АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ ПРИ СМЕШАННОЙ БАКТЕРИАЛЬНО-ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ У ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА

АНТИБИОТИКОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ ПРИ СМЕШАННОЙ БАКТЕРИАЛЬНО-ХЛАМИДИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ У ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА

Научная статья

Омарова С.М.^1, *, Ахмедова Р.С.², Багандова Д.Ш.³, Саидова П.С.⁴, Исаева Р.И.⁵

^{1, 2, 3, 4, 5} Дагестанский государственный медицинский университет, Махачкала, Россия

* Корреспондирующий автор (omarovanpo[at]mail.ru)

Аннотация

Наибольшее значение в изучении вторичного бесплодия приобрели урогенитальные хламидийные инфекции, относящиеся к инфекциям, передаваемым половым путем. Они оказывают негативное влияние на репродуктивное здоровье, часто являются причиной серьезных осложнений - бесплодия, невынашивания беременности и т.д. Так частота и уровень невынашивания беременности в популяции репродуктивно активного населения составляет около 25%. При этом генитальная инфекция является основной причиной подобных осложнений.

Отсутствие эффекта от антибиотикотерапии, связанное с антибиотикорезистентностью, приводит к тому, что болезнь продолжает прогрессировать и переходит в более тяжелую форму, лечение которой становится еще более затруднительным.

Ключевые слова: хламидийная инфекция, бесплодие, условно-патогенная микробиота, резистентность.

ANTIBIOTIC SENSITIVITY OF CONDITIONALLY PATHOGENIC MICROORGANISMS IN MIXED BACTERIAL-CHLAMYDIA INFECTION IN WOMEN OF REPRODUCTIVE AGE

Research article

Omarova S.M.^1, *, Akhmedova R.S.², Bagandova D.Sh.³, Saidova P.S.⁴, Isaeva R.I.⁵

^{1, 2, 3, 4, 5} Dagestan State Medical University, Makhachkala, Russia

* Corresponding author (omarovanpo[at]mail.ru)

Abstract

The research of urogenital chlamydial infections related to sexually transmitted infections is of the greatest importance in the study of secondary infertility. It has a negative impact on reproductive health, often causing serious complications, like infertility, miscarriage, etc. Thus the frequency and level of miscarriage in reproductively active population is about 25%. Moreover, genital infection is the main cause of such complications. The lack of effect of antibiotic therapy associated with antibiotic resistance leads to the fact that the disease continues to progress and becomes more severe, its treatment becomes even more difficult.

Keywords: chlamydial infection, infertility, opportunistic microbiota, resistance.

Стратегия ВОЗ по сдерживанию резистентности к противомикробным препаратам касается всех, кто в той или иной мере имеет отношение к применению или назначению антибиотиков.

В рамках исполнения плана мероприятий на 2019-2024 годы по реализации Стратегии предупреждения распространения антимикробной резистентности в Российской Федерации на период до 2030 года, утвержденного распоряжением Правительства Российской Федерации от 30 марта 2019 года № 604, должны проводятся исследования в клинических бактериологических лабораториях, с целью выявления антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов.

Отсутствие эффекта от антибиотикотерапии, связанное с антибиотикорезистентностью, приводит к тому, что болезнь продолжает прогрессировать и переходит в более тяжелую форму, лечение которой становится еще более затруднительным. Особую опасность представляют случаи, когда бактериальная инфекция поражает жизненно важные органы: сердце, легкие, головной мозг, почки и т.д.

Вторая опасность заключается в том, что некоторые болезни при недостаточности терапии антибиотиками могут приобретать хроническое течение. Человек становится носителем усовершенствованных микроорганизмов, устойчивых к антибиотикам определенной группы. Он же теперь является источником инфекции, бороться с которой становится бессмысленным. Такие пациенты переходят в разряд хронических больных с изменениями в функционировании ряда органов и систем. В полной мере это относится и к развитию вторичного бесплодия после перенесенного инфекционного заболевания урогенитального тракта [1].

Наибольшее значение в изучении вторичного бесплодия приобрели урогенитальные хламидийные инфекции, относящиеся к инфекциям, передаваемым половым путем [13]. Они оказывают негативное влияние на репродуктивное здоровье, часто являются причиной серьезных осложнений - бесплодия, невынашивания беременности и т.д. Так частота и уровень невынашивания беременности в популяции репродуктивно активного населения составляет около 25%. При этом генитальная инфекция является основной причиной подобных осложнений. Как известно воздействие на организм инфекционного возбудителя приводит к стимуляции провоспалительных цитокинов и как результат происходят изменения шейки матки (действие простагландинов приводит к ее размягчению) [5], [6].

 Уровень заболеваемости урогенитальным хламидиозом в мире ежегодно составляет более 90 млн. человек. В настоящее время в диагностике инфекционных процессов применяется комплекс методов исследования, с целью всестороннего изучения патогенеза развития заболеваний, что особо важно, когда речь заходит о репродуктивном здоровье [2], [3], [4]. Наряду с классическими микробиологическими методами широко изучается роль антигенов всех участников инфекционного процесса (бактерий, вирусов, грибов) в возникновении иммунологических реакций. В таких иммунопатологических реакциях при хронических персистирующих инфекциях, которые поддерживают постоянный воспалительный процесс при урогенитальном хламидиозе (УГХ) происходят изменения в организме в виде вторичного гуморального иммунного ответа с повышенным синтезом специфических антител классов IgM и IgG к C. trachomatis и бактериальным представителям при микст-инфекции. Повышение уровня иммунологической ответной реакции в виде гиперстимуляции антигенов возбудителей УГХ приводит к хронизации воспалительного процесса урогенитального тракта и соответственно к рубцеванию тканей, что может играть в развитии бесплодия и прерывания беременности у женщин с хламидийной патологией смешанной этиологии.

Как правило, хламидийная инфекция носит смешанный характер, представляя сочетания хламидий с бактериями, вирусами и грибами. В связи с этим возникает необходимость комплексного изучения урогенитального хламидиоза, как с точки зрения общего инфекционного процесса, так и для выяснения факторов, способствующих развитию хронических процессов с тяжелыми осложнениями [6], [7].

Цель исследования – анализ микробного пейзажа и антибиотикочувствительности штаммов условно патогенных микроорганизмов (УПМ) выделенных у женщин репродуктивного возраста при смешанной хламидийной инфекции.

Материалы и методы. В исследование были включены 152 женщины репродуктивного возраста с диагнозом урогенитальный хламидиоз, обратившихся по поводу бесплодия. Диагноз УГХ смешанной этиологии подтвержден с учетом положительных результатов лабораторной диагностики с применением бактериологического метода – посев клинического материала осуществляли в соответствии с действующим Приказом МЗ СССР №535, а определение чувствительности выделенных условно патогенных микроорганизмов к антимикробным препаратам, определяли диско-диффузионным методом в соответствии с Методическими указаниями МУК 4.2.1890-04.

Выделение ДНК производили с помощью сертифицированных коммерческих наборов «ДНК-сорб-А-М», «ДНК-сорб-В», «ДНК-сорб-С» и «Реамикс» согласно инструкции фирмы-производителя. ПЦР проводили с помощью коммерческих наборов ООО НПФ «Гентех» и ФГУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора согласно инструкции фирмы-производителя (Москва, Россия). Для ПЦР исследований использовали амплификатор «Терцик» (ЗАО НПФ ДНК-Технология, Москва, Россия).

 Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием относительных величин показателей в процентах. Оценку точности и надежности - с помощью расчета 95% доверительного интервала. Оценку значимости различий для независимых величин - сопоставлением доверительных интервалов с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Развитие устойчивости к антибиотикам зависит от циркулирующих штаммов на определенной территории и их фенотипических особенностей. Так, группой авторов отмечена высокая эффективность фторхинолонов в отношении энтеробактерий, кокков и многих других бактерий, вызывающих различные воспаления мочеполового тракта [8]. С этим согласуются данные Zhanel и соавт. отмечающих высокую эффективность ципрофлоксацина в отношении штаммов Escherichia coli, Staphylococcus aureus и Klebsiella pneumoniae. Устойчивость этих штаммов бактерий колебалась от 5,5% до 9,7%. Количество чувствительных штаммов к ципрофлоксацину превышала 90% [9]. В последние годы отмечают высокий уровень резистентности штаммов E. coli, S. aureus и K. pneumoniae к ампициллину, к бета-лактамным антибиотикам и фторхинолонам [9], [10], [11].

В настоящей работе представлены данные об активности антибиотиков различных групп в отношении штаммов E. coli, K. pneumoniae и S. aureus циркулирующих на территории Дагестана. В исследование были включены штаммы E. coli, K. pneumoniae и S. aureus, выделенные из клинического материала от мужчин, обратившихся в специализированные урологические центры. В подавляющем большинстве случаев у женщин с диагнозом кольпит хламидийной этиологии, Ch. trachomatis встречалась в виде микст – инфекции бактериально-бактериального, бактериально-вирусного и бактериально-грибкового характера.

Из исследуемого материала (соскобы с цервикального канала) было выделено 393 штамма, из них 54 (13,7%) штамма K. pneumoniae, 36 (9,2%) штаммов E. coli, 279 (71,0%) штаммов S. aureus. Другие уропатогены встречались реже в 6,1% (24 штамма).

Результаты определения чувствительности к антибиотикам штаммов, выделенных у обследованной группы женщин, показали, что наибольшей активностью в отношении выделенных культур K. pneumoniae, E. coli и S. aureus обладали ципрофлоксацин и гентамицин. Высокую чувствительность к гентамицину проявили 48,7% штаммов E. coli и 36,5% к ципрофлоксацину. В случае K. pneumoniae - 56,9% штаммов были чувствительны к ципрофлоксацину и 46,6% штаммов к гентамицину. В отношении штаммов S. aureus наибольшей активностью обладали: ципрофлоксацин – 59,7% и гентамицин – 53,7%. Наибольшая частота резистентности была выявлена к рулиду и доксициклину: K. pneumoniae – рулид - 92,9%, доксициклин – 84,4%; E. coli – рулид 93,4%, доксициклин – 74,4%; S. aureus – рулид 90,9%, доксициклин – 66,4%.

Так, большинство ампициллинорезистентных штаммов E. coli были резистентны к рулиду (98%), а наибольшей активностью в отношении ампициллинорезистентных штаммов обладал гентамицин (28%). Резистентные к рофецину E. coli были наиболее чувствительны к гентамицину (27%) и ципрофлоксацину (37%), а резистентны были к рулиду (98%) и доксициклину (75%). В отношении доксициклинорезистентных штаммов наибольшей активностью обладал гентамицин (30%), а устойчивы были к рулиду (86%). Штаммы резистентные к гентамицину были чувствительны к ципрофлоксацину (47%), устойчивы к рулиду (98%) и доксициклину (84%). Резистентные к рулиду штаммы были чувствительны к гентамицину (27%) и резистентны к доксициклину (66%). Ципрофлоксацинорезистентные штаммы были чувствительны к гентамицину (28%) и устойчивы к рулиду (96%). В отношении ломефлоксацинорезистентных штаммов наибольшей активностью обладал гентамицин (38%) и резистентны были к рулиду (94%) от выделенных культур.

Наиболее частыми фенотипами множественной устойчивости выделенных штаммов из исследуемого материала от мужчин были сочетания: рулид – рофецин (66,7%; 83,3%; 64,5%), рулид – рофецин – ампициллин (44,4%; 41,7%; 47,3%), рулид – рофецин – ампициллин – доксициклин (38,9%; 16,7%; 34,4%). Реже выделенные штаммы E. coli, K. pneumoniae и S. aureus были одновременно устойчивы рулид – рофецин – ампициллин – доксициклин – ломефлоксацин – ципрофлоксацин – гентамицин. Существенных отличий уровня полирезистентности у штаммов E. coli, K. pneumoniae и S. aureus к антибиотикам не отмечено.

Всего 12 (22,2%) штаммов K. pneumoniae были одновременно резистентны к рулид – рофецин – ампициллин – доксициклин – ломефлоксацину. K. pneumoniae (6 шт.) были резистентны ко всем антибиотикам. Ассоциированная резистентность E. coli к 7 антибиотикам была выявлена у 3 штаммов. 66 (23,7%) штаммов S. aureus были одновременно резистентны к рулид – рофецин – ампициллин – доксициклин – ломефлоксацин. Ассоциированная резистентность к 6 антибиотикам рулид – рофецин – ампициллин – доксициклин – ломефлоксацин – ципрофлоксацин была выявлена у 39 (13,9%) штаммов. 18 штаммов были устойчивы ко всем антибиотикам.

Полученные результаты позволяют сформулировать некоторые положения и практические рекомендации, важные для обоснования эмпирической терапии хламидийных уретритов, в этиологии которых существенную роль играли штаммы E. coli, S. aureus и K. pneumoniae. Согласно полученным данным, препаратами выбора для лечения указанных инфекций могли бы стать ципрофлоксацин и гентамицин.

Данные литературы, а также наши наблюдения свидетельствуют о сохранении антибактериальной активности фторхинолонов. Результаты данных по резистентности штаммов E. coli, S. aureus и K. pneumoniae выделенных на территории Дагестана к фторхинолонам показывают, что наиболее эффективным ципрофлоксацин был в отношении штаммов S.aureus и K.pneumoniae, а штаммы E. coli были более устойчивы. Наиболее активным гентамицин был в отношении штаммов E. coli.

Β-лактамные антибиотики проявляли слабую активность в отношении выделенных штаммов. Резистентность к рофецину выделенных штаммов, была более достаточно выраженной, что объясняется низкой продукцией бета – лактамаз штаммами, что согласуется с литературными данными показывающими, что у больных с такой патологией, было выявлено только 5% E. coli продуцирующих БЛРС [12].

Таким образом, УПМ изолированные из мазков и соскобов цервикального канала обследованной группы женщин репродуктивного возраста со смешанной хламидийной инфекцией, были наиболее чувствительны к цефалоспоринам III-IV поколения, фторхинолонам, имипинемам, ванкомицинам и устойчивы (энтеробактерии) к пенициллинам, что необходимо учитывать при составлении адекватных схем лечения у женщин с данной патологией.

Антибиотикорезистентность – глобальная проблема. Нет страны, которая могла бы позволить себе игнорировать ее, и нет страны, которая могла бы не отвечать на нее. Только одновременно проводимые действия по сдерживанию роста антибиотикорезистентности в каждой отдельной стране могут дать положительные результаты во всем мире.

Конфликт интересов Не указан.

Conflict of Interest None declared.

Список литературы / References

1. Айламазян Э.Х. Генитальный хламидиоз - проблема бесплодия / Э.Х. Айламазян, И. И. Евсюкова // Журнал акушерства и женских болезней. 2000; 2: 7-12.
2. Белозоров А.П. Сравнительный анализ некоторых новых методов диагностики урогенитального хламидиоза / А.П. Белозоров, О.И. Федец, Е.И. Милютина, С.К. Джораева //Дерматология и венерология. 2001; 11 (1): 42-44.
3. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций / Г.А. Дмитриев. М: Медицинская книга; 2003: 7-9.
4. Омарова С.М. Изучение методов диагностики хламидийных уретритов смешанной этиологии / С.М. Омарова, М.О. Муслимов, Ф.С. Акаева // Росс иммунол журн РАН. 2015; 9 (8), 2(1): 141-142.
5. Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности / В.М. Сидельникова. М.: Триада-Х, 2005; 304.
6. Хрянин А.А. Хламидийные инфекции: от науки к практике / А.А. Хрянин, О.В. Решетников,. Киев: Издательство ООО Тетрис-принт; 2012: 180.
7. Хрянин А.А. Хламидиоз у женщин: сопоставление разных методов диагностики, факторы риска и клинические проявления / А.А. Хрянин, О.В. Решетников, Н.А. Кривечук, Е.А. Гущин, О.А. Алаева // Вест. дермотол. венерол 2006; 2: 40-43.
8. Ofloxacin. A reappraisal of its use in the management of genitourinary tract infections. Onrust SV, Lamb HM, Balfour JA. Drugs. 1998 Nov; 56 (5):895-928].
9. Antibiotic resistance in outpatient urinary isolates: final results from the North American Urinary Tract Infection Collaborative Alliance (NAUTICA). GG, Hisanaga TL, Laing NM, DeCorby М-Р, Nichol KA, Palatnik LP, Johnson J, Noreddin A, Harding GK, Nicolle LE, Hoban DJ; NAUTICA Group. Агенты Int J Antimicrob. 2005 Nov; 26 (5):380-8].
10. Survey of the susceptibility of urinary isolates to antibacterial agents in 2003. Ishikawa K, Hayakawa S, Miyakawa S, Kusaka M, Shiroki R, Hoshinaga K. J Infect Chemother.2005 Feb;11 (1): 44-7.
11. Antimicrobial resistance profiles of dairy and clinical isolates and type strains of enterococci. de Fatima Silva Lopes M, Ribeiro T, Abrantes M, Figueiredo Marques JJ, Tenreiro R, Crespo MT. Int J Food Microbiol. 2005 Авг. 25; 103 (2):191-198.
12. Antibiotic sensitivity of Enterobacteriaceae isolated from women vagina and uterine cervix. Nolewajka-Lasak Я, Rajca M, Kaminski K, Kunicka M, Krol W. Med Dosw Mikrobiol. 2003; 55 (4):351-6.
13. Sexually Transmitted Diseases Treatment Guidelines. MMWR. Recommend and Reports 2015; 64:3: 78-82;

Список литературы на английском языке /References in English

1. Ailamazyan E.Kh. Genital'nyy khlamidioz - problema besplodiya [Genital chlamydia - the problem of infertility]. / Ailamazyan E.Kh., Evsyukova I.I. // Zhurnal akusherstva i zhenskikh bolezney [Journal of Obstetrics and Women's Diseases]. 2000; 2: 7-12. [in Russian]
2. Belozorov A.P. Sravnitel'nyy analiz nekotorykh novykh metodov diagnostiki urogenital'nogo khlamidioza [Comparative analysis of some new methods for diagnosing urogenital chlamydia]. / A.P. Belozorov, O.I. Fedets, E.I. Milyutina, S.K. Joraeva // Dermatologiya i venerologiya [Dermatology and Venereology]. 2001; 11 (1): 42-44. [in Russian]
3. Dmitriev G.A. Laboratornaya diagnostika bakterial'nykh urogenital'nykh infektsiy [Laboratory diagnostics of bacterial urogenital infections] / G.A. Dmitriev. M: Medical book; 2003: 7-9. [in Russian]
4. Omarova S.M., Muslimov M.O., Akaeva F.S. [Study of diagnostic methods for chlamydial urethritis of mixed etiology]. // Ross immunol zhurn RAN [Russ Immun. Joour. of RAS] / Omarova S.M., Muslimov M.O., Akaeva F.S. 2015; 9 (8), 2 (1): 141-142. [in Russian]
5. Sidelnikova V.M. Privychnaya poterya beremennosti [Habitual pregnancy loss] / V.M. Sidelnikova. M.: Triada-X, 2005; 304. [in Russian]
6. Khryanin A.A. Khlamidiynyye infektsii: ot nauki k prakt [Chlamydial infections: from science to practice]. / A.A. Khryanin, O.V. Reshetnikov. – Kiev: Publishing house LLC Tetris-print; 2012: 180. [in Russian]
7. Khryanin A.A. Khlamidioz u zhenshchin: sopostavleniye raznykh metodov diagnostiki, faktory riska i klinicheskiye proyavleniya [Chlamydia in women: comparison of different diagnostic methods, risk factors and clinical manifestations] / Khryanin A.A., Reshetnikov O.V., Krivechuk N.A., Gushchin E.A., Alaeva O.A. // Vest. dermotol. venerol [West. dermotol. Venerol] 2006; 2: 40-43. [in Russian]
8. Ofloxacin. A reappraisal of its use in the management of genitourinary tract infections. Onrust SV, Lamb HM, Balfour JA. Drugs. 1998 Nov; 56 (5):895-928].
9. Antibiotic resistance in outpatient urinary isolates: final results from the North American Urinary Tract Infection Collaborative Alliance (NAUTICA). GG, Hisanaga TL, Laing NM, DeCorby М-Р, Nichol KA, Palatnik LP, Johnson J, Noreddin A, Harding GK, Nicolle LE, Hoban DJ; NAUTICA Group. Агенты Int J Antimicrob. 2005 Nov; 26 (5):380-8].
10. Survey of the susceptibility of urinary isolates to antibacterial agents in 2003. Ishikawa K, Hayakawa S, Miyakawa S, Kusaka M, Shiroki R, Hoshinaga K. J Infect Chemother.2005 Feb;11 (1): 44-7.
11. Antimicrobial resistance profiles of dairy and clinical isolates and type strains of enterococci. de Fatima Silva Lopes M, Ribeiro T, Abrantes M, Figueiredo Marques JJ, Tenreiro R, Crespo MT. Int J Food Microbiol. 2005 Авг. 25; 103 (2):191-198.
12. Antibiotic sensitivity of Enterobacteriaceae isolated from women vagina and uterine cervix. Nolewajka-Lasak Я, Rajca M, Kaminski K, Kunicka M, Krol W. Med Dosw Mikrobiol. 2003; 55 (4):351-6.
13. Sexually Transmitted Diseases Treatment Guidelines. MMWR. Recommend and Reports 2015; 64:3: 78-82;