±0,04	0,14±0,03	0,10±0,02
нематодозы желудочно-кишечного тракта, N=95	0,22±0,02	1,25±0,17	0,12±0,02	0,12±0,04	0,12±0,03
фасциолез, N=44	0,15±0,02	0,16±0,01	1,35±0,24	0,22±0,05	0,18±0,07
тонкошейный финноз, N=17	0,16±0,01	0,14±0,02	0,20±0,04	1,42±0,20	0,22±0,06
эхинококкоз, N=11	0,16±0,02	0,16±0,02	0,18±0,04	0,24±0,04	1,34±0,18

P ≤ 0,05 – разница достоверна между значениями экстинкции в реакциях сыворотки крови от зараженных животных с гомологичными и гетерологичными антигенами.

В наших экспериментах при оценке гельминтозной инвазии у овец мультиантигенный тест показал удовлетворительные результаты. Интенсивность экстинкции при учете реакции у овец во всех случаях оказалась выше, у крупного рогатого скота. При учете результатов теста, сыворотку считали положительной, если иммуноферментный фотометр показывал коэффициент оптической плотности (Е) 0,35 и выше, соответственно, если ниже – то отрицательной. Максимально высокой экстинкция оказалась при фасциолезе. Перекрестные реакции были отмечены между сыворотками крови от животных, больных цистицеркозом и эхинококкозом, а также между легочными и кишечными нематодами. В то же время при сравнительном учете результатов реакции в мультиантигенном варианте всегда выявлялись гомологичные реакции, ставился точный диагноз на преобладающий гельминтозный акцент. Полученные ложноположительные результаты в сыворотках крови от животных, в органах  и тканях которых при  послеубойной экспертизе были обнаружены не ожидаемые гельминты, можно объяснить проведенной дегельминтизацией, длительной сенсибилизацией тканей организма метаболитами паразитов, а также наличие общих антигенных детерминант у гельминтов разных видов. В то же время мы получили 100% чувствительность, что говорит о возможности использовать тест для прижизненной диагностики гельминтозов жвачных животных.

Таким образом, диагностика гельминтозов может быть высокоэффективной только при использовании методов выявления паразитов, основанных на разных принципах обнаружения гельминтов: овоскопии, лярвоскопии, взаимодействия антиген-антитело и послеубойной ветеринарно-санитарной экспертизы.