1. Введение

Высокий интерес к гидроксикоричным кислотам (ГКК) обусловлен их широким спектром фармакологической активности и низкой токсичностью [1], [2], что стимулирует поиск новых растительных источников этих ценных соединений. Буквица лекарственная (Betonica officinalis L.) представляет собой перспективный источник HCA, а также других биологически активных веществ.

Химический состав буквицы лекарственной достаточно разнообразен и включает эфирные масла (с преобладанием -мууролена, -кариофиллена, бензальдегида и фитола), флавоноиды (ориентин, лютеолин-7-глюкозид, апигенин-7-глюкозид, апигенин-3-глюкозид, апигенин, цинарозид), гидроксикоричные кислоты (хлорогеновая, феруловая, кофейная и розмариновая кислоты), жирные кислоты (линолевая и линоленовая), а также дубильные вещества и сапонины. Такое разнообразие состава обуславливает широкий спектр фармакологических свойств этого растения [3], [4].

Буквица лекарственная — это многолетнее травянистое растение, широко распространенное в Европе (за исключением северных и средиземноморских регионов), Западной Сибири, на Кавказе, в Северной Анатолии и северо-западной Африке, произрастающее на высоте до 450 метров над уровнем моря.

Для стандартизации лекарственного растительного сырья и успешного внедрения травы буквицы в медицинскую практику необходимо разработать воспроизводимые методики качественного и количественного анализа, выбрать оптимальные методы (например, cпектрофотометрию), оптимизировать условия экстракции и установить четкие показатели качества. Важным этапом является разработка соответствующей нормативной документации.

Одним из наиболее распространенных методов количественного определения ГКК является прямая спектрофотометрия, широко используемая как зарубежными, так и отечественными исследователями

[5] [6], [7][8]—[9]

В медицине буквица лекарственная используется благодаря ее вяжущим, противовоспалительным, противогеморрагическим, противоревматическим, цитотоксическим и противогрибковым свойствам. Показаниями к применению являются гастроинтестинальные расстройства, нервные заболевания, воспаления полости рта и горла, заболевания верхних дыхательных путей, кашель, мигрень и инфицированные раны [10], [11].

2. Методы и принципы исследования

Для подтверждения присутствия гидроксикоричных кислот в траве буквицы использовали тонкослойную хроматографию (ТСХ)

[6][9]——«»[6][8][9]

Разработанный способ предназначен для эффективного извлечения и количественного определения содержания гидроксикоричных кислот (ГКК) в траве Betonica officinalis с целью оценки качества лекарственного растительного сырья. Метод базируется на разовой экстракции ГКК этанолом различной концентрации (95%, 70% и 40%) с последующей термообработкой на кипящей водяной бане в течение получаса. Количественный анализ осуществляют спектрофотометрическим методом на спектрофотометре СФ-102, фиксируя оптическую плотность спиртового извлечения при длине волны 330 нм. Точную массу (1,0 г) размельченного растительного материала помещают в колбу вместимостью 250 мл с притертой пробкой. К подготовленному сырью прибавляют 200 мл выбранного растворителя - этанола необходимой концентрации. После охлаждения полученный экстракт процеживают через бумажный фильтр, предварительно увлажненный тем же спиртом. Первые 10 мл отфильтрованного раствора не используют (полученный раствор именуют как раствор А). В мерную колбу объемом 50 мл вносят 1,0 мл раствора А и доводят объем до необходимой отметки тем же растворителем (полученный раствор определяется как раствор Б). В роли раствора сравнения выступает чистый этанол соответствующей концентрации. Количество суммарных гидроксикоричных кислот рассчитывали, используя формулу (1):

где, D

—

m

—

W

—

497

—

3. Основные результаты и обсуждение

Результаты хроматографического анализа показали следующие данные: оранжевое пятно с Rf = 0,53 (совпадает с СО хлорогеновой кислотой), желтое пятно с Rf = 0,62 (совпадает с СО лютеолин-7-глюкозидом). Рекомендации по проведению качественного анализа: использовать хлорогеновую кислоту в качестве вещества-стандарта и производить расчет значений Rf для подтверждения идентичности компонентов. Методологические особенности: сравнение Rf исследуемых веществ с Rf стандартных образцов позволяет достоверно идентифицировать компоненты. Наличие характерных цветов пятен (оранжевый и желтый) дополнительно подтверждает идентификацию. Такой подход к анализу позволяет: достоверно идентифицировать присутствующие компоненты, подтвердить качество исследуемого сырья, обеспечить воспроизводимость результатов анализа. Использование хлорогеновой кислоты как стандартного образца особенно рационально, так как она является одним из основных компонентов в исследуемом материале и имеет характерные показатели Rf и цвет пятна.

В результате исследования спектральных характеристик были обнаружены два пика поглощения: дополнительный, в виде «плеча» при 290±2 нм, и основной максимум при 330±2 нм. Появление максимума в обозначенной точке (330±2 нм) является диагностическим признаком наличия гидроксикоричных кислот. Количественная оценка содержания осуществлялась с помощью спектрофотометрического определения. Измерения оптической плотности проводились при λ = 330±2 нм. Расчеты выполнены в пересчете на хлорогеновую кислоту, с использованием коэффициента удельного поглощения, равного 497 (λ=330 нм) [6], [12], [13]. Устранение потребности в применении стандартного образца хлорогеновой кислоты обеспечивает упрощение аналитического процесса и снижение себестоимости анализа. 

Размер частиц 1 мм обеспечивает оптимальную поверхность контакта сырья с экстрагентом, 40% этиловый спирт является оптимальным растворителем для извлечения гидроксикоричных кислот, соотношение 1:200 гарантирует достаточное количество экстрагента для максимального извлечения, 30-минутная экстракция обеспечивает полное извлечение компонентов при температуре 90°C, данная температура ускоряет процесс экстракции без разрушения термолабильных компонентов. Необходимо тщательно измельчать сырье до однородного состояния и соблюдать точное соотношение сырья и экстрагента, контролировать температуру водяной бани, обеспечивать равномерное перемешивание. Данная методика позволяет получить максимально полное извлечение гидроксикоричных кислотиз травы буквицы при сохранении их качественных характеристик. Она может быть рекомендована для анализа и контроля качества растительного сырья.

Выбор сделан в пользу одностадийного процесса экстракции, так как происходит минимизация ошибок при пробоподготовке, сокращение времени анализа, простота выполнения процедуры, уменьшение потерь аналитика, повышение воспроизводимости результатов. 

Выявлено, что содержание гидроксикоричных кислот, при использовании в качестве экстрагента этанола 40% составляет 3,46%.

Проведена метрологическая оценка методики определения суммы гидроксикоричных кислот

[9]

4. Заключение

В результате исследования подтверждено наличие хлорогеновой кислоты методом тонкослойной хроматографии (ТСХ).

В рамках исследования разработана и валидирована методика количественного определения суммы ГКК в растительном сырье, основанная на принципе прямой спектрофотометрии при длине волны 330 нм. Количественный анализ проводился с использованием хлорогеновой кислоты в качестве стандарта. Для достижения максимального выхода ГКК были оптимизированы параметры экстракции:

- размер частиц сырья: 1 мм;

- экстрагирующий агент: 40% водный раствор этанола;

- соотношение «сырье/экстрагент»: 1:200 (г/мл);

- продолжительность экстракции: 30 минут;

- температура экстракции: кипящая водяная баня.

Применение разработанной методики к исследованному образцу позволило установить содержание ГКК на уровне 3,46% в пересчете на хлорогеновую кислоту. Полученные результаты свидетельствуют о пригодности разработанной методики для рутинного количественного определения содержания ГКК в растительных материалах. Методика может быть рекомендована для использования при разработке фармакопейных статей и другой нормативной документации, направленной на стандартизацию новых видов лекарственного растительного сырья, содержащего гидроксикоричные кислоты, поскольку обеспечивает надежное и воспроизводимое определение.

The additional file for this article can be found as follows: