АНТИГЕННАЯ СТРУКТУРА ГЕМАГГЛЮТИНИНА ВИРУСА ГРИППА В/МАССАЧУСЕТС/02/2012

Грудинин М. П.; Комиссаров А. Б.; Амосова И. В.; Комиссарова К. С.; Царева Т. Р.; Иванова А. А.; Сорокин Е. В.

doi:10.23670/IRJ.2023.138.217

АНТИГЕННАЯ СТРУКТУРА ГЕМАГГЛЮТИНИНА ВИРУСА ГРИППА В/МАССАЧУСЕТС/02/2012

Научная статья

Иванова А. А.

DOI:

https://doi.org/10.23670/IRJ.2023.138.217

Выпуск: № 12 (138), 2023

Предложена:

11.10.2023

Принята:

14.12.2023

Опубликована:

19.12.2023

636

22

XML

PDF

Аннотация

В статье представлены результаты картирования вируснейтрализующих эпитопов в молекуле гемагглютинина вируса B/Массачусетс/2/12. Отбор эскейп-мутантов проводили с помощью восьми моноклональных антител, которые были впервые получены к тяжелой субъединице гемагглютинина данного вируса. Наличие вируснейтрализующей активности у моноклональных антител позволило отобрать 16 эскейп-мутантов этого эталонного штамма. Секвенирование гена, кодирующего последовательность гемагглютинина эскейп-мутантов B/Массачусетс/2/12, и сравнительный анализ предсказанных аминокислотных последовательностей с аминокислотной последовательностью гемагглютинина исходного вируса, позволили идентифицировать замены аминокислотных остатков в положениях 136 и 141, 237 и 240, 196 и 202 в петлях – 140, – 240 и в спирале-190, соответственно. Выявлено, что все указанные замены аминокислотных остатков находятся в рецептор-связывающем кармане гемагглютинина вируса гриппа В и оказывают влияние на его антигенную специфичность.

Ключевые слова:

вирус гриппа B, гемагглютинин, моноклональные антитела.

1. Введение

Вирусы гриппа вызывают ежегодные эпидемии глобального масштаба, которые являются причиной роста смертности в мире, представляя собой серьезную проблему для общественного здравоохранения. Большинство научных исследований посвящено главным образом вирусам гриппа А, тогда как знания об антигенной структуре поверхностных и внутренних антигенов вирусов гриппа В по-прежнему достаточно ограничены

. Согласно современным данным результатом эволюции вирусов гриппа В стало формирование Ямагатской (В/Ямагата/16/88) и Викторианской (В/Виктория/2/87) эволюционных линий в середине 1980-х годов. В человеческой популяции они социркулируют, по меньшей мере, с 2002 года , , . Одна треть от общего числа заболеваний гриппом как правило вызваны вирусом гриппа В , который у детей вызывает тяжелые формы . Следует отметить, что показатели госпитализации и смертности, вызванные вирусом гриппа В, ниже, чем для вирусов гриппа A(H3N2), однако выше, чем для вирусов гриппа A (H1N1pdm09) . Инфекции, вызванные этими вирусами клинически практически неразличимы, поражают все возрастные группы, при этом частота осложнений, как правило, выше у детей младшего возраста и пожилых людей , . Диверсификация вирусов гриппа определяется модификациями в геноме, которые включают нуклеотидные замены, делеции и вставки, а также реассортацию, которая для вирусов гриппа В может происходить между и внутри линий , , . Генетические эволюционные характеристики вирусов гриппа В определялись в различных географических регионах , , , , однако широкомасштабная эволюционная динамика вирусов гриппа В на полногеномном уровне исследована слабо , , . Анализ эволюции вирусов гриппа B показал, что она происходит более медленно, в отличие от вирусов гриппа А . Исследования показали, что гены, кодирующие белки полимеразного комплекса (PB1 и PB2) и гемагглютинина (ГА) вирусов обеих линий эволюционируют независимо даже при высоком уровне реассортации, это вероятно определяется геномной несовместимостью данных сегментов , . Отмечается, что вирусы подобные В/Виктория/2/87 подвергаются более быстрому антигенному дрейфу . Высказано предположение, что различия в эволюционной динамике двух линий обусловлены разными предпочтениями связывания гемагглютинина с клеточным рецептором. В/Виктория/2/87 подобные вирусы способны связываться с клеточными рецепторами в позициях -2,3 и -2,6; в то время как В/Ямагата/16/88 подобные вирусы связываются с остатками сиаловой кислоты исключительно в позиции -2,6 в дыхательных путях человека .

В связи с вышеизложенным мониторинг изменений антигенной структуры поверхностного белка гемагглютинина вирусов гриппа В, и рецептор-связывающих характеристик вируса остаются актуальными задачами, имеющими как научную, так и важную с практической точки зрения значимость. Использование в современной вирусологии вируснейтрализующих моноклональных антител (моноАТ), которые направлены к конкретным иммуногенным сайтам поверхностного антигена, а также, методологии отбора и изучения эскейп-мутантов (ЭМ), позволяет мониторировать возникновение новых генетических/антигенных модификаций вирусов.

2. Методы и принципы исследования

Вирусы гриппа В получены из коллекции вирусов гриппа и ОРВИ ФГБУ «НИИ гриппа им. А.А. Смородинцева» Минздрава России.

Получение вируссодержащей аллантоисной жидкости

Вирусы гриппа культивировали в аллантоисной полости развивающихся куриных эмбрионов согласно Методическим рекомендациям «Выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и куриных эмбрионах и их идентификация» (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 18 апреля 2006 г. No 0100/4430-06-34). Для получения аллантоисной жидкости, содержащей вирус гриппа, 10-11-дневные куриные эмбрионы заражали вирусом гриппа В в дозе от 10 до 100 ЭИД50/0,2 мл, инкубировали 72 часа при температуре 33 ± 0,50 С. Затем эмбрионы охлаждали при температуре +40 С и аллантоисную жидкость, содержащую вирус, собирали и контролировали гемагглютинирующую активность.

Реакция гемагглютинации (РГА), реакция торможение гемагглютинации (РТГА)

РГА и РТГА проводили в соответствии с Методическими рекомендациями «Выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и куриных эмбрионах и их идентификация» (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 18 апреля 2006 г. No 0100/4430-06-34)

. За титр антител принимали наибольшее разведение, при котором полностью подавляется гемагглютинация 4 ГАЕ вируса.

Получение гибридом

Гибридомы – продуценты моноАТ к штамму вируса гриппа В/Массачусетс/2/12 Ямагатской линии получали по методу

в следующей модификации. Мышей линии Balb/с иммунизировали внутрибрюшинно 70 мкг очищенного концентрата вируса, который был получен ультрацентрифугированием в градиенте плотности сахарозы. Через несколько недель мыши были бустированы очищенным концентратом вируса в дозе 50 мкг/мышь. Через три дня после бустирования проводили слияние спленоцитов иммунизированных мышей с клетками мышиной миеломы линии X63Ag8.653 в соотношении 10:1 в присутствии 50% раствора полиэтиленгликоля-2000 в среде Игла DMEM («БиоЛот», Россия). Клонирование гибридом проводили методом предельных разведений. Первичное тестирование клонов проводили иммуноферментным анализом. Гибридные клоны с заданным спектром реагирования реклонировали на селективной среде НАТ («Sigma»). Стабильные клоны гибридом – продуцентов специфических моноАТ криоконсервировали, и в дальнейшем применяли для стимуляции образования асцитов.

Получение эскейп-мутантов

Для отбора ЭМ, штаммы исходного вируса клонировали в присутствии избытка отобранных моноАТ, обладающих выраженной вируснейтрализующей активностью

. Смесь вирус-моноАТ инкубировали в течение часа при 370 С, после чего инфицировали куриные эмбрионы, через 72 часа отбирали аллантоисную жидкость и анализировали в РГА. Отобранные эскейп-мутанты клонировали 3 раза методом предельных разведений, после чего исследовали их способность реагировать с гомологичными и гетерологичными моноАТ.

Секвенирование эскейп-мутантов

Для секвенирования гена НА ЭМ вируса гриппа В/Массачусетс/2/12 РНК выделяли коммерческим набором RNeasy Mini Kit (Qiagen, Германия).

RT-ПЦР. Для амплификации фрагментов гена гемагглютинина применяли набор реагентов AgPath-ID One-step RT-PCR Kit (Ambion, США). Анализ апликонов проводили гель-электрофорезом в 1,7% агарозном геле. Фотосъемка осуществлялась системой мультиплексной визуализации ChemiDoc MP Imaging System (BioRad, США).

Для выделения ДНК ампликонов использовали два метода: набором PCR Purification kit (Quiagen, Германия) или выделяли с помощью DEAE бумаги. Концентрацию ДНК после выделения определяли с помощью спектрофотометра NanoDrop ND-1000 (Thermo, США).

Для секвенирования методом Сэнгера применяли коммерческий набор реагентов ABI PRISM BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, США). В состав реакционной смеси входили: BigDye Terminator – 1 мкл, 5X Sequencing Buffer – 4 мкл, праймер – 1 мкл, ДНК (из расчета 50 нг ДНК в конечном объеме смеси – 10 мкл) – 5 мкл. Конечный объем смеси – 10 мкл. Для увеличения глубины секвенирования каждая реакция была поставлена в двух повторах. Программа секвенирующей реакции: 96oС – 10 сек, 50oС – 5 сек, 60oС – 4 мин (25 циклов). Реакцию секвенирования проводили в термоциклере BioRad CFX96 Real-Time System C100 Thermal Cycler (BioRad, США). Для определения нуклеотидной последовательности использовали 4-канальную автоматизированную систему капиллярного электрофореза и флуоресцентной детекции ДНК-фрагментов ABI prism 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, США). Для капиллярного электрофореза использовали полимеры ABI prism3130 POP-7.

Сборка, хранение и обработка полученных нуклеотидных и предсказанных аминокислотных последовательностей осуществлялись в программе Vector NTI 10 Advance (Invitrogen, США). Для множественного выравнивания полученных нуклеотидных и предсказанных аминокислотных последовательностей с нуклеотидными и аминокислотными последовательностями ГА референсного штамма использовали программу Vector NTI 10 Advance и алгоритм CLUSTAL W.

3. Основные результаты

Характеристика моноАТ к вирусу гриппа В/Массачусетс/2/12 в РТГА

РТГА основана на способности антител ингибировать взаимодействие гемагглютинина с эритроцитарными рецепторами. Значимость данной реакции заключается в возможности оценки уровня взаимодействия моноАТ с антигенными сайтами прежде всего в районе «рецепторного кармана» гемагглютинина. «Рецепторный карман» является исключительной мишенью для вируснейтрализующих моноАТ, блокирующих взаимодействие вируса с клеточным рецептором. Рецепторная область представляет собой вариабельную часть молекулы гемагглютинина, претерпевающую наибольшие изменения в процессе эволюции вируса в результате антигенного дрейфа. Благодаря этому вирус ускользает от действия вируснейтрализующих антител. Взаимодействие моноАТ с гемагглютинином отобранных штаммов в РТГА позволяет оценить антигенные штаммовые различия в рецепторной области, что имеет большое и практическое, и теоретическое значение. МоноАТ к штамму В/Массачусетс/2/12 (Ямагата) проявляли выраженную антигемагглютинирующей активностью исключительно к вирусам, относящимся к этой эволюционной ветви (табл. 1).

Таблица 1 - Взаимодействие моноАТ к В/Массачусетс/2/12 с различными штаммами вируса гриппа В в РТГА

DOI:10.23670/IRJ.2023.138.217.1

Вирусы	Штамм	Титр моноАТ в РТГА
Вирусы	Штамм	1G4	1G9	2B10	3B12	3C2	4E11	5B11	5F11
Вирусы подобные B/Yamagata/16/88	B/Massachusetts/2/12 (генетическая линия 2)	1:327680	1:655 360	1:655 360	1:327680	1:327680	1:20480	1:655 360	1:655 360
	B/Yamagata/16/88	1:10 240	1:81 920	1:40 960	1:10 240	1:20 480	1:20 480	1:163 840	1:20 480
	B/Panama/45/90	1:163 840	1:655 360	1:163 840	1:20 480	1:40 960	1:40 960	1:81 920	1:81 920
	B/Harbin/7/94	1:163 840	1:655 360	1:327 680	1:163 840	1:163 840	1:81 920	1:327 680	1:655 360
	B/Yamanashi/168/98	1:81 920	1:655 360	1:327 680	1:40 960	1:81 920	1:81 920	1:163 840	1:327 680
	B/Victoria/504/00	1:327 680	1:655 360	1:81 920	1:81 920	1:81 920	1:40 960	1:163 840	1:327 680
	B/Shanghai/361/02	1:5 120	1:40 960	1:20 480	1:20 480	1:81 920	1:20 480	1:81 920	1:81 920
	B/Florida/07/04	1:20 480	1:40 960	1:20 480	1:20 480	1:40 960	1:20 480	1:40 960	1:40 960
	B/Florida/04/06 (генетическая линия 1)	1:40 960	1:40 960	1:40 960	1:40 960	1:81 920	1:20 480	1:81 920	1:81 920
	B/Phuket/3073/13 (генетическая линия 3)	1:5 120	1:40 960	1:20 480	1:20 480	1:40 960	1:20 480	1:40960	1:40 960
Вирусы подобные В/Victoria /2/87	B /Shandong/7/97	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80
	B /Malaysia/2506/04	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80
	B/Brisbane/60/08	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80
	B/Brisbane/45/15	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80
Штаммы вирусов гриппа В, выделенные до разделения вирусов на эволюционные линии	B/Li/40	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80
	B/Great Lakes/54	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80
	B/Russia/69	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80
	B/Hong Kong5/72	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80
	B/Singapore/222/79	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80
	B/USSR/100/83	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80	1:80

Следует подчеркнуть, что все моноАТ взаимодействовали со штаммами выделенными, начиная с B/Ямагата/16/88, а также со штаммами, относящимися к генетическим группам 1 (B/Флорида/04/06) и 3 (B/Пхукет/3073/13), которые наиболее широко распространены в мире

, . Таким образом, данные РТГА позволяют говорить, что моноАТ, полученные к гемагглютинину штамма В/Массачусетс/2/12, актуальны с точки зрения идентификации новых изолятов. Кроме того, следует отметить, что моноАТ не ассоциировали со штаммами ранних лет выделения, а также со штаммами Викторианской ветви.

Отбор ЭМ вируса B/Массачусетс/2/12 c помощью моноАТ

В результате проведенных исследований подтверждено, что эскейп-мутанты, полученные с помощью вируснейтрализующих моноАТ, стали незаменимым инструментом для мониторинга изменчивости антигенной структуры ГА и поиска иммунодоминантных эпитопов в структуре ГА1. Установлено, что полученные ЭМ содержали до трех мутаций в гене ГА, которые приводили к специфичным аминокислотным заменам. При этом в РТГА с ЭМ наблюдали 8-32-х-кратное и более снижение титров моноАТ, которые использовали для отбора ЭМ по сравнению с исходным вирусом. Таким образом, было получено 16 ЭМ, устойчивых к действию каждого из моноАТ, в частности, было получено по два ЭМ под действием моноАТ 2B10, 3B12, 3C2, 1G4, 1G9 и 4E11, три – моноАТ 5B11 и один – моноАТ 5F11.

Выявление иммунодоминантных эпитопов в молекуле гемагглютинина вируса B/Массачусетс/2/12

Для выявления иммунодоминантных эпитопов было проведено секвенирование ГА ЭМ вируса B/Массачусетс/2/12. Анализ предсказанной структуры ГА ЭМ вируса B/Массачусетс/2/12 в сравнении со структурой ГА исходного вируса позволил выявить замены аминокислот в шести положениях. Более того, все замены были расположены в районе рецептор-связывающего сайта (РСС) ГА, и касались петель–140, –240, и спирали–190. Исследование двух ЭМ, для моноАТ 1G9, позволил установить, что ЭМ 1G9/1 содержал две замены, в частности глицина на глютаминовую кислоту в положении 141 (Gly→Glu) и глицина на аргинин в положении 237 (Gly→Arg). Аминокислотная замена глицина на глютаминовую кислоту в 141 положении (Gly→Glu) была выявлена также у ЭМ 2B10/1, 2B10/2, 3C2/1, 3C2/2, 1G4/1, 1G4/2. ЭМ 1G9/2 содержал единственную замену 237 Gly→Arg. Выявлено, что ЭМ 3B12/1, отобранный с помощью моноАТ 3B12, содержал единственную замену пролина на глютамин в 240 положении, а ЭМ 3B12/2 0150 две замены - Pro на Gln в 240 и Asn на Lys в 202 положениях, соответственно. Остаток-240 ГА1, по-видимому является частью антигенного сайта, который частично совпадает с антигенным сайтом D ГA штаммов гриппа А субтипа H3

и антигенным сайтом Ca1 ГA штаммов гриппа А субтипа H1 , . Подобные замены Pro→Gln или Thr в 240 положении ранее были обнаружены среди вирусов гриппа В до их расхождения на две эволюционные ветви , а изменение Pro 240 Ser – у штаммов Викторианской ветви . Подобные замены ранее выявлялись у вирусов ветви Ямагата . В исследовании с использованием моноАТ 5В11 было получено три ЭМ. Две одинаковые замены в 136 и 240 положениях, Arg→Ile и Pro→Ser, соответственно, содержали ЭМ 5B11/1 и 5B11/3, тогда как ЭM 5B11/2 кроме замены Arg→Ile в 136 положении имел также аминокислотную замену Gly→Glu в 141 положении.

Следует отметить, что замена-136 имеет важное значение в структуре РСС - остаток Arg в 136 положении обнаружен у 98% вирусов Ямагатской ветви и только у 1% вирусов Викторианской ветви, а штаммы 1972-1982 годов выделения имеют остаток изолейцина

.

В результате пассирования под давлением моноАТ 5F11 был получен только один ЭМ, который имел две замены: в 136 положении Arg→Ile и в 196 положении Asp→Gly. Выше отмечалось, что изменения в 136 положении в петле-140, значимо для формирования структуры рецептор-связывающего сайта. Замена остатка - 196 входящего в спираль -190, влияет на формирование верхней кромки рецептор-связывающего кармана (РСК) ГА вирусов гриппа В. Кроме того, набор остатков-196 на участке 196-198 определяет наличие/отсутствие потенциального сайта N–гликозилирования. ЭМ 4Е11/1 и 4Е11/2 содержали единственную замену Asn 202 Lys, которая располагается в спирале -190 и участвует в образовании РСК. Расположение всех выявленных аминокислотных замен в ГA ЭМ B/ Массачусетс /2/12 представлено на рис. 1.

Рисунок 1 - Расположение аминокислотных замен в молекуле НА1 эскейп-мутантов вируса B/ Массачусетс /2/12

Примечание: А – вид сбоку, Б – вид сверху

На рисунке показано расположение иммунодоминантных эпитопов на пространственной трехмерной модели молекулы ГА1, которая построена на основе идентифицированных эпитопов в ЭМ и опубликованных данных по кристаллической структуре молекулы ГА вируса гриппа B/Яманаши/166/98, PDB code: 4М40 , с помощью программы RasMol, версия 2.7.4.2. А – вид сбоку, Б – вид сверху.

На основании представленных данных можно сделать заключение, что идентифицированные в ходе исследования замены вовлечены в формирование ГА вируса B/Массачусетс/2/12 и влияют на способность связываться с моноАТ.

Влияние замен аминокислотных остатков в молекуле ГА ЭМ вирусов гриппа B/Массачусетс/2/12 на характер взаимодействия с моноАТ

Для оценки влияния замен на характер взаимодействия вируса с моноАТ, было изучено их взаимодействие с ЭМ в перекрестной РТГА (табл. 2). Согласно полученным результатам, все ЭМ слабо реагировали с гомологичными моноАТ, с помощью которых они были получены. В этом случае титры моноАТ варьировали от 1/64 в случае моноАТ 1G4 до 1/2048 в случае моноАТ 5F11.

Таблица 2 - Взаимодействие эскейп-мутантов вируса B/Массачусетс/2/12 с моноАТ в РТГА

DOI:10.23670/IRJ.2023.138.217.3

Эскейп-мутант	АК замена(ы)	Область рецептор-связывающего кармана	Сайт	Титр моноАТ в РТГА
				1G4	1G9	2B10	3B12	3C2	4E11	5B11	5F11
				G141→E	G141→E G237→R	G141→E	N202→K P240→Q	G141→E	N202→K	R136→I G141→E P240→S	R136→I D196→G
1G4/1	G141→E	петля 140	BA	1:5120	1:2560	1:1280	1:81 920	1:640	1:2560	1:655 360	1:327 680
1G4/2	G141→E	петля 140	BA	1:5120	1:2560	1:1280	1:81 920	1:640	1:5120	1:655 360	1:327 680
1G9/1	G141→E G237→R	петля 140 петля 240	BA ----	1:10240	1:1280	1:640	1:40960	1:640	10240	1:327 680	1:163840-327680
1G9/2	G237→R	петля 240	----	1:10240	1:640-1:1280	1:640	1:40960	1:640	1:5120-10240	1:163840-327680	1:81920-1:163840
2B10/1	G141→E	петля 140	BA	1:5120	1:640-1280	1:640	1:81 920	1:320	1:5120	1:327680	1:327680
2B10/2	G141→E	петля 140	BA	1:5120	1:640-1280	1:640	1:163 840	1:320	1:5120	1:327680	1:327680
3B12/1	P240→Q	петля 240	----	1:81 920	1:40960- 81 920	1:20480-40960	1:1280	1:2560	1:1280	1:327680	1:640
3B12/2	N202→K P240→Q	α-спираль 190 петля 240	BB1 ----	1:1280	1:5120	1:2560	1:80	1:640	1:80	1:5120	1:5120
3C2/1	G141→E	петля 140	BA	1:5120	1:2560	1:1280	1:163840	1:640	1:5120	1:655 360	1:655 360
3C2/2	G141→E	петля 140	BA	1:5120	1:1280	1:1280	1:163840	1:640	1:5120	1:655 360	1:655 360
4E11/1	N202→K	α-спираль 190	BB1	1:5120	1:163 840	1:81 920	1:20 480-40960	1:163840	1:160	1:327 680	1:327 680
4E11/2	N202→K	α-спираль 190	BB1	1:5120	1:163 840	1:81 920	1:40960	1:163840	1:160	1:327 680	1:327 680
5B11/1	R136→I P240→S	петля 140 петля 240	BA ----	1:163840	1:163840	1:81 920	1:80	1:163840	1:10240-20480	1:320-640	1:80
5B11/2	R136→I G141→E	петля 140 петля 140	BA BA	1:640	1:5120	1:2560	1:80	1:2560	1:2560	1:10240	1:160-1:320
5B11/3	R136→I P240→S	петля 140 петля 240	BA ----	1:163840	1:327680	1:163840	1:80	1:327680	1:20480	1:640	<1:80
5F11	R136→I D196→G	петля 140 α-спираль 190	BA BB1	1:327680	1:655 360	1:327680-1:655 360	1:80-160	1:327680	1:20480	1:2560	1:320
B/Массачу сетс/2/12	--------	--------	------	1:327680	1:655 360	1:655 360	1:327680	1:327680	1:20480	1:655 360	1:655 360

МоноАТ 1G4, 2В10 и 3С2, узнающие эпитоп в 141 положении, показали значительное снижение титров со всеми ЭМ, несущими замену 141Gly→Glu. В тоже время, моноАТ 1G4 также имели заметное снижение титра до 1/32 при взаимодействии с ЭМ 1G9/2, несущим замену Gly→Arg в 237 положении; ЭМ 4Е11/1 и 4Е11/2 с заменой Asn→Lys в положении 202 до 1/64 титра; ЭМ 3В12/2, содержащий замены Asn→Lys в 202 и Pro→Gln в 240 положении до 1/256 титра. Не выявлено существенного снижения титра при взаимодействии с ЭМ 3В12/1 с единичной заменой Pro→Gln в 240 положении (1/4 титра). МоноАТ 1G4 реагировали с ЭМ 5В11/1 и 5В11/3, содержащими замены Arg 136 Ile и Pro 240 Ser, и с ЭМ 5F11, содержащим замены Arg 136 Ile и Asp 196 Gly, как и с исходным вирусом (1-1/2 тира). Таким образом, установлено, что моноАТ 1G4 распознает эпитопы в положениях 141, 202 и 237.

МоноАТ 2В10 показали снижение взаимодействия до 1/16 титра с ЭМ 3В12/1(замена Pro→Gln в 240 положении) и 1/256 с ЭМ 3В12/2 (замены Asn→Lys и Pro→Gln в 202 и 240 положениях, соответственно). При этом моноАТ 2В10 взаимодействовали до 1/8 титра с ЭМ 4Е11/1 и 4Е11/2 (Asn 202 Lys). ЭМ 5В11/1 и 5В11/3 (Arg 136Ile и Pro 240 Ser) реагировали с моноАТ 2В10 до 1/4-1/8 титра. Можно предполагать, что замены в положениях 202 и 240, Asn → Lys и Pro → Gln, соответственно, особенно в совокупности, значимы для связывания с моноАТ 2В10.

МоноАТ 3С2, в отличии от моноАТ 2В10 и моноАТ 1G4, практически не потеряли способности взаимодействовать с ЭМ 4Е11/1 и 4Е11/2, содержащими Lys-202, однако, резкое снижение титров наблюдали в реакции с ЭМ 3В12/1, содержащим замену Pro→Gln в 240 положении до 1/128 и ЭМ 3В12/2, содержащим Lys-202 и Gln-240 до 1/512 титра. Изменения Arg 136 Ile в, Pro 240 Ser и Asp 196 Gly не отразились на способности моноАТ взаимодействовать с ЭМ. Можно предположить, что в этом варианте, помимо эпитопа в 141 положении, в случае моноАТ 3С2 существенным моментом является конкретный остаток в 240 положении.

МоноАТ 1G9, распознающие замены в 141 и 237 положениях, слабо реагировали с ЭМ, имеющими замены в 141 и 237 положениях. МоноАТ 1G9 проявляли незначительное уменьшение титров взаимодействуя с ЭМ 4Е11/1 и 4Е11/2 (Asn 202Lys) до 1/4, до 1/8-1/16 с ЭМ 3В12/1 (Pro 240 Gln) и резкое падение титров с ЭМ 3В12/2 (остаток лизина и глютамина в 202 и 240 положениях). ЭМ 5В11/1 и 5В11/3 (остаток изолейцина и серина в 136 и 240 положениях, соответственно) связывались с моноАТ на 1/2 – 1/4 титра, а ЭМ 5F11 (остаток изолейцина-136 и глицина-196) взаимодействовал с моноАТ 1G9 подобно исходному вирусу.

МоноАТ 3В12 распознавали остатки аспарагина-202 и пролина-240. МоноАТ 3В12 проявляли одинаковый характер реагирования с ЭМ 1G4, 2В10 и 3С2 (Gln →Glu в 141 положении) до 1/2-1/4 титра. МоноАТ 3В12 одинаково взаимодействовали до 1/8 с ЭМ 1G9/2 (Gln →Arg в 237 положении) и ЭМ 1G9/2, имеющим две замены Gln 141 Glu и Gln 237 Arg. Аналогичное взаимодействие было с ЭМ 4Е11/1 и 4Е11/2 (Asn 202 Lys). При этом, моноАТ 3В12 взаимодействовали до 1/256 с ЭМ 3В12/1 (замена Pro→Gln в 240 положении) и полностью перестали реагировать с ЭМ 3В12/2 (замены Asn→Lys и Pro→Gln в 202 и 240 положениях, соответственно). Аналогично, моноАТ 3В12 утратили способность к связыванию с ЭМ 5В11/1 и 5В11/3 (замены Arg →Ile и Pro→Ser в 136 и 240 положениях, соответственно), ЭМ 5В11/2 (замены Arg →Ile и Gln →Glu в136 и 141 положениях, соответственно). Также моноАТ 3В12 практически полностью перестали реагировать с ЭМ 5F11 (замены Arg →Ile и Asp→Gly в 136 и 196 положениях, соответственно). Таким образом, вероятно, для моноАТ 3В12 наиболее значимыми являются остатки в 240 и 136 положениях, и в меньшей степени – аминокислотные остатки в 202 положении. Анализ ЭМ 4Е11 установил специфичность моноАТ 4Е11 к эпитопу в 202 положении. Действительно, моноАТ 4Е11 взаимодействовали с ЭМ 4Е11/1 и 4Е11/2, содержащими замену Asn→Lys в 202 положении на 1/128 по сравнению с исходным вирусом. Произошла полная утрата способности взаимодействия с ЭМ 3В12/2, содержащим замены Asn→Lys в 202 и Pro→Gln в 240 положениях и значительная – до 1/16 титра с ЭМ 3В12/1 (замена Pro→Gln в 240 положении). Менее значительное снижение титров (на 1/8) произошло в реакции с ЭМ 5В11/2 (замены Arg→Ile в 136 и Gly→Glu в 141 положениях). МоноАТ 5В11, по данным секвенирования ЭМ, были специфичны к эпитопам в положениях 136, 240 и 141. Вызывает удивление тот факт, что моноАТ 5В11 взаимодействовали с ЭМ 1G4, 2В10 и 3С2, имеющими замену Gly→Glu в 141 положении, практически, как и с диким вирусом (отличия в РТГА не более 1/2). При этом, моноАТ 5В11 слабо реагировали с ЭМ 3В12/2 (замены Asn→Lys в 202 и Pro→Gln в 240 положениях), но почти до полного титра (на 1/2) с ЭМ 4Е11/1 и 4Е11/2 (замену Asn→Lys в 202 положении) и ЭМ 3В12/1(замена Pro→Gln в 240 положении). Было отмечено существенное снижение титров с гомологичными ЭМ 5В11/1 и 5В11/3 (замены Arg→Ile в 136 и Pro →Ser в 240, положениях) и менее значимое с ЭМ 5В11/2 (замены Arg→Ile в 136 и Gly →Glu в 141 положениях). Титр моноАТ 5В11 с ЭМ 5F11 (замены Arg→Ile в 136 и Asp→Gly в 196 положениях) был всего 1/256 от исходного вируса. Незначительное снижение титров на 1/2-1/8 показали моноАТ 5F11 с ЭМ 1G9/1 и 1G9/2, которые содержали, замены Gly→Glu и Gly→Arg в 141 и 237 положениях, соответственно. При этом моноАТ 5F11 слабо реагировали с ЭМ 3В12/1 (замена Pro→Gln в 240 положении) и ЭМ 3В12/2 (замены Asn→Lys в 202 и Pro→Gln в 240 положениях). МоноАТ 5F11 очень слабо взаимодействовали с ЭМ 5В11/2 (замены Arg→Ile в 136 и Gly→Glu в 141, положениях) и гомологичным ЭМ 5F11 (Arg 136 Ile и Asp 196 Gly), с ЭМ 5В11/1 и 5В11/3 (Arg 136 Ile и Pro 240 Ser) взаимодействие отсутствовало полностью. Установлено, что ГА вируса гриппа В содержит четыре основные антигенные области: петли-120, -150 и -160, и спираль-190. Эти антигенные участки лежат в непосредственной близости или частично входят в структуру РСС, располагаясь близко в пространстве, и образуют большой протяженный антигенный сайт [34]. Это согласуется с нашими результатами, в случае, когда одно моноАТ распознает детерминанты, находящиеся в двух различных, но пространственно близких антигенных областях.

4. Обсуждение

Анализ антигенной структуры ГА вирусов гриппа В Ямагатской эволюционной ветви имеет большое теоретическое, и практическое значение. В связи с этим, была поставлена цель провести эпитопное картирование молекулы ГА вирусов гриппа B/Massachusetts/2/12 с помощью моноклональных антител и идентифицировать аминокислотные замены, значимые при связывании с вируснейтрализующими антителами.

Селекция ЭМ вируса гриппа B/Massachusetts/2/12 стала возможной благодаря выраженной вируснейтрализующей активности разработанных моноАТ. Было получено 16 ЭМ, устойчивых к вируснейтрализующему действию каждого из используемых моноАТ, по два ЭМ в случае моноАТ 1G4, 1G9, 2B10, 3B12, 3C2 и 4E11, три ЭМ – моноАТ 5B11 – и один ЭМ – моноАТ 5F11.

В результате сравнительного анализа аминокислотных последовательностей ГА ЭМ и ГА исходного вируса установлены замены в шести положениях – 136 и 141 в петле 140, 237 и 240 в петле-240, 196 и 202 в спирале-190.

Оказалось, что большинство замен были расположены в районах, формирующих РСС вирусов гриппа В, а именно в петлях–140 –240 и в спирали–190. Известно, что РСС, находящийся в верхней части молекулы ГА, сформирован спиралью–190 (НА1 193-202) на вершине, петлей–240 (ГА1 237-242) – левая кромка, и петлей–140 (ГА1 136-143) – правый край. При этом четыре аминокислотные остатка в молекуле ГА1 (Phe-95, Trp-158, His-191 и Tyr-202), составляющие основу РСС, высоко консервативны у большинства вирусов гриппа В.

Нами показано, что ряд ЭМ, отобранных с помощью моноАТ 1G4, 2B10 и 3C2, содержали идентичную замену глицина на глютаминовую кислоту (Gly 141 Glu), расположенную в петле–140. В ряде работ было указано, что 141 положение в структуре ГА гриппа В достаточно вариабельно. Так, вирусы с заменой Gly→Val в 141 положении выявлялись еще до расхождения на две филогенетические ветви

, а замена Gly 141 Arg обнаружена у современных вирусов Ямагатской ветви . Кроме того, показано, что некоторые лабораторные варианты вируса гриппа В, такие как, например, выращенные на куриных эмбрионах, проявляли альтернативные антигенные свойства благодаря единичной замене глицина в 141 положении . Было показано, что замена Gly 141 Arg у вируса B/Лион/1271/96 после адаптации к куриным эмбрионам, привела к увеличению сродства к 3′-сиалил(N-ацетиллактозе) и ослаблению связывания с 6′-сиалил(N-ацетиллактозамином). Тогда как вариант того же вируса с Gly в 141 положении, адаптированный к клеткам MDCK, проявлял более высокое сродство с 6′-сиалил(N-ацетиллактозамином) и значительно меньшее сродство к 3′-сиалил(N-ацетиллактозе) . Дополнительно установлено, что содержащий замену Gly→Арг в 141 положении, высокопродуктивный вариант вируса B/Виктория/504/2000 утратил способность связывать гликаны с 2,6 гликозидной связью. Тогда как, исходный вирус B/ Виктория /504/2000 предпочтительно связывался с гликанами с 2,6 гликозидной связью, но имел низкое сродство к гликанам с 2,3 гликозидной связью .

Анализ двух ЭМ, полученных с использованием моноАТ 1G9, показал, что ЭМ 1G9/1 имел две аминокислотные замены глицина на глютаминовую кислоту (Gly → Glu) в 141 позиции и глицина на аргинин (Gly → Арг) в 237 позиции. ЭМ 1G9/2 содержал только замену Gly → Арг в 237 позиции. Примечательно, что обе замены располагаются РСК ГА, но при этом, находятся в двух различных районах - замена Gly → Glu в 141 позиции в петле-140, в тоже время, замена Gly → Арг в 237 позиции - в петле-240. Установлено, что присутствие остатка Gly-237 делает петлю-240 более протяженной, а единичная замена в донном положении обеспечивает переориентацию боковых цепей. Изменение ориентации боковых цепей в последовательности 235-240 ГА1 может кардинально изменять антигенные свойства этого региона (33 Ni F., et al., 2013). Так как, пространственно остатки Gly-237 и Gly-141 находятся близко, по-видимому, замена Gly→Arg в 237 позиции изменяет пространственную структуру таким образом, что это позволяет моноАТ 1G9 распознавать эпитоп в положении 141 ЭМ 1G9/1, имеющего замены Gly 141 Glu и Gly 237 Arg.

Установлено, что ЭМ 4Е11/1 и 4Е11/2 содержали единичную замену Asn 202 Lys. Ранее было обнаружено, что большая часть остатков, окружающих РСК ГА вируса гриппа В, одинаковы у штаммов Ямагатской и Викторианской ветвей, кроме нескольких положений: 163, 198, 202 и 203 (нумерация для вирусов гриппа Викторианской ветви); в случае наличия Asn – 163 потенциального сайта N-гликозилирования в ГА вирусов гриппа В Ямагатской ветви нет

. Более того, отрицательно заряженный аминокислотный остаток Glu в 198, нейтральный остаток Ala в 202 и положительно заряженный остаток Lys в 203 позициях у вирусов Викторианской ветви, находящиеся в спирали 190, замещены у вирусов Ямагатской ветви соответственно на остатки Lys в 197, Lys в 201 и Asn в 202 позициях. Рассматривается, что эти три остатка могут играть существенную роль в специфичности распознавания сиалированных цепей . Установлено, что замена Asn 202 Lys повлияла на рецептор-связывающие свойства ГA вируса гриппа B/Флорида/04/06 Ямагатской ветви, вероятно, увеличив рецепторный репертуар. Таким образом, замена аспарагина в 202 позиции может влиять как на антигенные, так и на рецепторные свойства ГА. Замены в 148, 149, 150 и 203, позициях, прилегающих к сайту связывания рецептора ГА, определяли основные антигенные различия между ранними В/Виктория/2/87 и В/Ямагата/16/88 подобными вирусами .

Показано, что ЭМ 3B12/1 имел единичную замену пролина на глютамин в 240 положении, а ЭМ 3B12/2 содержал две замены Pro 240 Gln и Asn 202 Lys. Ранее замена Pro 240 Ser была обнаружена у ЭМ Викторианской ветви

. Рядом авторов рассматривается вариант, что переориентация боковых цепей в петле 240 влияет на изменение антигенных характеристик этого региона , . Из 8 вариантов ЭМ (V1–V8) вируса В/Осака/983/97 Викторианской ветви, которые были селектированы с помощью моноАТ 10В8, ЭМ V3 и V8 (замена лизина на треонин в 203 положении), утратили способность контактировать с гетерологичным моноАТ 8Е6. Тогда как ЭМ V1 и V2 (замена пролина на серин в 241 положении), отобранные под действием моноАТ 8Е6, реагировали с гетерологичным моноАТ 10В8. Авторы полагают, что остаток в положении 203 входит в структуру или находится вблизи эпитопа моноАТ 8Е6. Установлено, что остатки пролина в 240 и серина в 242 позициях, находятся в эквивалентных положениях к остаткам 226 и 228, соответственно, в ГA штаммов гриппа А субтипа H3. Эти оба остатка вовлечены в качестве основных детерминант рецепторной специфичности . ЭМ 5B11/1 и 5B11/3 имели две одинаковые аминокислотные замены Arg 136 Ile и Pro 240 Ser, в то время как ЭM 5B11/2 имел аналогичную аминокислотную замену Arg→Ile в 136 и аминокислотную замену Gly→Glu в 141 положениях. ЭМ 5F11 имел две аминокислотные замены Arg→Ile и Pro→Gln в 136 и 196 положениях. Ранее было показано, что левый край рецептор-связывающего сайта ГA B/Гонконг/8/73 содержит аминокислотные остатки Pro в 238 и Ser в 240 положениях, находящихся в эквивалентных позициях остаткам 226 и 228, соответственно, в молекуле ГA штаммов гриппа А субтипа H3. Хотя боковая цепочка в случае остатка Pro в 238 позиции короче, чем в случае аминокислотного остатка Leu в 226 позиции в молекуле ГA штаммов вирусов гриппа А субтипа H3, главные цепочки петли-240 в ГА B/ Гонконг /8/73 сдвинуты в сторону петли-140 так, что боковые цепочки атомов, ответственные за взаимодействие с рецепторами, были расположены аналогичным образом . Вероятно, замена остатка Pro в положении 238, придающего жесткую структуру петле-240, на Ser, меняет конформацию молекулы таким образом, что позволяет распознавать антителам остатки в петле-120. С другой стороны, можно предположить, что замены на изолейцин в 136 и серин в 240 положениях являются компенсаторными. Большая часть остатков петли-190 вариабельны. Прежде были описаны ЭМ с единичной заменой в позиции 196, конкретно, аспарагина на аспарагиновую кислоту или лизин, которая приводит к потере потенциального сайта N–гликозилирования , , а также вариантам, адаптированным к росту в куриных эмбрионах . Замена остатка Asp → Gly в 196 позиции не приводила к появлению потенциального сайта N–гликозилирования. Тогда как единичная замена остатка Asp → Tyr в 194 положении у вирусов гриппа В, приспособленных к росту в куриных эмбрионах, значительно меняла антигенные свойства, что свидетельствует об антигенной значимости спирали-190, независимо от прикрепленных к ней гликанов . Спираль-190 гемагглютинина вируса гриппа В частично совпадает с антигенным сайтом D ГA вируса гриппа А субтипа H3 и сайтом Ca1 ГА вируса гриппа А субтипа H1 , . Несомненно, все остатки в структурее спирали-190 играют важную роль в антигенных свойствах ГА вируса гриппа В .

Все остатки на наружной поверхности спирали–190 имеют значимую антигенную роль. Отдельные замены в этой области неоднократно встречались в ЭМ вирусов гриппа, селектированных с использованием моноАТ: Glu 195 Lys, Gln 197 Lys, Val → Ala, Leu или Glu в 199 пзициих

, , Lys 200 Asn, Arg или Thr , , и Ser → Leu или Pro в 205 положении , . Кроме того, исследование ГA вируса гриппа B/Гонконг/73 с использованием сайт-направленного мутагенеза показало, что замены Thr → Pro в 196 и Gln → Ile в 197 позициях полностью подавляют способность моноАТ взаимодействовать с исследуемым вирусом . «Горячей точкой» на спирали–190 является последовательность аминокислотных остатков 194-196 ГA1, представляющая собой потенциальный сайт N-гликозилирования. Вирус с единичной заменой Ala → Thr в 196 положении, которая создает новый потенциальный сайт гликозилирования в последовательности 194-196 ГA1, вызвал эпидемию в Японии . Кроме того, единственная замена остатка Asn → Ser в 194 положении, вызвала различия в антигенной реактивности между двумя циркулирующими B/Ямагата/16/88 подобными штаммами . Таким образом, полученные данные подтверждают ранее полученные результаты о том, что вариабельность остатков в структуре спирали-190 сильно влияет на антигенные свойства гемагглютинина вируса гриппа В .

5. Заключение

В результате проведенных исследований с помощью разработанных моноАТ, обладающих вируснейтрализующей активностью, получены 16 ЭМ эталонного штамма B/Массачусетс/2/12, резистентных к этим моноАТ. Сравнительный анализ предсказанных последовательностей ГА ЭМ B/Массачусетс/2/12 и исходного вируса позволил выявить в ГА1 вируса гриппа В Ямагатской ветви замены в 136 и 141 (петля-140), 196 и 202 (спираль-190) и 237, 240 (петля-240) положениях. Все выявленные аминокислотные замены расположены в участках, которые участвуют в формировании РСК ГА вируса гриппа В и оказывают влияние на антигенную специфичность ГА.

Дополнительные материалы

Не указаны

Финансирование

Министерство здравоохранения Российской Федерации
Работа выполнена в рамках государственного задания № 121052400147-7 «Изучение консервативных и вариабельных эпитопов в молекулах нуклеопротеина и гемагглютинина вирусов гриппа В».

Благодарности

Не указаны

Конфликт интересов

Не указаны

Список литературы

Koutsakos M. Knowns and unknowns of influenza B viruses / M. Koutsakos, T. Nguyen, W.S. Barclay [et al.] // Future Microbiol. — 2016. — 11(1) — Р. 119-135. — DOI: 10.2217/fmb.15.120 — PMID: 26684590.
Kanegae Y. Evolutionary pattern of the hemagglutinin gene of influenza B viruses isolated in Japan: cocirculating lineages in the same epidemic season / Y. Kanegae, S. Sugita, A. Endo et al. // J Virol. —1990. —Vol. 64(6). — P. 2860-2865.
Rota P.A. Cocirculation of two distinct evolutionary lineages of influenza type B virus since 1983 / P.A. Rota, T.R. Wallis, M.W. Harmon et al. // Virology. — 1990. — 175(1). — Р. 59-68. — PMID: 2309452.
Lo Y-C. Surveillance and vaccine effectiveness of an influenza epidemic predominated by vaccine-mismatched influenza B/Yamagata-lineage viruses in Taiwan, 2011—12 season / Y-C. Lo, J-H. Chuang, H-W. Kuo et al. // PLoS One. — 2013. — 8(3):e58222. — DOI: 10.1371/ journal.pone.0058222 — PMID: 23472161.
Yang J-R. Phylogenetic and evolutionary history of influenza B viruses, which caused a large epidemic in 2011—2012, Taiwan / J-R. Yang, Y-P. Huang, F-Y. Chang et al. // PLoS One. — 2012. — 7(10):e47179. — DOI: 10.1371/journal.pone.0047179 — PMID: 23071751.
Garg S. A cluster of patients infected with I221V influenza b virus variants with reduced oseltamivir susceptibility—North Carolina and South Carolina, 2010-2011 / S. Garg, Z. Moore, N. Lee et al. // J Infect Dis. — 2013. — 207(6). — Р. 966-973. — DOI: 10.1093/infdis/jis776 — PMID: 23242536.
McCullers J.A. Fatal influenza B infections: time to reexamine influenza research priorities / J.A. McCullers, F.G. Hayden // J Infect Dis. — 2012. — 205(6). — Р. 870-872. —DOI: 10.1093/infdis/jir865 — PMID: 22291194.
Hong K.W. Clinical manifestations of inﬂuenza A and B in children and adults at a tertiary hospital in Korea during the 2011—2012 season / K.W. Hong, H.J. Cheong et al. // Jpn J Infect Dis. — 2015. — 68. — Р. 20-26. —DOI: 10.7883/yoken.JJID.2013.466.
Heider A. Molecular characterization and evolution dynamics of influenza B viruses circulating in Germany from season 1996/1997 to 2019/2020 / A. Heider, M. Wedde, R. Dürrwald et al. // Virus Res. — 2022. — 322:198926. — DOI: 10.1016/j.virusres.2022.198926.
Chen R. The Evolutionary Dynamics of Human Influenza B Virus / R. Chen, C. Rubing, E.C. Holmes // J Mol Evol. — 2008. — 66(6). — Р. 655-663. —DOI: 10.1007/s00239-008-9119-z — PMID: 18504518.
Dudas G. Reassortment between Influenza B Lineages and the Emergence of a Coadapted PB1-PB2-HA Gene Complex / G. Dudas, T. Bedford, S. Lycett, A. Rambaut // Mol Biol Evol. — 2015. — 32(1). — Р. 162-172. — DOI: 10.1093/molbev/msu287.
Nerome R. Evolutionary characteristics of influenza B virus since its first isolation in 1940: dynamic circulation of deletion and insertion mechanism / R. Nerome, Y. Hiromoto, S. Sugita, et al. // Arch. Virol. — 1998. —Vol. 143(8). — P. 1569-1583.
Cortes-Alcala R. The burden of influenza A and B in Mexico from the year 2010 to 2013: An observational, retrospective, database study, on records from the Directorate General of Epidemiology database / R. Cortes-Alcala, G. Dos Santos, R. DeAntonio et al. //Hum Vaccin Immunother. — 2018. — 10. — Р. 1-9. —DOI: 10.1080/21645515.2018.1456281.
Varghese B. Epidemiology of viral respiratory infections in Australian working-age adults (20-64 years): 2010-2013 / B. Varghese, E. Dent, M. Chilver et al. // Epidemiol Infect. — 2018. — 146(5). — Р. 619-626. — DOI: 10.1017/S0950268818000286. — Epub 2018 Feb 21.
Caini S. Epidemiology of seasonal influenza in the Middle East and North Africa regions, 2010-2016: Circulating influenza A and B viruses and spatial timing of epidemics / S. Caini, C. El-Guerche Séblain, M.A. Ciblak, J. Paget // Influenza Other Respir Viruses. — 2018. — 12(3). — Р. 344-352. — DOI: 10.1111/irv.12544. — Epub 2018 Feb 19.
Korsun N. Genetic characterisation of the influenza viruses circulating in Bulgaria during the 2019-2020 winter season / N. Korsun, I. Trifonova, S. Voleva et al. // Virus Genes. — 2021. — 57(5):401-412. — DOI: 10.1007/s11262-021-01853-w.
Vijaykrishna D. The contrasting phylodynamics of human influenza B viruses / D. Vijaykrishna, E.C. Holmes, U. Joseph et al. // Elife. — 2015. — 4:e05055. —DOI: 10.7554/eLife.05055 — PMID: 25594904.
Bedford T. Global circulation patterns of seasonal influenza viruses vary with antigenic drift / T. Bedford, R. Steven, I.G. Barr et al. // Nature. — 2015. — 523(7559). — Р. 217-220. — DOI: 10. 1038/nature14460 PMID: 26053121.
Virk R.K. Divergent evolutionary trajectories of influenza B viruses underlie their contemporaneous epidemic activity / Virk R.K., J. Jayakumar, I. H. Mendenhall et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. — 2020. — Vol. 117(1). — P. 619-628. — DOI: 10.1073/pnas.1916585116.
Kim J.I. Reassortment compatibility between PB1, PB2, and HA genes of the two influenza B virus lineages in mammalian cells / J.I. Kim, I. Lee, S. Park et al. // Sci Rep. — 2016. — 6:27480. — DOI: 10.1038/srep27480 — PMID: 27270757.
Reina J. The Victoria and Yamagata Lineages of Influenza B Viruses, unknown and undervalued / J. Reina // Rev. Esp. Quimioter. — 2022. — 35(3). — 231-235. — DOI: 10.37201/req/159.2021.
Методические рекомендации «Выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и куриных эмбрионах и их идентификация». Утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 18 апреля 2006 г. № 0100/4430-06-34.
Kohler G. Derivation of specific antibody-producing tissue culture and tumor lines by cell fusion / G. Kohler, C. Milstein // Eur. J. Immunol. — 1976. —Vol. 6. — P. 511-519.
Kaverin N.V. Epitope mapping of the hemagglutinin molecule of a highly pathogenic H5N1 influenza virus by using monoclonal antibodies / N.V. Kaverin, I. Rudneva, E. Govorkova et al. // J.Virol. — 2007. — Vol. 81. — Р. 12911-12917.
Horthongkham N. Epidemiological, Clinical and Virological Characteristics of Influenza B Virus from Patients at the Hospital Tertiary Care Units in Bangkok during 2011-2014 / N. Horthongkham, N. Athipanyasilp, A. Pattama et al. // PLoS One. — 2016. — Vol.7. — 11(7):e0158244. — DOI: 10.1371/journal.pone.0158244.
Tramuto F. The Molecular Epidemiology and Evolutionary Dynamics of Influenza B Virus in Two Italian Regions during 2010-2015: The Experience of Sicily and Liguria / F. Tramuto, A. Orsi, C.M. Maida et al. // Int J Mol Sci. — 2016. — Vol. 17(4): 549. — DOI: 10.3390/ijms17040549.
Wiley D.C. Structural identification of the antibody-binding sites of Hong Kong influenza haemagglutinin and their involvement in antigenic variation / D.C. Wiley, I.A. Wilson, J.J. Skehel // Nature. —1981. —Vol. 289. — P. 373-378.
Caton A.J. The antigenic structure of the influenza virus A/PR/8/34 hemagglutinin (H3 subtype) / A.J. Caton, G.G. Brownlee, J.M. Yewdell, W. Gerhard // Cell — 1982. — 31. — Р. 417-427.
Gerhard W. Antigenic structure of influenza virus haemagglutinin defined by hybridoma antibodies / W. Gerhard, J. Yewdell, M. E. Frankel, R. Webster // Nature. —1981. — Vol. 290. — P. 713-717.
Berton M.T. Antigenic structure of the influenza B virus hemagglutinin: nucleotide sequence analysis of antigenic variants selected with monoclonal antibodies / M.T. Berton, C.W. Naeve, R.G. Webster // J. Virol. — 1984. — Vol. 52. — P. 919-927.
Nakagawa N. Antigenic variants with amino acid deletions clarify a neutralizing epitope specific for influenza B virus Victoria group strains / N. Nakagawa, R. Kubota, T. Nakagawa, Y. Okuno // J. Gen. Virol. — 2001. — Vol. 82. — P. 2169-2172.
Nakagawa N. Neutralizing epitopes specific for influenza B virus Yamagata group strains are in the ‘loop’ / N. Nakagawa, R. Kubota, T. Nakagawa, Y. Okuno // J. Gen. Virol. — 2003. — Vol. 84. — P. 769-773.
Ni F. Structural basis for the divergent evolution of influenza B virus hemagglutinin / F. Ni, E. Kondrashkina, Q. Wang // Virology. — 2013. — Vol. 44. — P. 112-122.
Wang Q. Crystal structure of unliganded influenza B virus hemagglutinin / Q. Wang, F. Cheng, M. Lu et al. // J. Virol. — 2008. — Vol. 82. — P.3011-3020.
Webster R. G. Analysis of antigenic drift in the haemagglutinin molecule of influenza B virus with monoclonal antibodies / R. G. Webster and M. T. Berton // J. Gen. Virol. — 1981. — Vol. 54. — P. 243-251.
Lugovtsev V.Y. Mutational pattern of influenza B viruses adapted to high growth replication in embryonated eggs / V.Y. Lugovtsev, G.M. Vodeiko, R.A. Levandowski // Virus Res. — 2005. — Vol. 109. — P. 149-157.
Govorkova E.A. Selection of receptor-binding variants of human influenza A and B viruses in baby hamster kidney cells / E.A. Govorkova, M.N. Matrosovich, A.B. Tuzikov et al. // Virology. — 1999. — Vol. 262. — P. 31-38.
Lugovtsev V.Y. Changes of the receptor-binding properties of influenza B virus B/Victoria/504/2000 during adaptation in chicken eggs / V.Y. Lugovtsev, D.F. Smith, J.P. Weir // Virology. — 2009. — Vol. 394. — P. 218-226.
Carbone V. Molecular characterization of the receptor binding structure-activity relationships of influenza B virus hemagglutinin / V. Carbone, H. Kim, J.X. Huang et al. // Acta Virol. — 2013. — Vol. 57(3). — P. 313-332.
Wang Y.F. Characterization of glycan binding specificities of influenza B viruses with correlation with hemagglutinin genotypes and clinical features / Y.F. Wang, C.F. Chang, C.Y. Chi et al. // J. Med. Virol. — 2012. — Vol. 84(4). — P. 679-85. — DOI: 10.1002/jmv.23219.
Rosu M.E. Substitutions near the HA receptor binding site explain the origin and major antigenic change of the B/Victoria and B/Yamagata lineages / M.E. Rosu, P. Lexmond, T.M. Bestebroer et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. — 2022. — 119(42):e2211616119. — DOI: 10.1073/pnas.2211616119.
Wiley D.C. The structure and function of the hemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus / D.C. Wiley, J.J. Skehel // Annu Rev Biochem. — 1987. — 56. — Р. 365-94. — DOI:10.1146/annurev.bi.56.070187.002053
Wang Q. Structural basis for receptor specificity of influenza B virus hemagglutinin / Q. Wang, X. Tian, X. Chen, J. Ma // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. — 2007. — Vol. 104. — P. 16874-16879.
Berton M.T. The antigenic structure of the influenza B virus hemagglutinin: operational and topological mapping with monoclonal antibodies / M.T. Berton, Webster R.G. // Virology. — 1985. —Vol. 143. — P. 583-594.
Saito T. Antigenic alteration of influenza B virus associated with loss of a glycosylation site due to host-cell adaptation / T. Saito, Y. Nakaya, T. Suzuki et al. // J. Med. Virol. — 2004. — Vol. 74. — P. 336-343.
Lugovtsev V.Y. Generation of the influenza B viruses with improved growth phenotype by substitution of specific amino acids of hemagglutinin / V. Y. Lugovtsev, G. M. Vodeiko, C. M. Strupczewski et al. // Virology. — 2007. —Vol. 365. — P. 315-323.
Rivera K. Probing the structure of inﬂuenza B hemagglutinin using sitedirected mutagenesis / K. Rivera, H. Thomas, H. Zhang et al. // Virology. — 1995. — 206. — Р. 787-795.
Nakagawa N. Influenza B virus victoria group with a new glycosylation site was epidemic in Japan in the 2002—2003 season / N. Nakagawa, R. Kubota, A. Maeda, Y. Okuno // J Clin Microbiol. — 2004. — 42. — Р. 3295-3297.
Muyanga J. Antigenic and genetic analyses of influenza B viruses isolated in Lusaka, Zambia in 1999 / J. Muyanga, Y. Matsuzaki, K. Sugawara et al. // Arch Virol. — 2001. — 146. — Р. 1667.

Рецензия

Все статьи проходят рецензирование. Но рецензент или автор статьи предпочли не публиковать рецензию к этой статье в открытом доступе. Рецензия может быть предоставлена компетентным органам по запросу.