Скорость регенерации слизистой оболочки желудка при ульцерогенезе является мультифакториальным процессом. Для оценки эффективности гастропротекторных свойств новых фармацевтических субстанций целесообразно оценивать их влияние на скорость регенераторных процессов и восстановление функциональных структур слизистой оболочки желудка. Изучено влияние ГЛФ РУ-64, содержащей в качестве активного вещества субстанцию динитрата 9-[2-(N,N-диэтиламино)]этил-2-фенилимидазо[1,2-a] бензимидазола, на скорость регенерации слизистой оболочки желудка при введении в подсерозный слой желудка 20% уксусной кислоты в объеме 0,03 мл. В качестве препаратов сравнения использовались широко применяемые в терапии язвенной болезни препараты ранитидин и омепразол. Полученные результаты показали, что ГЛФ РУ-64, ранитидин и омепразол оказывают сходный положительный эффект на процессы регенерации стенки желудка в условиях моделирования уксуснокислого язвенного дефекта, снижая степень деструкции тканей до 15, 23 и 10 баллов, соответственно.
1. Введение
Патофизиологические механизмы повреждения слизистой оболочки и образования язв желудка полиэтиологичны. В патогенезе образования пептических повреждений слизистой желудочно-кишечного тракта принципиальными являются нарушения баланса между повреждающими факторами агрессии и механизмами защиты слизистых барьеров, секреции бикарбонатов, микроциркуляции, цитопротекции поверхностного эпителия [1], [2], [3]. При терапии язвенной болезни используются трехкомпонентные схемы включающие ингибиторы протонной помпы, блокаторы Н2 – гистаминовых рецепторов и антибактериальные средства эрадикации Н. pylori. Однако, некоторые авторы отмечают отрицательное влияние некоторых схем терапии на защитные механизмы слизистой в гастродуоденальной зоне [4], [5]. Для оценки эффективности гастропротекторных свойств новых фармацевтических субстанций целесообразно оценивать их влияние на скорость регенераторных процессов и восстановление функциональных структур слизистой оболочки желудка [6], [7].
Цели исследования: изучение влияния готовой лекарственной формы на основе динитрата 9-[2-(N,N-диэтиламино)]этил-2-фенилимидазо[1,2-a]бензимидазола на скорость регенерации слизистой оболочки желудка при повреждении уксусной кислотой с использованием в качестве препаратов сравнения ранитидина и омепразола.
2. Материалы и методы
В эксперименте использовалась готовая лекарственная форма динитрата 9-[2-(N,N-диэтиламино)]этил-2-фенилимидазо[1,2-a]бензимидазола (лабораторный шифр ГЛФ РУ-64, таблетки 60 мг). Таблетки светло-зеленого цвета без запаха, двояковыпуклые, серия №001 от 01.03.2018. Препараты сравнения: ранитидин, омепразол. Доза для ГЛФ РУ-64, равна ЕD50, рассчитана на основании данных, полученных на модели ацетатного повреждения для фармацевтической субстанции (30 мг/кг). Для ранитидина (30 мг/кг) и омепразола (3,0 мг/кг) дозы рассчитаны исходя из суточной дозы для человека с использованием соответствующих коэффициентов пересчета (для человека – 39, для крыс – 6). Эксперименты выполнены на крысах-самцах линии Wistar массой 180-250 г. Животные содержались в соответствии с требованиями постановления Главного государственного санитарного врача РФ от 29.08.2014 №51 «Об утверждении СП 2.2.1.3218-14 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев). Моделирование хронического язвенного поражения проводилось введением в подсерозный слой желудка 20% уксусной кислоты в объеме 0,03 мл [8]. Для этого животным была проведена срединная лапаротомия под хлоралгидратным наркозом (350 мг/кг), с помощью тонкой иглы в подсерозный слой вводилась уксусная кислота. Исследуемые ГЛФ РУ-64 и препараты сравнения вводились ежедневно в течение 14-ти дней в лечебных целях 1 раз в сутки в утренние часы до начала кормления животных. Через 2 недели животные подвергались эвтаназии. После вскрытия брюшной полости желудки были изъяты, промыты физиологическим раствором и заложены в формалин для дальнейших гистологических исследований. Затем были изготовлены срезы, которые окрашивались гематоксилин-эозином и изучены под микроскопом с последующим описанием гистологической картины и оценкой глубины поражения стенки желудка. Срезы органов и тканей были изготовлены с использованием санного микротома. Микрофотографические снимки производили с помощью микроскопа LeicaVision DM 100 совмещенным с цифровой камерой и компьютером [9].
Исследования выполнялись в соответствии с Национальным стандартом РФ ГОСТ Р 53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики» и приказом Минздрава России от 01.04.2016 г. №199н «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики» [10].
Распределение экспериментальных животных по группам
№ группы | Тип группы | n | Вводимые вещества, | Доза |
1 | контрольные | ♂ | 20% уксусная кислота | 0,03 мл в подсерозный слой желудка однократно |
2 | опытные | ♂ | 20% уксусная кислота | 0,03 мл в подсерозный слой желудка однократно |
ГЛФ РУ-64 | 30 мг/кг внутрижелудочно в течение 14 дней | |||
3 | сравнение 1 | ♂ | 20% уксусная кислота | 0,03 мл в подсерозный слой желудка однократно |
Ранитидин | 30 мг/кг внутрижелудочно в течение 14 дней | |||
4 | сравнение 2 | ♂ | 20% уксусная кислота | 0,03 мл в подсерозный слой желудка однократно |
Омепразол | 3,0 мг/кг внутрижелудочно в течение 14 дней |
3. Результаты исследования и их обсуждение
При гистологическом исследовании желудков крыс контрольной группы патологический процесс распространялся в поджелудочное пространство с пенетрацией на поджелудочную железу, а также частично на печень при локализации в антральном отделе. Дефект слизистой представлял собой хроническую язву с каллезными краями, где дно язвы составляла соединительная ткань различной степени зрелости. При гистологическом исследовании срезы производились по краю язвы на границе дно язвы – слизистая для того, чтобы оценить характер возможной эпителизации дефекта и реакцию желез. В связи с тем, что четкую границу патологических изменений определить микроскопически невозможно, мы не использовали морфометрию с расчетом глубины повреждения, а только полуколичественный метод, позволяющий определить наличие дефекта или его отсутствие. Также нами был использован метод окраски срезов по ван Гизон для определения волокон коллагена, в связи с тем, что в большинстве случаев дно язвы и, в особенности, периферическая зона включала пролиферацию соединительной ткани, как в плане замещения дефекта, так и отграничения зоны повреждения, что сопровождалось фиброзом подслизистого слоя и собственной пластинки. Полная регенерация слизистой наблюдалась только в тех случаях, где не было повреждения мышечного слоя. Однако гиперплазия желез в ряде случаев сопровождалась их кистозной трансформацией.
Макрофотографии слизистой желудка исследуемых групп при моделировании уксуснокислых язв
В качестве иллюстрации приведены макрофотографии типичной картины зоны дефекта (таблица 2).Макроскопическая оценка образующихся дефектов была несколько затруднена в связи с размытостью границ регенераторного процесса, поэтому гистологические исследования носят более объективный характер. Микрофотографии наиболее типичных изменений и их описание представлены в таблице 3.
Результаты патоморфологической оценки влияния ГЛФ РУ-64 и препаратов сравнения при моделировании уксуснокислых язв на 14-й день после введения 20% уксусной кислоты в подсерозный слой желудка
Оценку противоязвенного действия изучаемой ГЛФ РУ-64 и препаратов сравнения в условиях моделирования хронической язвы вели с использованием системы баллов. Баллы присуждались определенному типу изменения тканей, обнаруженному гистологически. Если описываемое изменение носило признаки полноценной регенерации, значение балов было отрицательным. Суммарное количество баллов отражало интенсивность регенераторных процессов и имело обратно пропорциональную зависимость от степени деструкции тканей (таблица 4).
Оценка влияния ГЛФ РУ-64 на регенераторные процессы в стеке желудка на 14-й день после моделирования уксуснокислой язвы
Вид дефекта | за единицу проявления | Через 14 дней | 30 мг/кг | Ранитидин 30 мг/кг | 3 мг/кг |
Пенетрация в печень, поджелудочную железу, сальник | +3 | +9 | +4 | +2 | +9 |
Абсцесс | +2 | - | - | +2 | +2 |
Все слои сохранены | -3 | - | -12 | -12 | -6 |
Скудная лейкоцитарная инфильтрация | +1 | +1 | +1 | +1 | +1 |
Диффузная лейкоцитарная инфильтрация | +2 | +14 | +8 | +10 | +8 |
Типичное строение слизистой | -2 | - | -2 | -2 | -14 |
Реактивная гиперплазия желез | +1 | +7 | +2 | +4 | +2 |
Кистозные изменения желез | +2 | - | +2 | +4 | +8 |
Фиброз | +2 | +16 | +6 | +8 | +8 |
Неравномерное, хаотичное расположение волокон коллагена | +2 | +10 | +4 | +6 | +10 |
Итого баллов | 10 | 57 | 15 | 23 | 10 |
Результаты показали, что во всех экспериментальных группах, наблюдалась выраженная положительная регенераторная динамика. Так, в контрольной группе сумма баллов составила 57. ГЛФ РУ 64 в дозе 30 мг/кг способствовала активации регенераторных процессов, что выражалось в снижении степени деструкции на 26% относительно контроля. Ранитидин в дозе 30 мг/кг также активировал регенераторные процессы в области язвенного дефекта и снижал степень деструкции на 40%, а омепразол в дозе 3 мг/кг кг на 17,5% соответственно.
4. Заключение
Исследуемая готовая лекарственная форма на основе динитрата 9-[2-(N,N-диэтиламино)]этил-2-фенилимидазо[1,2-a] бензимидазола, ранитидин и омепразол оказали сходный положительный эффект на процессы регенерации стенки желудка в условиях моделирования уксуснокислого язвенного дефекта, снижая степень деструкции тканей до 15, 23 и 10 баллов соответственно.
The additional file for this article can be found as follows:
Further description of analytic pipeline and patient demographic information. DOI:
None